一种诱导基因表达的茎环DNA结构及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种诱导基因表达的茎环DNA结构及其应用，涉及生物技术领域。本发明专利技术包括：针对特定的指标基因X，设计基因X第一个外显子(Exon1)的反义序列(E1

【技术实现步骤摘要】
一种诱导基因表达的茎环DNA结构及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，特别是涉及一种诱导基因表达的茎环DNA结构及其应用。

技术介绍

[0002]目前，基因表达调控技术早已被广泛应用到生物医学研究领域。基因过表达以及敲降是常用的基因表达调控技术：对于基因过表达，我们可以导入外源基因也可以表达转录因子转录激活体内目的基因。对于基因沉默，我们可以通过导入外源shRNA和转录抑制等方式完成。敲降的手段多种多样，如化学合成小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)、载体构建短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)、针对基因组敲降的CRISPR/Cas9、针对RNA的CRISPRi等。在之前的研究中用的较多的小双链RNA可以高效、高特异性地阻断体内特定基因表达，促使目的基因mRNA降解，诱使细胞表现出特定基因缺失的表型，即称为RNA干扰，或称转录后基因沉默技术。基因过表达的基本原理是通过人工构建的方式在目的基因上游加入调控元件，使基因可以在人为控制的条件下实现大量转录和翻译，从而实现基因产物的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种诱导基因表达的茎环DNA结构，其特征在于，具体是针对特定的指标基因X，设计基因X第一个外显子(Exon1)的反义序列(E1
‑
AS)，然后在两端添加5
‑
10个G和C组成的多聚序列，最终形成20
‑
40nt的茎环DNA(StemDNA)结构；该茎环DNA(StemDNA)结构组成为：C(n)
‑
靶向序列(Tarseq:E1
‑
AS)
‑
G(n)。2.根据权利要求1所述的一种诱导基因表达的茎环DNA结构，其特征在于，所述基因X选取为TNF基因，设计该TNF基因的第一外显子的反义序列，然后在两端添加9个G和C组成的多聚序列，最终形成38nt的茎环DNA(StemDNA)结构，对应的序列如下SEQ ID NO.1所示：TNF
–
AS1:CCCCCCCCCTACTCGTGACTTTCGTACTAGGGGGGGGG(SEQ IDNO.1)。3.根据权利要求2所述的一种诱导基因表达的茎环DNA结构，其特征在于，设计识别反向PCR扩增引物，扩增所述TNF基因的接口及侧翼序列引物序列为：TNF
‑
Primer F：CCTCTCTCTAATCAGCCCTCTG(SEQ ID NO.2)；TNF
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Primer R：GAGGACCTGGGAGTAGATGAG(SEQ ID NO.3)；GAPDH
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Primer F：GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT(SEQ ID NO.4)；GAPDH
‑
Pr...

【专利技术属性】
技术研发人员：张倩，黄浠桐，郑博文，
申请(专利权)人：上海觅得医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：