一种抑制人PTPRU基因并促进细胞自噬的siRNA及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种抑制人PTPRU基因并促进细胞自噬的siRNA及其应用。具体地，本发明专利技术提供了特异性靶向PTPRU基因的siRNA前体序列以及由其产生的siRNA，可显著降低PTPRU mRNA和蛋白的表达水平，促进细胞自噬，对胶质瘤产生显著的杀伤效果。著的杀伤效果。

【技术实现步骤摘要】
一种抑制人PTPRU基因并促进细胞自噬的siRNA及其应用


[0001]本专利技术涉及生物医药与基因治疗领域，更具体涉及一种靶向人PTPRU基因的siRNA及其在制备抗肿瘤(尤其胶质瘤)药物中的应用。

技术介绍

[0002]PTPRU(Protein Tyrosine Phosphatase Receptor Type U)，是受体型蛋白酪氨酸磷酸酶家族的一员，由于其可以独立影响自身引导的细胞信号传导，也可以调节细胞粘附，PTPRU已经显示具有超出抑制酪氨酸激酶活性的功能。研究表明，PTPRU还被认为具有抑癌的潜力。但当前有关PTPRU的研究主要集中在黑色素瘤、肺癌、结直肠癌与胃癌，PTPRU与神经胶质瘤的关系还未阐明。
[0003]神经胶质瘤是一组由胶质细胞起源的脑肿瘤，根据其肿瘤细胞形态与正常脑胶质细胞的相似程度可以划分成许多不同类型。大多数胶质瘤的特征是周边大脑组织弥漫性浸润性生长，特别是对于高级别恶性胶质瘤，使用传统手术切除与放化疗结合的治疗方法是几乎不可能治愈患者的，延长患者生存时间的作用也较为有限。靶向基因治疗在将来可能是浸润性脑胶质瘤治疗的最佳方法。
[0004]因此，本领域迫切需要开发靶向治疗神经胶质瘤的方法和药物。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的就是提供一种靶向治疗神经胶质瘤的方法和药物。本专利技术的方法和药物以人PTPRU基因为靶标。
[0006]在本专利技术的第一方面，提供了一种抑制PTPRU基因表达的siRNA，所述siRNA的正义链核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
[0007]在另一优选例中，所述siRNA的反义链核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
[0008]在另一优选例中，所述siRNA在3
’
端带有2个游离碱基。
[0009]在本专利技术的第二方面，提供了一种前体序列，其5
’
至3
’
端具有式I所示的结构：
[0010][0011]其中B1为所需要的第一核糖核酸序列，其包括如本专利技术第一方面所述的siRNA的正义链序列；
[0012]B2为与B1基本互补或完全互补的序列，且B2与C不互补；
[0013]C为茎环结构序列，较佳地为：CUCGAG；
[0014]A1为无或酶切位点粘性末端序列；
[0015]A2为无或含有连续5
‑
6个U的转录终止序列。
[0016]在另一优选例中，所述正义链序列为如SEQ ID NO:1所示的序列。
[0017]在另一优选例中，所述B2为如SEQ ID NO:2所示的序列。
[0018]在另一优选例中，所述A1为CCGG。
[0019]在另一优选例中，所述A2为UUUUUUG。
[0020]在另一优选例中，所述前体序列具有如SEQ ID NO:3所示的序列。
[0021]在本专利技术的第三方面，提供了一种多核苷酸，所述多核苷酸能被宿主转录形成如本专利技术第二方面所述的前体序列。
[0022]在另一优选例中，所述多核苷酸包括如SEQ ID NO:5所示的序列和/或如SEQ ID NO:6所示的序列。
[0023]在本专利技术的第四方面，提供了一种表达载体，所述表达载体含有如本专利技术第三方面所述的多核苷酸，或表达如本专利技术第二方面所述的前体序列。
[0024]在另一优选例中，所述表达载体包括病毒载体、非病毒载体。
[0025]在另一优选例中，所述表达载体为质粒。
[0026]在另一优选例中，所述病毒载体包括慢病毒载体。
[0027]在另一优选例中，所述表达载体含有启动子、复制起点和标记基因。
[0028]在另一优选例中，所述表达载体包括如SEQ ID NO:5所示的序列和/或如SEQ ID NO:6所示的序列。
[0029]在本专利技术的第五方面，提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞含有如本专利技术第四方面所述的表达载体。
[0030]在另一优选例中，所述宿主细胞为哺乳动物细胞。
[0031]在本专利技术的第六方面，提供了一种产生siRNA的方法，所述方法包括：
[0032](i)将如本专利技术第四方面所述的表达载体转染入宿主细胞；和
[0033](ii)培养所述宿主细胞，从而在所述宿主细胞中产生siRNA。
[0034]在另一优选例中，所述方法还包括从所述宿主细胞中获得产生的siRNA。
[0035]在另一优选例中，所述方法在体外、为非治疗目的而实施。
[0036]在本专利技术的第七方面，提供了一种用于实施RNA干扰或产生siRNA的试剂盒，所述试剂盒包括：
[0037](Z1)容器，所述容器中装有如本专利技术第四方面所述的表达载体；和
[0038](Z2)使用说明书，所述说明书记载了利用所述试剂盒产生siRNA或实施RNA干扰的方法。
[0039]在本专利技术的第八方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物含有：
[0040](a)如本专利技术第一方面所述的siRNA、如本专利技术第二方面所述的前体序列、如本专利技术第三方面所述的多核苷酸、如本专利技术第四方面所述的表达载体，或如本专利技术第五方面所述的宿主细胞；和
[0041](b)任选的药学上可接受的载体。
[0042]在另一优选例中，所述药物组合物为液体剂型。
[0043]在另一优选例中，所述药物组合物为注射剂。
[0044]在另一优选例中，所述药物组合物为脂质体或外泌体制剂。
[0045]在另一优选例中，所述药物组合物还包括其它预防或治疗胶质瘤的药物。
[0046]在另一优选例中，所述其它预防或治疗胶质瘤的药物选自下组：细胞毒素性化疗药物、免疫抑制类药物、靶向药物，或其组合。
[0047]在另一优选例中，所述其它预防或治疗胶质瘤的药物选自下组：替莫唑胺、环磷酰胺、长春新碱、洛莫司汀、丙卡巴肼、贝伐珠单抗、度伐利尤单抗、阿瓦斯汀、吉非替尼，或其组合。
[0048]在本专利技术的第九方面，提供了如本专利技术第一方面所述的siRNA、如本专利技术第二方面所述的前体序列、如本专利技术第三方面所述的多核苷酸、如本专利技术第四方面所述的表达载体，或如本专利技术第五方面所述的宿主细胞的用途，用于制备组合物或制剂，所述组合物或制剂用于：
[0049](i)预防和/或治疗胶质瘤；和/或
[0050](ii)抑制PTPRU基因表达。
[0051]在另一优选例中，所述胶质瘤包括高级别胶质瘤和低级别胶质瘤。
[0052]在另一优选例中，所述胶质瘤为胶质母细胞瘤。
[0053]在本专利技术的第十方面，提供了一种抑制PTPRU基因表达，或预防和/或治疗胶质瘤的方法，所述方法包括步骤：将治疗有效量的如本专利技术第一方面所述的siRNA、如本专利技术第二方面所述的前体序列、如本专利技术第三方面所述的多核苷酸、如本专利技术第四方面所述的表达载体、如本专利技术第五方面所述的宿主细胞，或如本专利技术第八方面所述本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抑制PTPRU基因表达的siRNA，其特征在于，所述siRNA的正义链核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。2.一种前体序列，其特征在于，其5
’
至3
’
端具有式I所示的结构：其中B1为所需要的第一核糖核酸序列，其包括如权利要求1所述的siRNA的正义链序列；B2为与B1基本互补或完全互补的序列，且B2与C不互补；C为茎环结构序列，较佳地为：CUCGAG；A1为无或酶切位点粘性末端序列；A2为无或含有连续5
‑
6个U的转录终止序列。3.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸能被宿主转录形成如权利要求2所述的前体序列。4.如权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸包括如SEQ ID NO:5所示的序列和/或如SEQ ID NO:6所示的序列。5.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有如权利要求3或4所述的多核苷酸，或表达如权利要求2所述的前体序列。6.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有如权利要求5所述的表达载体。...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡泽岚，蔡忆川，邹蓉，宋周志，姜海燕，张淑琴，周坤鹏，尹庆烨，
申请(专利权)人：华东理工大学，
类型：发明
国别省市：