一种环状RNA及其用途制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体涉及一种环状RNA及其用途。一种环状RNA，所述环状RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明专利技术通从膀胱癌耐药细胞株中获得一个环状RNA，并通过环状RNA高通量测序，并与已有数据库进行交叉比对，明确该环状RNA与膀胱癌化疗耐药密切相关，为解决膀胱癌化疗耐药性的问题及开发新型膀胱癌化疗药物提供了物质基础和理论依据。膀胱癌化疗药物提供了物质基础和理论依据。膀胱癌化疗药物提供了物质基础和理论依据。

【技术实现步骤摘要】
一种环状RNA及其用途


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种环状RNA及其用途。

技术介绍

[0002]膀胱癌是发病率较高的泌尿系恶性肿瘤之一，近年全球的膀胱癌发病率呈不断升高趋势。据统计，2018年全球膀胱癌发病人数约54.9万，死亡人数约20万。目前，膀胱癌治疗以外科手术切除为主，术后辅以化疗，常用化疗药物包括吉西他滨、顺铂、阿霉素等。术后化疗可显著降低膀胱癌患者肿瘤的复发率，改善患者预后。然而，部分经过综合治疗的膀胱癌患者仍出现肿瘤的复发和进展，其原因在很大程度上与化疗药物耐药有关，此类患者往往预后较差。因此，对膀胱癌化疗耐药性调控机制的研究十分重要。膀胱癌耐药机制的产生是一个多阶段、多步骤的复杂过程，最近研究发现非编码RNA的异常调节在其中起到关键作用，它们可以通过转录、转录后或表观遗传来调节靶基因的表达，进而影响肿瘤耐药的过程。
[0003]非编码环状 RNA（circular RNA，circRNA）最早于 1976年由Sanger团体研究RNA病毒时发现。 circRNA最初被认为是RNA剪接过程中产生的无功能产物，但随着高通量测序技术和生物信息学的快速发展，circRNA在基因转录、转录后修饰以及翻译调控中的作用逐渐被证实。研究表明circRNA广泛参与细胞的增殖、凋亡、血管生成和转移等多种病理生理过程，并与泌尿系统肿瘤在内的多种肿瘤的发病机制有关。许多环状 RNA(circRNAs)被报道在癌症的发展过程中发挥着重要的作用，并有潜力作为生物标志物和治疗靶点。然而，环状RNA 在顺铂耐药膀胱癌中的作用目前仍不清楚。

技术实现思路

[0004]本专利技术目的在于克服现有技术的不足，提供一种环状RNA，且本专利技术还提供了该环状RNA的用途。
[0005]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：一种环状RNA，所述环状RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
[0006]本专利技术还提供一种膀胱癌化疗药物组合物，所述药物组合物中包含所述的环状RNA或表达所述环状RNA的载体中的至少一种。
[0007]本专利技术还提供一种表达所述的环状RNA的载体。
[0008]本专利技术还提供了所述的环状RNA在制备膀胱癌化疗药物组合物中的用途。
[0009]本专利技术的有益效果在于：本专利技术从膀胱癌耐药细胞株中获得一个环状RNA，通过环状RNA高通量测序，并与已有数据库进行交叉比对，明确该环状RNA与膀胱癌化疗耐药密切相关；本专利技术进一步通过体外实验验证了该环状RNA在膀胱癌耐药细胞株中呈现低表达，通过上调该环状RNA的表达能够显著增强耐药细胞株的药物敏感性；本专利技术为解决膀胱癌化疗耐药性的问题及开发新型膀胱癌化疗药物提供了物质基础和理论依据。
附图说明
[0010]图1为本专利技术实施例中膀胱癌耐药细胞株环状RNA高通量测序；图2为本专利技术提供的环状RNA与前期膀胱肿瘤组织测序数据库（GSE97239）进行交叉比对；图3为本专利技术提供的环状RNA对耐药细胞株的药物敏感性影响。
具体实施方式
[0011]为了便于理解本专利技术，下面结合附图和具体实施例，对本专利技术进行更详细的说明。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本说明书所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术公开内容的理解更加透彻全面。
[0012]实施例一、环状RNA circUBQLN1的获取和检测分析1、选择膀胱肿瘤耐药细胞株：EJ细胞。
[0013]2、MTT试验确定顺铂（cisplatin）药物浓度（IC50）（1）收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul，铺板使待测细胞密度至1000
‑
10000/孔（边缘用无菌PBS填充）；（2）5%CO2,37℃孵育，至细胞单层铺满孔底，加入浓度梯度的药物（0、0.2μM、0.4μM、0.6μM、0.8μM、1.0μM），每个浓度梯度设置3
‑
5个副孔；（3）5%CO2,37℃孵育16
‑
48小时，倒置显微镜下观察；（4）每孔加入20ul MTT溶液（5mg/ml），继续培养4h。若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲洗2
‑
3遍后再加入含MTT的培养液；（5）终止培养，小小吸去孔内培养液（6）每孔加入150ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解，在酶联免疫检测仪0D490nm处测量各孔的吸光值；（7）同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜）。
[0014]3、提取膀胱肿瘤耐药细胞株RNA（1）取顺铂耐药的膀胱肿瘤细胞株及对照组细胞株，吸走细胞原有上层培养基（T25细胞培养瓶），用PBS洗涤2
‑
3遍并完全吸净，加入1mL胰酶消化3min，再加入3mL含细胞培养基中止消化，轻柔反复吹打至细胞完全脱壁，将细胞悬浊液置于离心管，1200rpm 5min， 离心 5min，吸走上清，再次用1mL PBS吹散并离心，重复两次后，加入600
‑
800
µ
L TRIzol， 混匀震荡细胞团，转移到新的1.5mL RNase
‑
free EP管（注：TRIzol的使用量可根据细胞量适量增减）；（2）每个EP管加入1/5 TRIzol体积的氯仿，在振荡器上充分震荡30s，室温下静置5分钟；（3）4℃ 12000rpm，离心15min，此时溶液一般分为三层，小心吸取最上层清亮液体至新的1.5mL RNas
‑
free EP管中；（4）加入与（3）中上清体积一致的异丙醇，颠倒混匀，
‑
20℃静置1h；准备预冷的75%乙醇（750
µ
L无水乙醇+ 250
µ
L RNase
‑
free水）；（5）将（4）中异丙醇混合液离心（ 4℃ 12000rpm，10min），离心后管底可见白色片
状沉淀，将上清小心吸除；（6）加入预冷的75%乙醇1mL，并将白色沉淀吹散，再次4℃ 12000rpm 离心5min，尽将上清尽量吸走，室温下干燥5min；（7）加入RNase
‑
free DEPC 水 20
‑
50
µ
L（根据所得沉淀适当调整），使用中枪头轻吹充分溶解RNA沉淀；（8）每个RNA样本分别取1
µ
L，用Nanodrop测定RNA的浓度并记录RNA浓度及 OD260/280数值。剩余RNA液氮中速冻后置于
‑
80℃冰箱待用。
[0015]4 、针对环状RNA进行高通量测序分析（1）系统获得环状 RNA 高通量芯片原始文件；（2）系统对环状 RNA 高通量芯片原始信号文件进行质量并别除低质量信号数据，获得经过筛选的信号数据；（3）系统将经过筛选的数据进行前景值和背景值校正，得到消除噪音污染的环本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种环状RNA，其特征在于：所述环状RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。2.一种膀胱癌化疗药物组合物，其特征在于：包含如权利要求1所述的环状RNA或表...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢飞，焦伟，张晓飞，张铭鑫，李升先，
申请(专利权)人：青岛大学附属医院，
类型：发明
国别省市：