【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于增加CRISPR/Cas12f1系统的效率的工程化引导RNA及其用途
[0001]本公开涉及用于其中将CRISPR/Cas系统、特别是CRISPR/Cas12f1系统用于基因编辑的领域中的技术。
技术介绍
[0002]CRISPR/Cas12f1系统是一种被归类为2类V型的CRISPR/Cas系统。之前的研究(Harrington等,Programmed DNA destruction by miniature CRISPR
‑
Cas14 enzymes,Science 362,839
‑
842(2018))首次报道了作为CRISPR/Cas14的CRISPR/Cas系统,这是一种由古细菌衍生而来的CRISPR/Cas系统。此后,随后的研究(Karvelis等,Nucleic Acids Research,Vol.48,No.9 5017(2020))将CRISPR/Cas14系统归类为CRISPR/Cas12f系统。CRISPR/Cas12f1系统属于V
‑
F1系统(CRISPR/Cas系统中的一个亚型,被归类为2类V型),并且包括具有Cas14a作为效应蛋白的CRISPR/Cas14a系统。与CRISPR/Cas9系统相比,CRISPR/Cas12f1系统的特征在于效应蛋白的尺寸紧凑。然而,正如之前的研究(Harington等,Programmed DNA destruction by miniature CRISPR
‑
Cas14 en
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于CRISPR/Cas12f1系统的工程化的CRISPR RNA(crRNA),所述CRISPR/Cas12f1系统能够编辑包含靶序列的核酸,所述工程化的crRNA包含:CRISPR RNA重复序列;间隔序列,所述间隔序列与所述靶序列互补;以及富含U的尾序列,所述富含U的尾序列连接至所述间隔序列的3'
‑
末端,其中,所述富含U的尾序列由(U
a
N)
n
U
b
表示,N为腺苷(A)、尿嘧啶(U)、胞苷(C)和鸟苷(G)中的一种,a为1
‑
4的整数,n为选自0、1和2的整数,b为1
‑
10的整数,并且所述工程化的crRNA的序列包含所述CRISPR RNA重复序列、所述间隔序列和所述富含U的尾序列,它们以5'
‑
3'的方向顺序连接。2.一种DNA,所述DNA具有编码如权利要求1所述的工程化的crRNA的序列。3.如权利要求1所述的工程化的crRNA,其中,所述富含U的尾序列为UUUUUU、UUUUAUUUUUU或UUUUGUUUUUU。4.如权利要求1所述的工程化的crRNA,其中,所述CRISPR RNA重复序列具有SEQ ID NO:58的序列。5.一种用于CRISPR/Cas12f1系统的工程化的引导RNA,所述CRISPR/Cas12f1系统能够编辑包含靶序列的核酸,所述工程化的引导RNA具有包含如下的序列:tracrRNA序列;crRNA序列,所述crRNA序列包含CRISPR RNA重复序列以及间隔序列,所述间隔序列与所述靶序列互补;以及富含U的尾序列,所述富含U的尾序列连接至所述CRISPR RNA序列的3'
‑
末端,其中,所述富含U的尾序列由(U
a
N)
n
U
b
表示,N为腺苷(A)、尿嘧啶(U)、胞苷(C)和鸟苷(G)中的一种,a为1
‑
4的整数,n为选自0、1和2的整数,b为1
‑
10的整数。6.如权利要求5所述的工程化的引导RNA,其中,所述工程化的引导RNA进一步包含接头序列,其中,所述tracrRNA序列和所述crRNA序列通过所述接头序列连接。7.如权利要求6所述的工程化的引导RNA,其中,所述接头序列为5'
‑
gaaa
‑
3'。8.如权利要求6所述的工程化的引导RNA,其中,所述富含U的尾序列为UUUUUU、UUUUAUUUUUU或UUUUGUUUUUU。9.一种DNA,所述DNA具有编码如权利要求5或权利要求6所述的工程化的引导RNA的序列。10.一种能够编辑包含靶序列的核酸的工程化CRISPR/Cas12f1复合体,所述工程化CRISPR/Cas12f1复合体包含:Cas12f1蛋白,所述Cas12f1蛋白属于Cas14家族;以及工程化的引导RNA,所述工程化的引导RNA包含支架序列、间隔序列和富含U的尾序列,所述支架序列与所述Cas12f1蛋白相互作用,所述间隔序列与所述靶序列互补,其中,所述富含U的尾序列由(U
a
N)
n
U
b
表示,N为腺苷(A)、尿嘧啶(U)、胞苷(C)和鸟苷(G)中的一种,并且a为1
‑
4的整数,n为选自0、1和2的整数,b为1
‑
10的整数。
11.一种用于表达工程化CRISPR/Cas12f1复合体的载体,所述工程化CRISPR/Cas12f1复合体能够编辑包含靶序列的核酸,所述载体包含:第一序列,所述第一序列包含编码Cas12f1蛋白的序列;第一启动子序列,所述第一启动子序列可操作地连接至所述第一序列;第二序列,所述第二序列包含编码工程化的引导RNA的序列;以及第二启动子序列,所述第二启动子序列可操作地连接至所述第二序列,其中,所述工程化的引导RNA具有与所述Cas12f1蛋白相互作用的支架序列、与所述靶序列互补的间隔序列以及连接至所述间隔序列的3'
‑
末端的富含U的尾序列,所述富含U的尾序列由(U
a
N)
n
U
b
表示,N为腺苷(A)、尿嘧啶(U)、胞苷(C)和鸟苷(G)中的一种,a为1
‑
4的整数,n为选自0、1和2的整数,b为1
‑
10的整数,其中,所述载体被构建为表达所述Cas12f1蛋白和所述工程化的引导RNA,从而使所述Cas12f1蛋白和所述工程化的引导RNA在细胞中形成CRISPR/Cas1...
【专利技术属性】
技术研发人员:权利要求书三页说明书六一页序列表一零二页附图九页,
申请(专利权)人:基恩科雷有限责任公司,
类型:发明
国别省市:
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。