一株胶红酵母菌及其在降解丁草胺中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一株丁草胺降解菌及其应用；该丁草胺降解菌为胶红酵母（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ?ｍｕｃｉｌａｇｉｎｏｓｅ）Ｙ－ＬＣＹ－１，已于２００９年０９月１４日保藏于“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，其保藏号为ＣＧＭＣＣＮｏ．３２７０；该菌株对丁草胺耐受能力达１０００ｍｇ.Ｌ－１，当接种量为５％，ｐＨ?６．５，２５℃时，在含１００ｍｇ.Ｌ－１的丁草胺无机盐基础培养液中培养７天后，对丁草胺降解率高达９７．６％，且对５０～５００ｍｇ.Ｌ－１的丁草胺均具有良好的降解效果；本发明专利技术提供的菌株，可应用于受丁草胺污染的水体及土壤的生物净化。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物修复
，涉及一株胶红酵母菌及其在降解除草剂丁草胺中 的应用。
技术介绍
丁草胺(C17H26ClNO2)是一种高效内吸传导型酰胺类芽前除草剂，主要用于防除水 稻田稗草和旱田中的禾本科杂草，具有用量少、活性高，选择性强等特性，在我国广为生产 和应用，同时它在水体及土壤中的残留所引起的环境污染问题也将日趋严重。一方面，丁草 胺随水纵、横向淋溶与扩散，特别是随排灌水和降水流失，会造成地下水及江河污染；另一 方面，丁草胺对藻类、光合细菌、固氮细菌等许多微生物的生长有抑制作用，从而破坏了土 壤微生态平衡(Zager，1990 ；Lee, 1991)；再者，丁草胺对淡水鱼类和两栖动物的毒性很大 (Bushra et al,2002 ；卜宁等，2005 ；耿宝荣等，2005)；另外，丁草胺具有致突变性和遗传毒 性，通过食物链和生物富集等将毒性逐级传递，最终影响人类健康(Ou et al,2000 ；Wang et al，1987)。目前减轻甚至解除丁草胺在土壤中污染的途径主要靠光解和微生物降解(王一 茹等，1996)。与光解相比，微生物代谢在除草剂降解中具有针对性强、周期短、见效快的优 势。因此寻找丁草胺的高效降解菌株，对于丁草胺环境污染的生物修复具有重要的现实意 义。目前能够降解丁草胺的微生物资源以细菌居多，具代表性的有假单胞菌、芽孢杆菌，而 丝状真菌较少，酵母菌则更为少见。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一株可有效降解丁草胺并能用于丁草胺污染水土治理的 胶红酵母菌。本专利技术的另一目的是提供一种由上述胶红酵母菌所制备的菌剂。本专利技术的目的是通过如下技术方案实现的本专利技术所提供的丁草胺降解菌株是胶红酵母菌(Rhodotorula mucilaginosa) Y-LCY-I，已于2009年09月14日保藏于“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心 (简称CGMCC) ”，其保藏号为CGMCCNo. 3270。地址北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生 物研究所，邮政编码100101。本专利技术所提供的胶红酵母菌(Rhodotorula mucilaginosa)Y-LCY-1的菌剂，是由 此菌种与必要添加成分混合制得。上述的胶红酵母菌(Rhodotorula mucilaginosa)Y-LCY-1在降解丁草胺中的应 用，特征在于该菌株可耐高浓度丁草胺生长，最高耐受浓度达IOOOmg · Γ1,当接种量为 5%, pH 6. 5，25°C时，在含IOOmg · L—1的丁草胺无机盐基础培养液中培养7天后，对丁草胺 降解率高达97. 6%，且对50 500mg · Γ1的丁草胺均具有良好的降解效果。本专利技术提供的菌株，丰富了丁草胺降解菌株的多样性，为解决丁草胺的残留污染问题提供了重要菌株资源，可应用于受丁草胺污染的水体及土壤的净化。所述的胶红酵母菌(Rhodotorulamucilaginose) Y-LCY-I,已于 2OO9 年 O9 月14日保藏于中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏号为 CGMCCNo. 3270。附图说明 图1胶红酵母菌(Rhodotorula mucilaginose)Y-LCY-1在以丁草胺为唯一碳源及 能源，于25°C、pH为6. 5的条件下，对IOOmg · L—1 丁草胺连续7天的降解曲线图。图2胶红酵母菌(Rhodotorula mucilaginose) Y-LCY-1在以丁草胺为唯一碳源及 能源，于25°C、pH为6. 5的条件下，对不同浓度丁草胺连续7天的降解曲线图。具体实施例方式实例1、胶红酵母菌(Rhodotorula mucilaginose) Y-LCY-1 CGMCCNo. 3270 的分离、纯化及鉴定本专利技术提供的胶红酵母菌(Rhodotorulamucilaginose) Y-LCY-1 CGMCCNo. 3270， 是从哈尔滨郊区长期施用丁草胺的稻田土壤中分离筛选的，其具体分离和纯化过程如下取土样10g，置于50mL 丁草胺浓度为IOOmg · L—1基础无机盐培养液中，于28°C， 160rpm恒温摇床上培养，然后每隔一周以10 %的接种量接入新鲜的丁草胺无机盐培养液 中，并逐渐提高丁草胺用量，至培养液中丁草胺浓度达到IOOOmg ·厂1，如此驯化约三个月。 然后在丁草胺基础无机盐琼脂平板上用稀释涂布法分离，置于28°C培养3 5天，传代稳定 的菌落，纯化3 4次后得到纯菌株，将得到的纯化降解菌株分别回接于丁草胺基础培养液 中，验证其降解能力，通过气相色谱检测丁草胺的残留量，最终筛选出一株丁草胺高效降解 菌，转接于丁草胺麦氏琼脂斜面培养基中，培养48h后，置于4°C冰箱保存。所述的无机盐培养液是按下述比例配制的=K2HPO4 0. lg, MgSO4 · 7Η20 0. 2g， FeSO4 · 7H20 0. OOlg, (NH4)2SO4 0. lg, CaSO4 0. 04g 加入蒸馏水至 IOOOmL, pH 调至 6. 5。高 压蒸汽灭菌(121°C，20min)。所述的丁草胺基础无机盐琼脂培养基丁草胺浓度为500mg · Γ1的无机盐培液添 加1. 5 2% (W/V)的琼脂。所述的麦氏琼脂培养基是按下述比例配制的葡萄糖l.Og，KCl 1.8g，酵母膏 2. 5g，醋酸钠 8. 2g，蒸馏水 IOOOmL, pH 调至 6. 5，115°C灭菌 20min。所用的气相色谱检测条件为GC_14C型气相色谱仪，FID检测器；色谱柱为内涂 14%0V-1701大口径毛细管柱(30mX 0.53mm i. d.)；温度条件进样口 250°C，柱温225°C， 检测器250°C ；气体流量氮气lOOkpa，氢气50kpa，空气50kpa，尾吹IOOkpa ；不分流进样， 保留时间为3.9min。进样量1 μ L。根据样品定容体积和稀释倍数以及样品色谱峰和标样色谱峰的峰面积，利用外标 法计算培养液中丁草胺的浓度。计算公式CK=NX-^X-|^XCoVx ^o式中CX 培养液中丁草胺的浓度(mg ^lN:样品稀释倍数V。标样进样量(μ L)Vx 样品进样量(μ Sx 样品色谱峰峰面积S。标样色谱峰峰面积C。标样浓度mg · L—1)根据不接菌处理中丁草胺的浓度和接菌处理中丁草胺的浓度计算丁草胺的降解 率。计算公式 式中Χ% 丁草胺的生物降解率Cx 接菌处理培养液中丁草胺的浓度(mg · Γ1) Cck 未接菌对照培养液中丁草胺的浓度(mg · Γ1)分离得到的丁草胺降解菌株的形态特征和生长特点在麦氏琼脂培养基上，28°C 条件下培养3天，菌落特征为菌落圆形，表面凸起，边缘整齐，不透明，湿润，粘稠，橙红色。 菌株个体卵形或球形，大小为2. 0 5. 0 μ m，单一、成对，不形成子囊孢子或担孢子，在麦芽 汁上产生红色类胡萝卜素。最适生长温度为28°C，最适pH为6.5，可在4°C条件下生长。分离得到的丁草胺降解菌株部分生理生化特征如表1所示表1 丁草胺降解菌株Y-LCY-I生理生化特征 注+ 阳性_ 阴性ν 可变通过扩增该菌株的26Sr DNA D1/D2，得到长度573bp的26SrDNA D1/D2序列。提 交本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株胶红酵母菌（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ　ｍｕｃｉｌａｇｉｎｏｓａ）Ｙ－ＬＣＹ－１，该菌株已于２００９年０９月１４日保藏于“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，其保藏号为ＣＧＭＣＣＮｏ．３２７０。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李春艳，成小松，徐春红，张美超，臧海莲，熊明华，孙晶，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：93[中国|哈尔滨]