用于增加CRISPR/Cas12f1系统的效率的包含富含U的尾部的经工程化的引导RNA及其用途技术方案

本申请文件提供了经工程化的Cas12f1引导RNA，其克服常规技术的限制来增强CRISPR/Cas12f1系统的细胞内基因编辑效率。该经工程化的Cas12f1引导RNA通过向自然界中发现的引导RNA添加新元件而获得，并且其结构的一部分被修饰。经工程化的Cas12f1引导RNA在构建体的3'末端包含富含U的尾部，这是新的元件。此外，在经工程化的Cas12f1引导RNA的形成中，能够与Cas12f1蛋白相互作用的支架区的至少一部分被修饰。修饰。修饰。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于增加CRISPR/Cas12f1系统的效率的包含富含U的尾部的经工程化的引导RNA及其用途


[0001][相关申请][0002]本申请基于在2020年10月8日提交的韩国专利申请No.10
‑
2020
‑
0129937和2021年4月16日提交的韩国专利申请No.10
‑
2021
‑
0050093要求优先权，以引用方式将其各自的公开内容整体并入本文。
[0003][0004][
][0005]本文公开了使用CRISPR/Cas系统、特别是CRISPR/Cas12f1系统用于基因编辑的领域的技术。
[0006]
技术介绍

[0007]CRISPR/Cas12f1系统是一种被归类为2类V型的CRISPR/Cas系统。之前的研究(Harrington等，Programmed DNA destruction by miniature CRISPR
‑
Cas14 enzymes，Science 362，839
‑
842(2018))本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于CRISPR/Cas12f1系统的经工程化的引导RNA，包括：经工程化的支架区，间隔区，和富含U的尾部，其中，所述经工程化的支架区、所述间隔区和所述富含U的尾部以5
’
至3
’
的方向彼此顺序连接，所述间隔区包含10个核苷酸至50个核苷酸，并且具有与靶序列互补的序列，所述富含U的尾部的序列由(U
a
N)
b
U
c
示出，其中，N选自腺苷(A)、尿苷(U)、胞苷(C)和鸟苷(G)；并且a、b和c各自为整数，a为1
‑
5且包含端值，并且b为0或更大，所述经工程化的支架区的序列不同于5'
‑
CUUCACUGAUAAAGUGGA GAACCGCUUCACCAAAAGCUGUCCCUUAGGGGAUUAGAACUUGAGUGAAGGUGGGCUGCUUGCAUCAGCCUAAUGUCGAGAAGUGCUUUCUUCGGAAAGUAACCCUCGAAACCAAAUUCAUUUGAAAGAAUGAAGGAAUGCAAC
‑
3'(SEQ ID NO:7)，并且所述经工程化的支架区的序列使得以下序列以5'至3'的方向彼此顺序连接：选自于由5'
‑
A
‑
3'、5'
‑
AA
‑
3'、5'
‑
GAA
‑
3'、5'
‑
AGAA
‑
3'、5'
‑
GAGAA
‑
3'、5'
‑
GGAGAA
‑
3'、5'
‑
UGGAGAA
‑
3'、5'
‑
GUGGAGAA
‑
3'、5'
‑
AGUGGAGAA
‑
3'、5'
‑
AAGUGGAGAA
‑
3'(SEQ ID NO:17)、5'
‑
AAAGUGGAGAA
‑
3'(SEQ ID NO:18)、5'
‑
UAAAGUGGAGAA
‑3′
(SEQ ID NO:19)、5'
‑
AUAAAGUGGAGAA
‑
3'(SEQ ID NO:20)、5'
‑
GAUAAAGUGGAGAA
‑
3'(SEQ ID NO:21)、5'
‑
UGAUAAAGUGGAGAA
‑
3'(SEQ ID NO:22)、5'
‑
CUGAUAAAGUGGAGAA
‑
3'(SEQ ID NO:23)、5'
‑
ACUGAUAAAGUGGAGAA
‑
3'(SEQ ID NO:24)、5'
‑
CACUGAUAAAGUGGAGAA
‑3′
(SEQ ID NO:25)、5
′‑
UCACUGAUAAAGUGGAGAA
‑
3'(SEQ ID NO:26)、5'
‑
UUCACUGAUAAAGUGGAGAA
‑3′
(SEQ ID NO:27)和5'
‑
CUUCACUGAUAAAGUGGAGAA
‑
3'(SEQ ID NO:10)所组成的组中的序列；选自于由5
′‑
G
‑
3'、5'
‑
UUAGG
‑
3'、5'
‑
CUUAGGG
‑
3'、5'
‑
CUUAGUGG
‑3′
、5'
‑
CCUUAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO:342)、5'
‑
CCGUUAGGUGG
‑3′
(SEQ ID N O:343)、5'
‑
CCGCUUAGGGUGG
‑
3'(SEQ ID NO:344)、5'
‑
CCGCUUUAGAG GUGG
‑
3'(SEQ ID NO:345)、5'
‑
CCGCUUUUAGAAGGUGG
‑
3'(SEQ ID NO:346)、5'
‑
CCGCUUCUUAGGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO:347)、5'
‑
CCGCUUC AUUAGUGAAGGUGG
‑
3'(SEQ ID NO:348)、5'
‑
CCGCUUCACUUAGGUGA AGGUGG
‑
3'(SEQ ID NO:349)、5'
‑
CCGCUUCACUUAGAGUGAAGGUGG
‑
3'(SEQ ID NO:350)、5'
‑
CCGCUUCACCUUAGGAGUGAAGGUGG
‑
3'(SEQ ID NO:351)、5'
‑
CCGCUUCACCAUUAGUGAGUGAAGGUGG
‑
3'(SEQ ID N O:352)、5'
‑
CCGCUUCACCAAUUAGUUGAGUGAAGGUGG
‑
3'(SEQ ID NO:353)、5'
‑
CCGCUUCACCAAAUUAGCUUGAGUGAAGGUGG
‑
3'(SEQ ID N O:354)、5'
‑
CCGCUUCACCAAAAUUAGACUUGAGUGAAGGUGG
‑
3'(SEQ ID NO:355)、5'
‑
CCGCUUCACCAAAAGUUAGAACUUGAGUGAAGGUGG
‑
3'(SEQ ID NO:356)、5'
‑
CCGCUUCACCAAAAGCUUAGGAACUUGAGUG AAGGUGG
‑
3'(SEQ ID NO:357)、5
′‑
CCGCUUCACCAAAAGCUUUAGAGA ACUUGAGUGAAGGUGG
‑
3'(SEQ ID NO:358)、5'
‑
CCGCUUCACCAAAAG CUGUUAGUAGAACUUGAGUGAAGGUGG
‑
3'(SEQ ID NO:359)、5'
‑
CCGC UUCACCAAAAGCUGUUAGUUAGAACUUGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO:360)、5'
‑
CCGCUUCACCAAAAGCUGUUUAGAUUAGAACUUGAGU GAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO:361)、5'
‑
CCGCUUCACCAAAAGCUGUCUUA GGAUUAGAACUUGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO:362)和5
′‑
CCGCUU CACCAAAAGCUGUCCCUUAGGGGAUUAGAACUUGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO:11)所组成的组中的序列；选自于由5
′‑
GCUGCUUGCAUCAGCCUAAUGUCGAGAAGUGCUUU CUUCGGAAAGUAACCCUCGA
‑
3'
(SEQ ID NO:434)、5'
‑
GCUGCUUGCAU CAGCCUAAUGUCGAGAAGUGCUUUUUCGAAAGUAACCCUCGA
‑
3'(SE Q ID NO:435)、5'
‑
GCUGCUUGCAUCAGCCUAAUGUCGAGAAGUGCUUU UCGAAGUAACCCUCGA
‑
3'(SEQ ID NO:436)、5'
‑
GCUGCUUGCAUCAGC CUAAUGUCGAGAAGUGCUCUUCGGAGUAACCCUCGA
‑
3'(SEQ ID NO:437)、5'
‑
GCUGCUUGCAUCAGCCUAAUGUCGAGAAGUGCUUUCGAGUA ACCCUCGA
‑3′
(SEQ ID NO：438)、5
′‑
GCUGCUUGCAUCAGCCUAAUGUCGAGAAGUGCUUCGGUAACCCUCGA
‑3′
(SEQ ID NO：439)、5
′‑
GCUGCUUGCAUCAGCCUAAUGUCGAGAAGUGUUCGUAACCCUCGA
‑3′
(SEQ ID NO：440)、5
′‑
GCUGCUUGCAUCAGCCUAAUGUCGAGAAGUUUCGAACCCUCGA
‑3′
(SEQ ID NO：441)、5
′‑
GCUGCUUGCAUCAGCCUAAUGUCGAGAAGUUCGACCCUCGA
‑3′
(SEQ ID NO：442)、5
′‑
GCUGCUUGCAUCAGCCUAAUGUCGAGAAGUUCGCCCUCGA
‑3′
(SEQ ID NO：443)、5
′‑
GCUGCUUGCAUCAGCCUAAUGUCGAGAAUUCGCCCUCGA
‑3′
(SEQ ID NO：444)、5
′‑
GCUGCUUGCAUCAGCCUAAUGUCGAGAAUUCGCCUCGA
‑3′
(SEQ ID NO：445)、5
′‑
GCUGCUUGCAUCAGCCUAAUGUCGAGAUUCGCCUCGA
‑3′
(SEQ ID NO：446)、5
′‑
GCUGCUUGCAUCAGCCUAAUGUCGAGUUCGCUCGA
‑3′
(SEQ ID NO：447)和5
′‑
GCUGCUUGCAUCAGCCUAAUGUCGAGAAGUGCUUUCUUCGGAAAGUAACCCUCGA
‑3′
(SEQ ID NO：12)所组成的组中的序列；选自于由5
′‑
AACAAAGAAAGGA
‑3′
(SEQ ID NO：111)、5
′‑
AACAAAUGAAAAGGA
‑3′
(SEQ ID NO：112)、5
′‑
AACAAAUUGAAAAAGGA
‑3′
(SEQ ID NO：113)、5
′‑
AACAAAUUCGAAAGAAGGA
‑3′
(SEQ ID NO：114)、5
′‑
AACAAAUUCAGAAAUGAAGGA
‑3′
(SEQ ID NO：115)、5
′‑
AACAAAUUCAUGAAAAUGAAGGA
‑3′
(SEQ ID NO：116)、5
′‑
AACAAAUUCAUUGAAAAAUGAAGGA
‑3′
(SEQ ID NO：117)和5
′‑
AACAAAUUCAUUUGAAAGAAUGAAGGA
‑3′
(SEQ ID NO：118)所组成的组中的序列；以及5
′
AUGCAAC
‑3′
。2.如权利要求1所述的经工程化的引导RNA，其中，所述富含U的尾部的序列由5
′‑
UUUURUUUU
‑3′
示出。3.如权利要求1所述的经工程化的引导RNA，其中，所述支架区的序列使得以下的序列以5
’
至3
’
的方向彼此顺序连接：5
′
A
‑3′
；5
′‑
CCGCUUCACCAAAAGCUGUCCCUUAGGGGAUUAGAACUUGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：11)；5
′‑
GCUGCUUGCAUCAGCCUAAUGUCUAUAAUUUCUUUUUUUUUAAAUUAACCCUCGA
‑3′
(SEQ ID NO：12)；5
′
AACCAAAGAAAGGA
‑3′
(SEQ ID NO：111)；以及5
′
AUGCAAC
‑3′
。4.如权利要求1所述的经工程化的引导RNA，其中，所述支架区的序列使得以下的序列以5
’
至3
’
的方向彼此顺序连接：5
′‑
A
‑3′
；5
′‑
CCGCUUCACUUAGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：350)；5
′‑
GCUGCUUGCAUCAGCCUAAUGUCGAGAAGUGCUUUCUUCGGAAAGUAACCCUCGA
‑3′
(SEQ ID NO：12)；5
′
AACCAAAGAAAGGA
‑3′
(SEQ ID NO：111)；以及5
′‑
AUGCAAC
‑3′
。5.编码权利要求1
‑
4中任一项所述的经工程化的引导RNA的DNA。
6.一种用于CRISPR/Cas12f1系统的经工程化的引导RNA，包括：经工程化的支架，间隔区，和富含U的尾部，其中，所述经工程化的支架区、所述间隔区和所述富含U的尾部以5
’
至3
’
的方向彼此顺序连接，所述间隔区包含10个核苷酸至50个核苷酸，并且具有与靶序列互补的序列，所述富含U的尾部的序列由(U
a
N)
b
U
c
示出，其中，N选自腺苷(A)、尿苷(U)、胞苷(C)和鸟苷(G)；并且a、b和c各自为整数，a为1
‑
5且包含端值，并且b为0或更大，所述经工程化的支架区的序列使得以下的序列以5
′
至3
′
的方向彼此顺序连接：由5
′‑
GCUGCUUGCAUCAGCCUAAUGUCGAG
‑3′
(SEQ ID NO：475)示出的第一序列；由5
′‑
UUCG
‑3′
示出的第二序列；由5
′‑
CUCGA
‑3′
示出的第三序列；由5
′
AACCAAA
‑3′
示出的第四序列；接头；由5
′‑
GGA
‑3′
示出的第五序列；以及由5
′
AUGCAAC
‑3′
示出的第六序列。7.如权利要求6所述的经工程化的引导RNA，其中，所述接头为5
′‑
GAAA
‑3′
。8.如权利要求6所述的经工程化的引导RNA，其中，所述接头选自于由以下组成的组：5
′‑
GAAA
‑3′
，5
′‑
UGAAAA
‑3′
，5
′‑
UUGAAAAA
‑3′
，5
′‑
UUCGAAAGAA
‑3′
(SEQ ID NO：642)，5
′‑
UUCAGAAAUGAA
‑3′
(SEQ ID NO：643)，5
′‑
UUCAUGAAAAUGAA
‑3′
(SEQ ID NO：644)，和5
′‑
UUCAUUGAAAAAUGAA
‑3′
(SEQ ID NO：645)。9.如权利要求6所述的经工程化的引导RNA，其中，所述经工程化的支架区进一步包含第七序列，所述第七序列选自于由以下所组成的组：5
′
A
‑3′
，5
′
AA
‑3′
，5
′‑
GAA
‑3′
，5
′
AGAA
‑3′
，5
′‑
GAGAA
‑3′
，5
′‑
GGAGAA
‑3′
，5
′‑
UGGAGAA
‑3′
，5
′‑
GUGGAGAA
‑3′
，5
′‑
AGUGGAGAA
‑3′
，5
′
AAGUGGAGAA
‑3′
(SEQ ID NO：17)，5
′
AAAGUGGAGAA
‑3′
(SEQ ID NO：18)，5
′‑
UAAAGUGGAGAA
‑3′
(SEQ ID NO：19)，5
′
AUAAAGUGGAGAA
‑3′
(SEQ ID NO：20)，5
′‑
GAUAAAGUGGAGAA
‑3′
(SEQ ID NO：21)，5
′‑
UGAUAAAGUGGAGAA
‑3′
(SEQ ID NO：22)，5
′‑
CUGAUAAAGUGGAGAA
‑3′
(SEQ ID NO：23)，5
′
ACUGAUAAAGUGGAGAA
‑3′
(SEQ ID NO：24)，5
′‑
CACUGAUAAAGUGGAGAA
‑3′
(SEQ ID NO：25)，5
′‑
UCACUGAUAAAGUGGAGAA
‑3′
(SEQ ID NO：26)，5
′‑
UUCACUGAUAAAGUGGAGAA
‑3′
(SEQ ID NO：27)，和5
′‑
CUUCACUGAUAAAGUGGAGAA
‑3′
(SEQ ID NO：10)；
并且其中，所述第七序列的3
′
端连接至所述第一序列的5
′
端。10.如权利要求6所述的经工程化的引导RNA，其中，所述富含U的尾部的序列由5
′‑
UUUURUUUU
‑3′
示出。11.如权利要求6所述的经工程化的引导RNA，其中，所述经工程化的支架区进一步包含第八序列，所述第八序列选自于由以下所组成的组：5
′‑
G
‑3′
，5
′‑
UUAGG
‑3′
，5
′‑
CUUAGGG
‑3′
，5
′‑
CUUAGUGG
‑3′
，5
′‑
CCUUAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：342)，5
′‑
CCGUUAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：343)，5
′‑
CCGCUUAGGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：344)，5
′‑
CCGCUUUAGAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：345)，5
′‑
CCGCUUUUAGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：346)，5
′‑
CCGCUUCUUAGGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：347)，5
′‑
CCGCUUCAUUAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：348)，5
′‑
CCGCUUCACUUAGGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：349)，5
′‑
CCGCUUCACUUAGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：350)，5
′‑
CCGCUUCACCUUAGGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：351)，5
′‑
CCGCUUCACCAUUAGUGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：352)，5
′‑
CCGCUUCACCAAUUAGUUGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：353)，5
′‑
CCGCUUCACCAAAUUAGCUUGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：354)，5
′‑
CCGCUUCACCAAAAUUAGACUUGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：355)，5
′‑
CCGCUUCACCAAAAGUUAGAACUUGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：356)，5
′‑
CCGCUUCACCAA AAGCUUAGGAACUUGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：357)，5
′‑
CCGCUUCACCAAAAGCUUUAGAGAACUUGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：358)，5
′‑
CCGCUUCACCAAAAGCUGUUAGUAGAACUUGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：359)，5
′‑
CCGCUUCACCAAAAGCUGUUAGUUAGAACUUGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：360)，5
′‑
CCGCUUCACCAAAAGCUGUUUAGAUUAGAACUUGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：361)，5
′‑
CCGCUUCACCAAAAGCUGUCUUAGGAUUAGAACUUGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：362)以及5
′‑
CCGCUUCACCAAAAGCUGUCCCUUAGGGGAUUAGAACUUGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：11)，并且其中，所述第八序列的3
′
端连接至所述第一序列的5
′
端。12.如权利要求6所述的经工程化的引导RNA，其中，所述经工程化的支架区进一步包含第七序列和第八序列，所述第七序列选自于由以下所组成的组：5
′‑
A
‑3′
，5
′‑
AA
‑3′
，5
′‑
GAA
‑3′
，5
′‑
AGAA
‑3′
，5
′‑
GAGAA
‑3′
，5
′‑
GGAGAA
‑3′
，5
′‑
UGGAGAA
‑3′
，5
′‑
GUGGAGAA
‑3′
，5
′‑
AGUGGAGAA
‑3′
，5
′‑
AAGUGGAGAA
‑3′
(SEQ ID NO：17)，5
′
AAAGUGGAGAA
‑3′
(SEQ ID NO：18)，5
′‑
UAAAGUGGAGAA
‑3′
( SEQ ID NO：19)，5
′‑
AUAAAGUGGAGAA
‑3′
(SEQ ID NO：20)，5
′‑
GAUAAAGUGGAGAA
‑3′
(SEQ ID NO：21)，5
′‑
UGAUAAAGUGGAGAA
‑3′
(SEQ ID NO：22)，5
′‑
CUGAUAAAGUGGAGAA
‑3′
(SEQ ID NO：23)，
5
′
ACUGAUAAAGUGGAGAA
‑3′
(SEQ ID NO：24)，5
′‑
CACUGAUAAAGUGGAGAA
‑3′
(SEQ ID NO：25)，5
′‑
UCACUGAUAAAGUGGAGAA
‑3′
(SEQ ID NO：26)，5
′‑
UUCACUGAUAAAGUGGAGAA
‑3′
(SEQ ID NO：27)，和5
′‑
CUUCACUGAUAAAGUGGAGAA
‑3′
(SEQ ID NO：10).第八序列选自于由以下所组成的组：5
′‑
G
‑3′
，5
′‑
UUAGG
‑3′
，5
′‑
CUUAGGG
‑3′
，5
′‑
CUUAGUGG
‑3′
，5
′‑
CCUUAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：342)，5
′‑
CCGUUAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：343)，5
′‑
CCGCUUAGGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：344)，5
′‑
CCGCUUUAGAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：345)，5
′‑
CCGCUUUUAGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：346)，5
′‑
CCGCUUCUUAGGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：347)，5
′‑
CCGCUUCAUUAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：348)，5
′‑
CCGCUUCACUUAGGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：349)，5
′‑
CCGCUUCACUUAGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：350)，5
′‑
CCGCUUCACCUUAGGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：351)，5
′‑
CCGCUUCACCAUUAGUGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：352)，5
′‑
CCGCUUCACCAAUUAGUUGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：353)，5
′‑
CCGCUUCACCAAAUUAGCUUGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：354)，5
′‑
CCGCUUCACCAAAA UUAGACUUGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：355)，5
′‑
CCGCUUCACCAAAAGUUAGAACUUGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：356)，5
′‑
CCGCUUCACCAAAAGCUUAGGAACUUGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：357)，5
′‑
CCGCUUCACCAAAAGCUUUAGAGAACUUGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：358)，5
′‑
CCGCUUCACCAAAAGCUGUUAGUAGAACUUGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：359)，5
′‑
CCGCUUCACCAAAAGCUGUUAGUUAGAACUUGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：360)，5
′‑
CCGCUUCACCAAAAGCUGUUUAGAUUAGAACUUGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：361)，5
′‑
CCGCUUCACCAAAAGCUGUCUUAGGAUUAGAACUUGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：362)，和5
′‑
CCGCUUCACCAAAAGCUGUCCCUUAGGGGAUUAGAACUUGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：11)，并且其中，所述第八序列的3
′
端连接至所述第一序列的5
′
端，并且所述第七序列的3
′
端连接至所述第八序列的5
′
端。13.如权利要求6所述的经工程化的引导RNA，其中，所述经工程化的支架区进一步包含第九序列和第十序列，所述第九序列选自于由以下所组成的组：5
′‑
A
‑3′
，5
′‑
AA
‑3′
，5
′‑
AAG
‑3′
，5
′‑
AAGU
‑3′
，5
′‑
AAGUG
‑3′
，5
′‑
AAGUGC
‑3′
，5
′‑
AAGUGCU
‑3′
，5
′‑
AAGUGCUU
‑3′
，5
′‑
AAGUGCUUU
‑3′
，5
′‑
AAGUGCUUUC
‑3′
(SEQ ID NO：485).所述第十序列选自于由以下所组成的组：5
′‑
C
‑3′
，5
′‑
CC
‑3′
，5
′‑
ACC
‑3′
，5
′‑
AACC
‑3′
，5
′‑
UAACC
‑3′
，5
′‑
GUAACC
‑3′
，5
′‑
AGUAACC
‑3′
，5
′‑
AAGUAACC
‑3′
，5
′
AAAGUAACC
‑3′
，5
′‑
GAAAGUAACC
‑3′
(SEQ ID NO：486)，并且其中，所述第一序列的3
′
端与所述第二序列的5
′
端通过所述第九序列相连，并且
所述第二序列的3
′
端与所述第三序列的5
′
端通过所述第十序列相连。14.如权利要求13所述的经工程化的引导RNA，其中当所述第九序列是5
′‑
A
‑3′
，所述第十序列是5
′‑
C
‑3′
，当所述第九序列是5
′‑
AA
‑3′
时，所述第十序列是5
′‑
C
‑3′
或5
′‑
CC
‑3′
，当所述第九序列是5
′‑
AAG
‑3′
时，所述第十序列是5
′‑
CC
‑3′
或5
′‑
ACC
‑3′
，当所述第九序列是5
′‑
AAGU
‑3′
时，所述第十序列是5
′‑
AACC
‑3′
，当所述第九序列是5
′‑
AAGUG
‑3′
时，所述第十序列是5
′‑
UAACC
‑3′
，当所述第九序列是5
′‑
AAGUGC
‑3′
时，所述第十序列是5
′‑
GUAACC
‑3′
，当所述第九序列是5
′‑
AAGUGCU
‑3′
时，所述第十序列是5
′‑
AGUAACC
‑3′
，当所述第九序列是5
′‑
AAGUGCUC
‑3′
时，所述第十序列是5
′‑
GAGUAACC
‑3′
，当所述第九序列是5
′‑
AAGUGCUU
‑3′
时，所述第十序列是5
′‑
AAGUAACC
‑3′
，当所述第九序列为5
′‑
AAGUGCUUU
‑3′
时，所述第十序列为5
′‑
AAAGUAACC
‑3′
，或当所述第九序列是5
′‑
AAGUGCUUUC
‑3′
(SEQ ID NO：485)时，所述第十序列是5
′‑
GAAGUAACC
‑3′
(SEQ ID NO：486)。15.如权利要求6所述的经工程化的引导RNA，其中，所述经工程化的支架区进一步包含第十一序列和第十二序列，所述第十一序列选自于由5
′‑
U
‑3′
，5
′‑
UU
‑3′
，5
′‑
UUC
‑3′
，5
′‑
UUCA
‑3′
，5
′‑
UUCAU
‑3′
，5
′‑
UUCAUU
‑3′
和5
′‑
UUCAUUU
‑3′
所组成的组；所述第十二序列选自于由5
′‑
A
‑3′
，5
′‑
AA
‑3′
，5
′‑
GAA
‑3′
，5
′‑
UGAA
‑3′
，5
′
AUGAA
‑3′
，5
′‑
AAUGAA
‑3′
和5
′‑
GAAUGAA
‑3′
所组成的组，并且其中，所述第四序列的3
′
端与所述接头的5
′
端通过所述第十一序列连接，且所述接头的3
′
端与所述第五序列的5
′
端通过所述第十二序列连接。16.如权利要求15所述的经工程化的引导RNA，其中当所述第十一序列是5
′‑
U
‑3′
，所述第十二序列是5
′‑
A
‑3′
，当所述第十一序列为5
′‑
UU
‑3′
时，所述第十二序列为5
′‑
AA
‑3′
，当所述第十一序列为5
′‑
UUC
‑3′
时，所述第十二序列为5
′‑
GAA
‑3′
，当所述第十一序列为5
′‑
UUCA
‑3′
时，所述第十二序列为5
′‑
UGAA
‑3′
，当所述第十一序列为5
′‑
UUCAU
‑3′
时，所述第十二序列为5
′
AUGAA
‑3′
，当所述第十一序列为5
′‑
UUCAUU
‑3′
时，所述第十二序列为5
′‑
AAUGAA
‑3′
，或当所述第十一序列为5
′‑
UUCAUUU
‑3′
时，所述第十二序列为5
′‑
GAAUGAA
‑3′
17.如权利要求6所述的经工程化的引导RNA，其中，所述经工程化的支架区进一步包含由5
′‑
A
‑3′
示出的第七序列，由5
′‑
CCGCUUCACCAAAAGCUGUCCCUUAGGGGAUUAGAACUUGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：11)示出的第八序列，由5
′
AAGUGCUUUC
‑3′
(SEQ ID NO：485)示出的第九序列，以及由5
′‑
GAAAGUAACC
‑3′
(SEQ ID NO：486)示出的第十序列；并且其中，所述第八序列的3
′
端连接至所述第一序列的5
′
端，所述第七序列的3
′
端连接至所述第八序列的5
′
端，所述第一序列的3
′
端与所述第二序列的5
′
端通过所述第九序列相连，并且所述第二序列的3
′
端与所述第三序列的5
′
端通过所述第十序列相连。18.如权利要求6所述的经工程化的引导RNA，其中，所述经工程化的支架区进一步包含由5
′‑
A
‑3′
示出的第七序列，由5
′‑
CCGCUUCACUUAGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO：350)示出的
第八序列，由5
′
AAGUGCUUUC
‑3′
(SEQ ID NO：485)示出的第九序列，以及由5
′‑
GAAAGUAACC
‑3′
(SEQ ID NO：486)示出的第十序列；并且其中，所述第八序列的3
′
端连接至所述第一序列的5
′
端，所述第七序列的3'端连接至所述第八序列的5'端，所述第一序列的3'端与所述第二序列的5'端通过所述第九序列相连，并且所述第二序列的3'端与所述第三序列的5'端通过所述第十序列相连。19.编码权利要求6
‑
18中任一项所述的经工程化的引导RNA的DNA。20.一种用于CRISPR/Cas12f1系统的经工程化的引导RNA，包括：经工程化的支架区，间隔区，和富含U的尾部，其中，所述间隔区包含10个核苷酸至50个核苷酸，并且具有与靶序列互补的序列，所述富含U的尾部的序列由(U
a
N)
b
U
c
示出，其中，N选自腺苷(A)、尿苷(U)、胞苷(C)和鸟苷(G)；并且a、b和c各自为整数，a为1
‑
5且包含端值，并且b为0或更大，所述经工程化的支架区包括：经工程化的tracrRNA，其中以下的序列以5
’
至3
’
的方向彼此连接：选自于由5'
‑
A
‑
3'、5'
‑
AA
‑
3'、5'
‑
GAA
‑
3'、5'
‑
AGAA
‑
3'、5'
‑
GAGAA
‑
3'、5'
‑
GGAGAA
‑
3'、5'
‑
UGGAGAA
‑
3'、5'
‑
GUGGAGAA
‑
3'、5'
‑
AGUGGAGAA
‑
3'、5'
‑
AAGUGGAGAA
‑
3'(SEQ ID NO:17)、5'
‑
AAAGUGGAGAA
‑
3'(SEQ ID NO:18)、5
′‑
UAAAGUGGAGAA
‑3′
(SEQ ID NO:19)、5'
‑
AUAAAGUGGAGAA
‑3′
(SEQ ID NO:20)、5'
‑
GAUAAAGUGGAGAA
‑
3'(SEQ ID NO:21)、5'
‑
UGAU AAAGUGGAGAA
‑
3'(SEQ ID NO:22)、5'
‑
CUGAUAAAGUGGAGAA
‑
3'(SE Q ID NO:23)、5'
‑
ACUGAUAAAGUGGAGAA
‑
3'(SEQ ID NO:24)、5'
‑
CACU GAUAAAGUGGAGAA
‑
3'(SEQ ID NO:25)、5'
‑
UCACUGAUAAAGUGGAG AA
‑
3'(SEQ ID NO:26)、5'
‑
UUCACUGAUAAAGUGGAGAA
‑
3'(SEQ ID NO:27),和5'
‑
CUUCACUGAUAAAGUGGAGAA
‑
3'(SEQ ID NO:10)所组成的组中的第一序列；选自于由5'
‑
G
‑
3'、5'
‑
UUAGG
‑
3'、5'
‑
CUUAGGG
‑
3'、5'
‑
CUUAGUGG
‑
3'、5'
‑
CCUUAGGUGG
‑
3'(SEQ ID NO:342)、5'
‑
CCGUUAGGUGG
‑
3'(SEQ ID N O:343)、5
′‑
CCGCUUAGGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO:344)、5'
‑
CCGCUUUAGAG GUGG
‑3′
(SEQ ID NO:345)、5
′‑
CCGCUUUUAGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO:346)、5
′‑
CCGCUUCUUAGGAAGGUGG
‑
3'(SEQ ID NO:347)、5'
‑
CCGCUUC AUUAGUGAAGGUGG
‑
3'(SEQ ID NO:348)、5'
‑
CCGCUUCACUUAGGUGA AGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO:349)、5'
‑
CCGCUUCACUUAGAGUGAAGGUGG
‑
3'(SEQ ID NO:350)、5
′‑
CCGCUUCACCUUAGGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO:351)、5
′‑
CCGCUUCACCAUUAGUGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID N O:352)、5'
‑
CCGCUUCACCAAUUAGUUGAGUGAAGGUGG
‑
3'(SEQ ID NO:353)、5'
‑
CCGCUUCACCAAAUUAGCUUGAGUGAAGGUGG
‑
3'(SEQ ID N O:354)、5
′‑
CCGCUUCACCAAAAUUAGACUUGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO:355)、5'
‑
CCGCUUCACCAAAAGUUAGAACUUGAGUGAAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO:356)、5'
‑
CCGCUUCACCAAAAGCUUAGGAACUUGAGUG AAGGUGG
‑3′
(SEQ ID NO:357)、5'
‑
CCGCUUCACCAAAAGCUUUAGAGA ACUUGAGUGAAGGUGG
‑
3'(SEQ ID NO:358)、5'
‑
CCGCUUCACCAAAAG CUGUUAGUAGAACUUGAGUGAAGGUGG
‑
3'(SEQ ID NO:359)、5'
‑
CCGC UUCACCAAAAGCUGUUAGUUAGAACUUGAGUGAAGGUGG
‑
3'(SEQ ID NO:360)、5'
‑
CCGCUUCACCAAAAGCUGUUUAGAUUAGAACUUGAGU GAAGGUGG
‑
3'(SEQ ID NO:361)、5'
‑
CCGCUUCACCAAAAGCUGUCUUA GGAUUAGAACUUGAGUGAAGGUGG
‑
3'(SEQ ID NO:362)和5'
‑
CCGCUU CACCAAAAGCUGUCCCUUAGGG
GAUUAGAACUUGAGUGAAGGUGG
‑
3'(SEQ ID NO:11)所组成的组中的第二序列；选自于由5'
‑
GCUGCUUGCAUCAGCCUAAUGUCGAGAAGUGCUUU CUUCGGAAAGUAACCCUCGA
‑3′
(SEQ ID NO:434)、5
′‑
GCUGCUUGCAU CAGCCUAAUGUCGAGAAGUGCUUU...

【专利技术属性】
技术研发人员：金龙三，金掉妍，
申请(专利权)人：基恩科雷有限责任公司，
类型：发明
国别省市：