脂质纳米颗粒的改进工艺和配制制造技术

本发明专利技术提供了用于制备包含包裹mRNA的脂质纳米颗粒的稳定冻干组合物的改进工艺，所述改进工艺导致适合短期和长期储存用于治疗用途的高mRNA完整性。在一些实施方案中，本发明专利技术提供了制备稳定冻干组合物的方法，所述方法包括以下步骤：将抗坏血酸添加到包含一个或多个脂质纳米颗粒的水溶液中，冷冻所述水溶液以获得冷冻溶液，将所述冷冻溶液干燥以获得冻干组合物，以及将所述冻干组合物的温度升高并且保持在15℃至30℃之间的温度。持在15℃至30℃之间的温度。持在15℃至30℃之间的温度。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】脂质纳米颗粒的改进工艺和配制
相关申请的交叉引用
[0001]本申请要求2020年10月6日提交的美国临时申请序列号63/088,047的优先权，将所述申请的公开内容通过引用特此并入。

技术介绍

[0002]包裹的信使RNA(mRNA)的脂质纳米颗粒递送正在变成越来越重要的用于治疗多种疾病的方法。然而，由于固有的稳定性和对温度的敏感性，mRNA易降解。因此，保持脂质纳米颗粒中包裹的mRNA的完整性以供短期和长期储存用于治疗用途是至关重要的。

技术实现思路

[0003]本专利技术尤其提供了用于制备包含包裹mRNA的脂质纳米颗粒(mRNA
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LNP)的冻干组合物的改进工艺。本专利技术基于出人意料的发现，即以下每个步骤：1)添加抗坏血酸用于冻干工艺，2)在冻干工艺之前用缓冲液预处理mRNA
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LNP组合物以维持pH，以及3)将冻干组合物的温度(例如，在二级干燥步骤期间)升高并保持至高温(例如，15℃至30℃之间)可以单独和共同提高冻干后包裹在脂质纳米颗粒中的mRNA的完整性，从而产生能够承受长期储存的高度稳定的冻干mRNA
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LNP组合物。另外，根据本专利技术的冻干工艺延长了冻干期间包裹在脂类纳米颗粒中的mRNA的完整性，同时还保持mRNA
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LNP的大小、PDI和包裹效率。因此，在一方面，本专利技术提供了制备用于长期和短期储存的具有高mRNA完整性的稳定冻干mRNA的改进方法。
[0004]在一方面，本专利技术尤其提供了制备包含一个或多个包裹mRNA的脂质纳米颗粒的稳定冻干组合物的方法，所述方法包括以下步骤：(a)向包含一个或多个包裹具有初始mRNA完整性的mRNA的脂质纳米颗粒的水溶液中添加5mM与200mM之间的抗坏血酸，(b)冷冻所述水溶液以获得冷冻溶液。
[0005]在一些实施方案中，在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mRNA完整性是初始mRNA完整性的至少50％。在一些实施方案中，在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mRNA完整性是初始mRNA完整性的至少55％。在一些实施方案中，在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mRNA完整性是初始mRNA完整性的至少60％。在一些实施方案中，在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mRNA完整性是初始mRNA完整性的至少65％。在一些实施方案中，在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mRNA完整性是初始mRNA完整性的至少70％。在一些实施方案中，在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mRNA完整性是初始mRNA完整性的至少75％。在一些实施方案中，在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mRNA完整性是初始mRNA完整性的至少80％。在一些实施方案中，在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合
物时，重构后的mRNA完整性是初始mRNA完整性的至少85％。在一些实施方案中，在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mRNA完整性是初始mRNA完整性的至少90％。在一些实施方案中，在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mRNA完整性是初始mRNA完整性的至少95％。
[0006]在一些实施方案中，所述方法包括在步骤(a)之前从所述水溶液中去除柠檬酸的步骤。在一些实施方案中，所述去除柠檬酸的步骤包括在pH 6至pH 8的pH下洗涤包含柠檬酸和EDTA的水溶液。在一些实施方案中，所述去除柠檬酸的步骤包括在pH 6至pH8的pH下洗涤包含10mM柠檬酸和1mM EDTA的水溶液。在一些实施方案中，所述去除柠檬酸的步骤包括在pH 6至pH 8的pH下洗涤包含柠檬酸和EDTA的水溶液。在一些实施方案中，所述水溶液包含1mM的柠檬酸盐缓冲液。在一些实施方案中，所述水溶液包含2mM的柠檬酸盐缓冲液。在一些实施方案中，所述水溶液包含5mM的柠檬酸盐缓冲液。在一些实施方案中，所述水溶液包含8mM的柠檬酸盐缓冲液。在一些实施方案中，所述水溶液包含10mM的柠檬酸盐缓冲液。在一些实施方案中，所述水溶液包含15mM的柠檬酸盐缓冲液。在一些实施方案中，所述水溶液包含20mM的柠檬酸盐缓冲液。在一些实施方案中，所述水溶液包含25mM的柠檬酸盐缓冲液。在一些实施方案中，所述水溶液包含50mM的柠檬酸盐缓冲液。在一些实施方案中，所述水溶液包含0.1mM的EDTA。在一些实施方案中，所述水溶液包含0.5mM的EDTA。在一些实施方案中，所述水溶液包含1mM的EDTA。在一些实施方案中，所述水溶液包含2.5mM的EDTA。在一些实施方案中，所述水溶液包含5mM的EDTA。在一些实施方案中，所述水溶液包含7.5mM的EDTA。在一些实施方案中，所述水溶液包含10mM的EDTA。
[0007]在一些实施方案中，所述方法包括在步骤(c)之后，(d)将所述冻干组合物的温度升高并保持至15℃至30℃之间的温度的步骤。
[0008]在一些实施方案中，水溶液包含约1mM至500mM的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约5mM至200mM的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约10mM至100mM的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约10mM至50mM的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约20mM至50mM的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约20mM至30mM的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约10mM至30mM的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约10mM至20mM的抗坏血酸。
[0009]在一些实施方案中，水溶液包含约1mM的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约2mM的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约3mM的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约5mM的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约8mM的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约10mM的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约15mM的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约20mM的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约25mM的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约30mM的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约40mM的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约50mM的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约75mM的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约100mM的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约125mM的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约150mM的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约175mM的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约200mM的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约250mM的抗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种制备包含一个或多个包裹mRNA的脂质纳米颗粒的稳定冻干组合物的方法，所述方法包括以下步骤：(a)向包含一个或多个包裹具有初始mRNA完整性的mRNA的脂质纳米颗粒的水溶液中添加5mM与200mM之间的抗坏血酸，(b)冷冻所述水溶液以获得冷冻溶液，(c)将所述冷冻溶液干燥长于10小时的时间段以获得冻干组合物，其中在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mRNA完整性是所述初始mRNA完整性的至少50％。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法包括在步骤(a)之前从所述水溶液中去除柠檬酸的步骤。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述去除柠檬酸的步骤包括在pH 6至pH 8的pH下洗涤包含柠檬酸和EDTA的水溶液。4.根据权利要求3所述的方法，其中所述水溶液包含1mM至10mM之间的柠檬酸盐缓冲液。5.根据权利要求3或4所述的方法，其中所述水溶液包含1mM的EDTA。6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中重构后的mRNA完整性是所述初始mRNA完整性的至少60％、至少70％、至少80％或至少85％。7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法包括在步骤(c)之后，(d)将所述冻干组合物的温度升高并保持至15℃至30℃之间的温度。8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述水溶液包含约10mM至50mM的抗坏血酸。9.根据权利要求8所述的方法，其中所述水溶液包含约20mM的抗坏血酸。10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述干燥步骤进行长于20、50、100、120或140小时。11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在步骤(d)中，将所述冻干组合物在15℃至30℃之间的温度下保持长于1小时、5小时或10小时。12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述初始mRNA完整性高于50％并且重构后的mRNA完整性高于40％。13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述初始mRNA完整性高于40％并且重构后的mRNA完整性仍高于40％。14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述初始mRNA完整性高于50％并且重构后的mRNA完整性仍高于50％。15.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中通过毛细管电泳测定所述mRNA完整性。16.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在
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20与
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30℃之间的温度下进行所述干燥步骤。17.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在约50mTorr的压力下进行所述干燥步骤。18.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在步骤(d)中，将所述冻干组合物的
温度升高并且保持在约20℃的温度。19.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述水溶液包含海藻糖。20.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述水溶液的pH低于7...

【专利技术属性】
技术研发人员：S，
申请(专利权)人：翻译生物公司，
类型：发明
国别省市：