抗SIRPα抗体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抗SIRPα抗体及其应用，所述SIRPα抗体包括第一抗体或第二抗体或第三抗体，第一抗体包括三个第一重链CDR区和三个第一轻链CDR区；所述三个第一重链CDR区包括：HCDR1为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，HCDR2为SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，HCDR3为SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列；所述三个第一轻链CDR区包括：LCDR1为SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列，LCDR2为SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列，LCDR3为SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列；本发明专利技术可有效阻断CD47与SIRPα信号通路，促进巨噬细胞的吞噬，用于结肠直肠癌患者的治疗。用于结肠直肠癌患者的治疗。用于结肠直肠癌患者的治疗。

【技术实现步骤摘要】
抗SIRP
α
抗体及其应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，特别是涉及一种抗SIRPα抗体及其应用。

技术介绍

[0002]肿瘤是全球第二大导致人类死亡的病因。肿瘤生长微环境的形成，不仅依赖其自身分泌的一些细胞因子，还能够通过某些信号通路逃避免疫监视及调控，从而使机体对肿瘤细胞的免疫耐受，进而导致肿瘤的快速进展。
[0003]SIRPα也称为CD172a、BIT或SHPS
‑
1，是紧密相关的SIRP蛋白的SIRP配对的受体家族的成员，是Ig超家族的单次跨膜分子，其存在于巨噬细胞、树突细胞、嗜中性粒细胞等髓细胞以及神经胶质细胞中。SIRPα主要由造血细胞(包括巨噬细胞、树突细胞和粒细胞)表达，并且还表达于神经元上，尤其是脑细胞、神经胶质细胞、平滑肌细胞和内皮细胞以及一些肿瘤细胞上(Barclay和van den Berg 2014)。SIRPα是一种跨膜蛋白，具有含有三个Ig样结构域的胞外结构域，以及含有免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)的胞质区。以前的阻断型抗体在阻断SIPRα和CD47结合的同时，会结合SIRPβ和SIRPγ。

技术实现思路

[0004]针对上述情况，为了解决现有技术的技术问题，本专利技术提供一种抗SIRPα抗体及其应用，其阻断SIRPα与CD47的结合，弱结合SIRPβ，不结合SIRPγ。
[0005]本专利技术是通过下述技术方案来解决上述技术问题的：
[0006]第一方面，本专利技术提供一种SIRPα抗体，其特征在于，其包括第一抗体或第二抗体或第三抗体，第一抗体包括三个第一重链CDR区和三个第一轻链CDR区；所述三个第一重链CDR区包括：HCDR1为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，HCDR2为SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，HCDR3为SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列；所述三个第一轻链CDR区包括：LCDR1为SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列，LCDR2为SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列，LCDR3为SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列；
[0007]第二抗体包括三个第二重链CDR区和三个第二轻链CDR区；所述三个第二重链CDR区包括：HCDR4为SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列，HCDR5为SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列，HCDR6为SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列；所述三个第二轻链CDR区包括：LCDR4为SEQ ID NO.10所示的氨基酸序列，LCDR5为SEQ ID NO.11所示的氨基酸序列，LCDR6为SEQ ID NO.12所示的氨基酸序列；
[0008]第三抗体包括三个第三重链CDR区和三个第三轻链CDR区；所述三个第三重链CDR区包括：HCDR7为SEQ ID NO.13所示的氨基酸序列，CHDR8为SEQ ID NO.14所示的氨基酸序列，HCDR9为SEQ ID NO.15所示的氨基酸序列；所述三个第三轻链CDR区包括：LCDR7为SEQ ID NO.16所示的氨基酸序列，LCDR8为SEQ ID NO.17所示的氨基酸序列，LCDR9为SEQ ID NO.18所示的氨基酸序列。
[0009]第二方面，本专利技术提供一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码第一方面所
述的SIRPα抗体。
[0010]第三方面，本专利技术提供一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有第二方面所述的核酸分子。
[0011]第四方面，本专利技术提供一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞中含有至少一个拷贝的第三方面所述的表达载体。
[0012]第五方面，本专利技术提供一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括第一方面所述的SIRPα抗体，以及药学上可接受的载体和/或稀释剂。
[0013]第六方面，本专利技术提供第一方面所述的SIRPα抗体、第四方面所述的宿主细胞或第五方面所述的药物组合物中任意一种或至少两种的组合在制备用于预防、减轻、改善或抑制疾病或病症的药物中的用途。
[0014]优选地，所述疾病或病症选自：结肠直肠癌。
[0015]本专利技术的积极进步效果在于：本专利技术可有效阻断CD47与SIRPα信号通路，促进巨噬细胞的吞噬，能够增强巨噬细胞吞噬，同时能够下调肿瘤微环境MDSC(Myeloid
‑
Derived Suppressor Cells，骨髓来源的抑制性细胞)的数量，激活T细胞，用于结肠直肠癌患者的治疗。
附图说明
[0016]图1为本专利技术中3G5、3H9和15D7杂交瘤抗体纯化结果示意图。
[0017]图2为本专利技术中ELISA法测定杂交瘤抗体与抗原结合活性示意图。
[0018]图3为本专利技术中ELISA法测定杂交瘤抗体与hSIRPβ
‑
his的结合活性示意图。
[0019]图4为本专利技术中ELISA法测定杂交瘤抗体与hSIRPγ
‑
his的结合活性示意图。
[0020]图5为本专利技术中ELISA测定杂交瘤抗体与配体竞争活性示意图。
[0021]图6为本专利技术中重组抗体纯化结果示意图。
[0022]图7为本专利技术中ELISA法检测重组抗体与抗原结合活性示意图。
[0023]图8为本专利技术中ELISA法检测重组抗体与hSIRPβ
‑
his的结合活性示意图。
[0024]图9为本专利技术中ELISA法检测重组抗体与hSIRPγ
‑
his的结合活性示意图。
[0025]图10为本专利技术中ELISA法检测重组抗体竞争活性示意图。
具体实施方式
[0026]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。
[0027]本专利技术抗SIRPα抗体的制备方法包括以下步骤：
[0028]步骤一，小鼠免疫，经过纯化的SIRPα抗原以完全弗氏佐剂乳化，采用皮下注射或腹腔注射方法免疫6
‑
8周龄BALB/C小鼠，免疫剂量为50μg/只，间隔两周后进行第二次免疫，以不完全弗氏佐剂乳化皮下注射，免疫剂量为50μg/只；免疫两次后取尾血以ELISA法梯度稀释测定血清效价；根据血清效价结果确定是否加强免疫，选取抗体效价最高的小鼠进行后续的细胞融合，小鼠体内产生能分泌特异性靶蛋白抗体的B细胞；BALB/C小鼠可以采用上海西普尔
‑
必凯实验动物有限公司培养的小鼠；
[0029]步骤二，饲养细胞制备：按需配制完全培养基；颈椎脱臼处死健康BALB/c小鼠，
75％酒精浸泡消毒；小鼠正卧位，在无菌环境下剪开腹部小鼠皮肤，暴露腹膜；用注射器吸取约5ml的IMDM培养基，镊子夹起腹膜，针头水平刺入被夹起腹膜部位，注入注射器内液体；旋转针头使针斜口向下，此时针头不能拔出并轻微挑起腹膜，用手指按摩小鼠腹背部使培养基充分润洗腹腔；吸出小鼠腹腔内液本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种SIRPα抗体，其特征在于，其包括第一抗体或第二抗体或第三抗体，第一抗体包括三个第一重链CDR区和三个第一轻链CDR区；所述三个第一重链CDR区包括：HCDR1为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，HCDR2为SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，HCDR3为SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列；所述三个第一轻链CDR区包括：LCDR1为SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列，LCDR2为SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列，LCDR3为SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列；第二抗体包括三个第二重链CDR区和三个第二轻链CDR区；所述三个第二重链CDR区包括：HCDR4为SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列，HCDR5为SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列，HCDR6为SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列；所述三个第二轻链CDR区包括：LCDR4为SEQ ID NO.10所示的氨基酸序列，LCDR5为SEQ ID NO.11所示的氨基酸序列，LCDR6为SEQ ID NO.12所示的氨基酸序列；第三抗体包括三个第三重链CDR区和三个第三轻链CDR区；所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁红，王贤淼，田登科，郭凌敏，毛志鹏，徐永凤，
申请(专利权)人：杭州美赛生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：