改进的引导编辑系统技术方案

本发明专利技术涉及基因工程领域。具体而言，本发明专利技术涉及一种改进的引导编辑系统，以及通过该系统进行基因编辑的方法。更具体而言，本发明专利技术涉及通过i)对逆转录酶进行点突或者删除其多余结构域如RNase H结构域；ii)将逆转录酶与核衣壳蛋白NC融合；或i)和ii)两者的组合来提高引导编辑效率。导编辑效率。

【技术实现步骤摘要】
改进的引导编辑系统


[0001]本专利技术涉及基因工程领域。具体而言，本专利技术涉及一种改进的引导编辑系统，以及通过该系统进行基因编辑的方法。

技术介绍

[0002]许多重要的疾病和农艺性状都决定于基因组的序列。通过对基因组特定序列进行定向的改变，能够赋予生物体新的可遗传的性状，从而为疾病治疗和育种改良提供可能。目前，通过基因组编辑技术(例如CRISPR/Cas技术)可以实现对特定序列进行编辑，进而激活细胞的修复途径对损伤处进行修复。引导编辑系统(Prime Editing，PE)是一种基于CRISPR/Cas技术的可以精确修改靶位点序列的系统，该系统由两部分构成：1)具有非靶标链缺刻活性的Cas9核酸酶(Cas9
‑
H840A)和逆转录酶(reverse transcriptase，RT)构成的融合蛋白；2)3
’
端带有RT模板(RT template)和游离单链的结合区(Primer binding site，PBS)的pegRNA。该系统的工作原理是通过PBS结合Cas9
‑
H840A本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于靶向性修饰植物基因组的引导编辑系统，其包含：i)引导编辑融合蛋白和/或含有编码所述引导编辑融合蛋白的核苷酸序列的表达构建体，其中所述引导编辑融合蛋白包含CRISPR切口酶和逆转录酶；和/或ii)至少一种pegRNA和/或含有编码所述至少一种pegRNA的核苷酸序列的表达构建体，其中所述至少一种pegRNA从5
’
至3
’
方向包含引导序列、支架序列、反转录(RT)模板序列和引物结合位点(PBS)序列，其中所述至少一种pegRNA能够与所述融合蛋白形成复合物并将所述融合蛋白靶向基因组中的靶序列，导致所述靶序列内的切口。2.权利要求1的系统，其中所述CRISPR切口酶是Cas9切口酶，例如包含SEQ ID NO:2所示氨基酸序列。3.权利要求1或2的系统，其中所述逆转录酶是M
‑
MLV逆转录酶或其功能性变体。4.权利要求1
‑
3中任一项的系统，其中所述逆转录酶(a)包含选自F155Y、F155V、F156Y、D524N、D200C中任一种的突变，所述氨基酸位置参考SEQ ID NO:3；(b)connection序列被缺失；和/或(c)RNase H结构域被突变或缺失。5.权利要求4的系统，其中所述逆转录酶包含SEQ ID NO:9
‑
15中任一项所述的序列。6.权利要求1
‑
5中任一项的系统，其中在所述融合蛋白中，所述逆转录酶例如M
‑
MLV逆转录酶或其功能性变体在N端或C端与核衣壳蛋白(NC)、水解酶(PR)或整合酶(IN)直接地或通过接头融合。7.权利要求6的系统，所述核衣壳蛋白(NC)包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，或所述水解酶(PR)包含如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，或所述整合酶(IN)包含如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。8.权...

【专利技术属性】
技术研发人员：高彩霞，宗媛，
申请(专利权)人：苏州齐禾生科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：