SLC24A2和SLCO1B3基因标志物及其shRNA沉默干扰序列、应用制造技术

本发明专利技术公开了SLC24A2和SLCO1B3基因标志物及其shRNA沉默干扰序列、应用，涉及生物技术领域。本发明专利技术经研究发现shRNA干扰SLC24A2和SLCO1B3表达后，可显著抑制非小细胞肺癌癌细胞的增殖能力以及侵袭能力，由此说明，shRNA干扰SLC24A2和SLCO1B3基因可以作为非小细胞肺癌治疗的新药物和靶点；本发明专利技术设计了SLC24A2和SLCO1B3的shRNA沉默干扰序列，并通过细胞实验验证了干扰序列的功能；证明了SLC24A2和SLCO1B3既可以作为非小细胞肺癌诊断的标志物，shRNA干扰SLC24A2和SLCO1B3也可以作为非小细胞肺癌治疗的潜在小核酸药物和靶点。小细胞肺癌治疗的潜在小核酸药物和靶点。小细胞肺癌治疗的潜在小核酸药物和靶点。

【技术实现步骤摘要】
SLC24A2和SLCO1B3基因标志物及其shRNA沉默干扰序列、应用


[0001]本专利技术属于生物
，特别是涉及SLC24A2和SLCO1B3基因标志物及其shRNA沉默干扰序列、应用。

技术介绍

[0002]非小细胞肺癌(non
‑
small cell lung cancer,NSCLC)是肺癌的一种，据统计约占肺癌发生病数的85％，其包括鳞状细胞癌(鳞癌)、腺癌、大细胞癌，与小细胞癌相比其癌细胞生长分裂较慢,扩散转移相对较晚。早期肺癌患者的预后较好，但是很多肺癌患者确诊时已是晚期，整体五年生存率仅20％左右。传统的治疗方法以化疗为主，治疗效果较差，毒副反应强。非小细胞肺癌约75％的患者发现时已处于中晚期，5年生存率很低。因此，确定有效的NSCLC生物标志物和癌基因并探索其潜在的调控机制是非常必要的。
[0003]可溶性载体(solute carrier，SLC)摄取转运体是转运体家族的重要组成部分。SLC摄取转运体是细胞内最庞大的一类转运体，主要包括有机阴离子转运体、有机阳离子转运体、有机阴离子转运多肽、钠离子
‑
牛磺胆酸共转运蛋白。SLC转运体家族主要是摄取型转运体，通过协同运输和/或离子交换进行转运，在一些肿瘤药物体内吸收、分布与排泄过程中有重要的作用。有机阴离子转运体也可以作为药物靶点，将药物传递到特定的肿瘤细胞(目前已发现乳腺癌、前列腺癌细胞等)，来实现疾病的靶向治疗。SLC24A2基因编码钙/阳离子反转运蛋白超家族的成员，SLCO1B3基因编码有机阴离子转运蛋白家族的肝脏特异性成员，是在转运体家族中起到重要作用的基因。然而，SLC24A2和SLCO1B3在NSCLC发展中的生物学作用仍有待阐明。通过研究SLC24A2和SLCO1B3作为核酸药物的潜力，有望克服NSCLC治疗困难的技术难题，并进一步为NSCLC的治疗提供新的治疗方向。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了SLC24A2和SLCO1B3基因标志物及其shRNA沉默干扰序列、应用，解决了以上问题。
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术是通过以下技术方案实现的：
[0006]本专利技术经研究发现SLC24A2和SLCO1B3在肺鳞癌和肺腺癌样本中显著升高，提示SLC24A2和SLCO1B3与NSCLC的发生存在密切的关联。专利技术人设计了SLC24A2和SLCO1B3的shRNA沉默干扰序列，并通过细胞实验验证了干扰序列的功能：通过干扰序列沉默SLC24A2和SLCO1B3后抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力，还导致细胞凋亡增加。这些结果说明SLC24A2和SLCO1B3的干扰序列可以作为NSCLC肿瘤治疗的潜在核酸药物。
[0007]本专利技术通过以下技术方案实现：
[0008]第一方面，本专利技术提供一种上述circRNA标志物的引物组，引物组包括正向引物和反向引物；
[0009]SLC24A2正向引物(Primer Forward)的核苷酸序列为:
[0010]CCAAGGAGACTACCCGAAAGA(序列1)所示；
[0011]SLC24A2反向引物(Primer Reverse)的核苷酸序列为CAGACAATGGCTAAGGCTATGAA(序列2)所示；
[0012]SLCO1B3正向引物(Primer Forward)的核苷酸序列为TGGAGCAACAGTACGGTCAG(序列3)所示；
[0013]SLCO1B3反向引物(Primer Reverse)的核苷酸序列为TGCTTTCGCAGATTAGAGGGAA(序列4)所示。
[0014]第二方面，本专利技术提供一种上述基因标志物在制备非小细胞肺癌诊断的产品中的应用。
[0015]第三方面，本专利技术提供一种用于检测上述基因标志物的试剂在制备用于诊断癌症的产品中的应用。
[0016]第四方面，本专利技术提供特异性抑制SLC24A2和SLCO1B3基因表达的核酸序列，其特征在于与SLC24A2和SLCO1B3 mRNA互补，干扰或抑制其蛋白翻译，shRNA干扰序列如下：
[0017]Sh
‑
SLC24A2
‑
1:
[0018]CCGGGCCGAAGAACTTGGATCATATCTCGAGATATGATCCAAGTTCTTCGGCTTTTTG(序列1)；
[0019]Sh
‑
SLC24A2
‑
2:
[0020]CCGGCATTACCTGGATTGCAGTATTCTCGAGAATACTGCAATCCAGGTAATGTTTTTG(序列2)；
[0021]Sh
‑
SLC24A2
‑
3:
[0022]CCGGGCAAATGATAAACCGCAATAACTCGAGTTATTGCGGTTTATCATTTGCTTTTTG(序列3)；
[0023]Sh
‑
SLCO1B3
‑
1:
[0024]CCGGGGTAGTTGTAACTGCTAATAACTCGAGTTATTAGCAGTTACAACTACCTTTTTG(序列4)；
[0025]Sh
‑
SLCO1B3
‑
2:
[0026]CCGGTGGTTAGTGTGTGATACAATACTCGAGTATTGTATCACACACTAACCATTTTTG(序列5)；
[0027]Sh
‑
SLCO1B3
‑
3:
[0028]CCGGGCTTTAAGATTCCCAGCACTTCTCGAGAAGTGCTGGGAATCTTAAAGCTTTTTG(序列6)；
[0029]第五方面，两种上述基因标志物的表达shRNA干扰序列在制备治疗非小细胞肺癌的药物中的应用。两种抑制SLC24A2和SLCO1B3基因表达的shRNA干扰技术，其特征在于，一段能够特异性抑制SLC24A2和SLCO1B3基因表达的核酸序列为核心序列制备基因干扰RNA片段。
[0030]优选地，两种抑制SLC24A2和SLCO1B3基因表达的shRNA干扰技术，有效的shRNA干扰序列为
[0031]Sh
‑
SLC24A2
‑
1:
[0032]CCGGGCCGAAGAACTTGGATCATATCTCGAGATATGATCCAAGTTCTTCGGCTTTTTG(序列7)；
[0033]Sh
‑
SLCO1B3
‑
3:
[0034]CCGGGCTTTAAGATTCCCAGCACTTCTCGAGAAGTGCTGGGAATCTTAAAGCTTTTTG(序列8)。
[0035]第六方面，两种靶向SLC24A2和SLCO1B3基因表达的shRNA干扰技术，其特征在于，将制备的基因干扰本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.SLC24A2和SLCO1B3基因标志物，作为非小细胞肺癌治疗靶点的检测引物，其特征在于，所述的检测引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物的核苷酸序列如下序列1和序列3所示；所述反向引物的核苷酸序列如下序列2和序列4所示；SLC24A2
‑
Forward:CCAAGGAGACTACCCGAAAGA(序列1)SLC24A2
‑
Reverse:CAGACAATGGCTAAGGCTATGAA(序列2)SLCO1B3
‑
Forward:TGGAGCAACAGTACGGTCAG(序列3)SLCO1B3
‑
Reverse:TGCTTTCGCAGATTAGAGGGAA(序列4)。2.根据权利要求1所述的SLC24A2和SLCO1B3基因标志物在制备非小细胞肺癌诊断或治疗的产品中的应用，其特征在于，所述应用以试剂形式存在，还包括RNA提取试剂、逆转录反应体系和荧光定量PCR试剂。3.根据权利要求1所述的SLC24A2和SLCO1B3基因标志物所对应的shRNA沉默干扰序列，其特征在于，所述shRNA沉默干扰序列能够特异性抑制SLC24A2和SLCO1B3基因表达，与SLC24A2和SLCO1B3 mRNA互补，干扰或抑制其蛋白翻译，所述shRNA沉默干扰序列如下：Sh
‑
SLC24A2
‑
1:CCGGGCCGAAGAACTTGGATCATATCTCGAGATATGATCCAAGTTCTTCGGCTTTTTG(序列5)；Sh
‑
SLC24A2
‑
2:CCGGCATTACCTGGATTGCAGTATTCTCGAGAATACTGCAATCCAGGTAATGTTTTTG(序列6)；Sh
‑
SLC24A2
‑
3:CCGGGCAAATGATAAACCGCAATAACTCGAGTTATTGCGGTTTATCATTTGCTTTTTG(序列7)；Sh
‑
SLCO1B3
‑
1:CCGGGGTAGTTGTAA...

【专利技术属性】
技术研发人员：张倩，梅丽丽，陈镜如，
申请(专利权)人：上海觅得医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：