本发明专利技术提供了一种具有抗肿瘤活性的海洋真菌——小红酵母（Rhodotorula?minuta）MNP100101A，及其在制备抗肿瘤药物中的应用。该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉武汉大学，保藏编号：CCTCC?No：M2012289，保藏日期2012年7月18日。本发明专利技术的有益效果主要体现在：提供了一株新的具有抗肿瘤活性的海洋真菌小红酵母（Rhodotorula?minuta）MNP100101A，对肿瘤细胞HepG2（肝癌细胞）、PC-12（神经癌细胞）均具有一定的细胞毒性，为新药筛选提供了基础。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一株新的具有抗肿瘤活性的海洋真菌-小红酵母(Rhodotorulaminuta ) 100101A,及其在制备抗肿瘤药物中的应用。
技术介绍
从陆地微生物中寻找新的抗肿瘤药物的成功率已大大降低，而海洋微生物作为新的药物来源正越来越受到世界关注。海洋环境苛刻，具有低温、低照、高盐、高压和寡营养等特点，海洋微生物由于栖息于这样的极限环境下，产生了与陆地生物完全不同的代谢系统和机体防御系统，所以能产生许多结构新颖、活性特异的次级代谢产物，并且许多特异的化学结构类型是在陆地微生物中难以发现的。同时据研究，海洋微生物产生的次级代谢产物具有抗肿瘤、抗氧化、抗菌等生物活性也是陆生微生物所无法比拟的。 海洋微生物作为抗肿瘤活性物质的新来源，受到了全世界海洋研究工作者的关注。
技术实现思路
本专利技术的目的即是为了在海洋微生物中寻找具有抗肿瘤活性的物质，提供一株抗肿瘤活性海洋真菌-小红酵母(Rhodotorula minuta )100101A及其应用，为研究开发新型抗肿瘤药物提供先导化合物。本专利技术采用的技术方案是一株具有抗肿瘤活性的海洋真菌-小红酵母(Rhodotorula minuta) 100101A,保藏于中国典型培养物保藏中心，地址中国，武汉，武汉大学，邮编430072，保藏编号CCTCC No M 2012289，保藏日期2012 年 7 月 18 日。该菌株的菌落特征如下涂布或划线接种于平板培养基上生长迅速，28°C培养48 h后长出圆形、湿润、淡红色、易挑起，直径约为O. 5-0. 8cm的菌落；所述小红酵母Rhodotorula minuta 100101A细胞特征如下椭圆形，单球菌，大小为2.3-5. O μ mX 4. 0—10. O μ m。本专利技术小红酵母100101A是从浙江省东海海域采集的海水中筛选分离得到。菌株的筛选纯化方法为将采集的海水运用稀释涂布法涂于土豆平板培养基上，多次平板划线至出现单菌落，再挑取单菌落至新鲜土豆斜面培养基上，28°C培养48h，以菌株形态特征区别进行挑选，即得该菌株，并对该菌株进行菌种鉴定。将所述的小红酵母Rhodotorula minuta 100101A的18sRNA部分核苷酸序列与美国国立生物信息中心(National Center for Biotechnology Information USA, NCBI)的基因库中的微生物18sRNA序列比对，将其命名为海洋小红酵母Rhodotorula minuta100101A。所述小红酵母Rhodotorula minuta 100101A的18sRNA的部分核苷酸序如下 CTTCCGTAAGGGTAACCTGCGGAAGGATCATTAATGAATTTTAGGACGTTCTTTTTAGAAGTCCGACCATTTCATTTTCTTACACTGTGCACACACTTCTTTTTACACACACTTTTAACACATTAGTATAAGAATGTAATAGTCTCTTAATTGAGCATAAACAAAAATAAAACTTTCAGCAACGGATCTCTTGGCTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAATTGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACC TTGCACTCTTTGGTATTCCGAAGAGTATGTCTGTTTGAGTATCATGAAACTCTCAACCCCCCTATTTTGTAATGAAATGGGCGTGGGCTTGGATTATGGTTGTCTGTCGGCGTAATTGCCGGCTCAACTGAAATACACGAGCAACCCTATTGAAATAGACGGTTTGACTTGGCGTAATAATTATTTCGCTAAGGACGTCTTCTTCAAATATAAGAGGTGCTTCTAATGCGCTTTATAGCACTTTAAGCTTTAGATCTCAAATCAGT CAGGACTACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAGGCGGAGGAAGA。本专利技术还涉及所述的小红酵母100101A在制备抗肿瘤药物中的应用。所述抗肿瘤药物为治疗神经癌或肝癌的药物。具体的，所述应用为所述小红酵母100101A提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。优选的，所述提取物为正丁醇提取物，由如下方法获得小红酵母100101A接种至液体发酵培养基，于25 35°C、15(T250r/min振荡条件下培养14 30天，得到发酵液，发酵液经细胞破碎，离心取滤液用正丁醇萃取，萃取液浓缩得浸膏，浸膏以甲醇水体积比为2 8^10 0为流动相，进行HP-20大孔树脂层析过柱，梯度洗脱，收集甲醇体积浓度80%以上的洗脱液，旋蒸浓缩挥干，即得所述正丁醇提取物；所述液体培养基组成为葡萄糖15 25g/L，蛋白胨5 15g/L，酵母浸出粉8 15 g/L，磷酸铁O. 05、. 15 g/L，溶剂为人工海水，pH 6 7。所述人工海水每IOOml 组成为=NaCl 2. 448g, Na2SO4O. 3917g, KC10. 0664g,KBr O. 0096g, SrCl2O. 0024g, MgCl · 6H20 0. 4981g, CaCl2 · H2OO. 1102g, NaHCO3O. 0192g,H3BO3O. 0026g, NaF 0.0004g，蒸馏水 100ml。具体的，所述正丁醇提取物可按如下方法获得(I)将保藏的小红酵母Rhodotorula minuta 100101A菌株接种于斜面培养基,于25-35°C培养24-48 h，得到活化后的菌种；所述的斜面培养基组成为葡萄糖15 25g/L，蛋白胨5 15g/L，酵母浸出粉8 15 8/1，磷酸铁0.05、.15 g/L，琼脂15 25 g/L，溶剂为人工海水，pH 6 7 ；(2)将步骤(I)活化培养后的海洋真菌小红酵母Rhodotorula minuta 100101A菌体接种至液体种子培养基中，于25 35°C条件下培养16 48h，得到种子液；所述液体种子培养基组成为葡萄糖15 25g/L，蛋白胨5 15g/L，酵母粉8 15 g/L，磷酸铁0. 05、. 15 g/L,溶剂为人工海水，pH 6^7 ；(3)将步骤(2)种子液以19TlO%的体积比的接种量，移种到液体发酵培养基中，25 35°C、150-250r/min振荡条件下培养1Γ30天，得到发酵液；所述液体培养基组成为葡萄糖15 25g/L，蛋白胨5 15g/L，酵母粉8 15g/L，磷酸铁0. 05、. 15g/L，溶剂为人工海水，pH 6 7 ；(4)将步骤(3)的发酵液于4°C条件下细胞破碎，离心分离除去菌体，所得发酵液用正丁醇萃取后收集上层萃取液，旋蒸浓缩挥干制得的油状提取物总浸膏；(5)将步骤(4)的油状提取物总浸膏以甲醇水体积比为2 8^10 0的溶液为流动相(10:0时即全部为甲醇)，进行HP-20大孔树脂层析过柱，梯度洗脱，收集甲醇体积浓度80%以上的洗脱液，旋蒸浓缩挥干，即得所述正丁醇提取物。本专利技术的有益效果主要体现在提供了一株新的具有抗肿瘤活性的海洋真菌小红酵母(Rhodotorula minu本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株海洋真菌——小红酵母（Rhodotorula？minuta？）100101A，保藏于中国典型培养物保藏中心，？地址：中国，武汉，武汉大学，邮编430072，保藏编号：CCTCC？No：M？2012289，保藏日期：2012年7月18日。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王鸿，吴一书，谢燕瑾，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。