抗CD28抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及抗CD28抗体或抗原结合片段，其用于治疗或预防肿瘤、自身免疫疾病或炎症性疾病中的应用。在一些实施方案中，所述抗CD28抗体或抗原结合片段包含选自SEQ ID NO:1

【技术实现步骤摘要】
抗CD28抗体及其应用


[0001]本专利技术属于免疫学领域。具体地，本专利技术涉及一种抗CD28抗体及其应用。
技术背景
[0002]CD28是T淋巴细胞表面表达的共刺激分子，对T细胞的活化起到重要作用。它与APC(抗原递呈细胞)上的B7分子结合，介导T细胞的共刺激并促进其存活、增殖以及产生细胞因子。初始T细胞的完全活化通常需要三个信号，第一信号是抗原和抗原受体的结合，第二信号是共刺激信号，第三信号是细胞因子信号。CD28作为共刺激分子，参与了第二信号的接收。
[0003]当DC(树突状细胞)表面的特异pMHC(肽
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主要组织相容性复合体)结合了初始Th细胞(辅助性T细胞)或Tc细胞(细胞毒性T细胞)表面多拷贝的某个TCR(T细胞受体)时将传递第一信号。TCR和pMHC结合，将导致与TCR紧密相邻的CD3链上ITAM被Lck激酶磷酸化。其他胞内信号转导相关酶随后被募集到此处，与CD4或CD8共受体及CD3链的胞质尾区相接触。这些酶一起介导酶级联化学反应，导致其他多个酶的活化。当这种活化级联反应出现于多个TCR时，T细胞将接收到第一信号(Mak,Saunders et al.2013,Primer to the immune response,Newnes.)。
[0004]在多数情况下，TCR和pMHC的结合不足以完全活化一个初始Th细胞或Tc细胞，共刺激信号传导形式的第二信号是必需的。对于Th细胞，接收第一信号后导致Th细胞表面的重要共刺激分子CD28的表达上调。然而CD28要传递第二信号到Th细胞核内，其必须同递呈活化性pMHC的DC表面的配体B7分子相结合。T细胞活化是T细胞继续增殖和分化的基础，T细胞完全活化需要第一信号和第二信号的共同参与。T细胞通过TCR识别，此为T细胞活化的第一信号。TCR与CD3分子形成TCR
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CD3复合体，CD3分子的功能是转导TCR识别抗原产生的活化信号。第二信号(或共刺激信号)则由APC或靶细胞表面的共刺激分子与T细胞表面的相应共刺激分子相互作用产生，CD28则是T细胞活化中极其重要的共刺激分子。
[0005]第一款CD28超级激动性抗体Theralizumab(TGN1412，TAB08)被设计用于治疗自身免疫相关疾病(Attarwala 2010,J Young Pharm 2(3):332
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336.)，并于2006年开始首次临床试验。目前Theralizumab在Phase II临床试验中用于Merkel细胞癌、类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、银屑病等的治疗。
[0006]CD28靶点更多在于拮抗剂药物的开发。如OSE Immunotherapeutics的FR
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104(JNJ
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3133)是PEG化的单价抗CD28 Fab抗体，用于类风湿性关节炎、器官移植排斥、术后并发症的治疗。百时美施贵宝的Lulizumab也是针对CD28结构域的拮抗剂抗体，用于治疗系统性红斑狼疮、Sjogren
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Larsson综合征等。CD28相关的其它药物如溶瘤病毒产品，基因治疗产品、融合蛋白产品，针对肿瘤、移植并发症、自身免疫性疾病等适应症的研究也均处于临床研究阶段。

技术实现思路

[0007]本专利技术涉及抗CD28抗体及其应用。具体地，本专利技术涉及以下内容：
[0008]1.抗CD28抗体或抗原结合片段，其中所述抗CD28抗体或抗原结合片段包含以下HCDR1，HCDR2，HCDR3，LCDR1，LCDR2和LCDR3或其变体中的一个或多个：
[0009](1)HCDR1的序列包含SEQ ID NO:10所示的序列或由其组成，
[0010]HCDR2的序列包含SEQ ID NO:11所示的序列或由其组成，
[0011]HCDR3的序列包含SEQ ID NO:12
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17中任一个所示的序列或由其组成，
[0012]LCDR1的序列包含SEQ ID NO:18所示的序列或由其组成，
[0013]LCDR2的序列包含SEQ ID NO:19所示的序列或由其组成，
[0014]LCDR3的序列包含SEQ ID NO:20所示的序列或由其组成；
[0015](2)SEQ ID NO:1所示的重链可变区包含的HCDR1，HCDR2和HCDR3，SEQ ID NO:7所示的轻链可变区包含的LCDR1，LCDR2和LCDR3；
[0016]优选按照Kabat编号系统，HCDR1的序列包含SEQ ID NO:10所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO:11所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO:12所示的序列或由其组成，LCDR1的序列包含SEQ ID NO:18所示的序列或由其组成，LCDR2的序列包含SEQ ID NO:19所示的序列或由其组成，LCDR3的序列包含SEQ ID NO:20所示的序列或由其组成；
[0017](3)SEQ ID NO:2所示的重链可变区包含的HCDR1，HCDR2和HCDR3，SEQ ID NO:7所示的轻链可变区包含的LCDR1，LCDR2和LCDR3；
[0018]优选按照Kabat编号系统，HCDR1的序列包含SEQ ID NO:10所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO:11所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO:13所示的序列或由其组成，LCDR1的序列包含SEQ ID NO:18所示的序列或由其组成，LCDR2的序列包含SEQ ID NO:19所示的序列或由其组成，LCDR3的序列包含SEQ ID NO:20所示的序列或由其组成；
[0019](4)SEQ ID NO:3所示的重链可变区包含的HCDR1，HCDR2和HCDR3，SEQ ID NO:7所示的轻链可变区包含的LCDR1，LCDR2和LCDR3；
[0020]优选按照Kabat编号系统，HCDR1的序列包含SEQ ID NO:10所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO:11所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO:14所示的序列或由其组成，LCDR1的序列包含SEQ ID NO:18所示的序列或由其组成，LCDR2的序列包含SEQ ID NO:19所示的序列或由其组成，LCDR3的序列包含SEQ ID NO:20所示的序列或由其组成；
[0021](5)SEQ ID NO:4所示的重链可变区包含的HCDR1，HCDR2和HCDR3，SEQ ID NO:7所示的轻链可变区包含的LCDR1，LCDR2和LCDR3；
[0022]优选按照Kabat编号系统，HCDR1的序列包含SEQ ID NO:10所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO:11所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO:15本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抗CD28抗体或抗原结合片段，其中所述抗CD28抗体或抗原结合片段包含以下HCDR1，HCDR2，HCDR3，LCDR1，LCDR2和LCDR3或其变体中的一个或多个：(1)SEQ ID NO:1所示的重链可变区包含的HCDR1，HCDR2和HCDR3，SEQ ID NO:7所示的轻链可变区包含的LCDR1，LCDR2和LCDR3；优选按照Kabat编号系统，HCDR1的序列包含SEQ ID NO:10所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO:11所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO:12所示的序列或由其组成，LCDR1的序列包含SEQ ID NO:18所示的序列或由其组成，LCDR2的序列包含SEQ ID NO:19所示的序列或由其组成，LCDR3的序列包含SEQ ID NO:20所示的序列或由其组成；(2)SEQ ID NO:2所示的重链可变区包含的HCDR1，HCDR2和HCDR3，SEQ ID NO:7所示的轻链可变区包含的LCDR1，LCDR2和LCDR3；优选按照Kabat编号系统，HCDR1的序列包含SEQ ID NO:10所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO:11所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO:13所示的序列或由其组成，LCDR1的序列包含SEQ ID NO:18所示的序列或由其组成，LCDR2的序列包含SEQ ID NO:19所示的序列或由其组成，LCDR3的序列包含SEQ ID NO:20所示的序列或由其组成；(3)SEQ ID NO:3所示的重链可变区包含的HCDR1，HCDR2和HCDR3，SEQ ID NO:7所示的轻链可变区包含的LCDR1，LCDR2和LCDR3；优选按照Kabat编号系统，HCDR1的序列包含SEQ ID NO:10所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO:11所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO:14所示的序列或由其组成，LCDR1的序列包含SEQ ID NO:18所示的序列或由其组成，LCDR2的序列包含SEQ ID NO:19所示的序列或由其组成，LCDR3的序列包含SEQ ID NO:20所示的序列或由其组成；(4)SEQ ID NO:4所示的重链可变区包含的HCDR1，HCDR2和HCDR3，SEQ ID NO:7所示的轻链可变区包含的LCDR1，LCDR2和LCDR3；优选按照Kabat编号系统，HCDR1的序列包含SEQ ID NO:10所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO:11所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO:15所示的序列或由其组成，LCDR1的序列包含SEQ ID NO:18所示的序列或由其组成，LCDR2的序列包含SEQ ID NO:19所示的序列或由其组成，LCDR3的序列包含SEQ ID NO:20所示的序列或由其组成；(5)SEQ ID NO:5所示的重链可变区包含的HCDR1，HCDR2和HCDR3，SEQ ID NO:7所示的轻链可变区包含的LCDR1，LCDR2和LCDR3；优选按照Kabat编号系统，HCDR1的序列包含SEQ ID NO:10所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO:11所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO:16所示的序列或由其组成，LCDR1的序列包含SEQ ID NO:18所示的序列或由其组成，LCDR2的序列包含SEQ ID NO:19所示的序列或由其组成，LCDR3的序列包含SEQ ID NO:20所示的序列或由其组成；或(6)SEQ ID NO:6所示的重链可变区包含的HCDR1，HCDR2和HCDR3，SEQ ID NO:7所示的轻链可变区包含的LCDR1，LCDR2和LCDR3；
优选按照Kabat编号系统，HCDR1的序列包含SEQ ID NO:10所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO:11所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO:17所示的序列或由其组成，LCDR1的序列包含SEQ ID NO:18所示的序列或由其组成，LCDR2的序列包含SEQ ID NO:19所示的序列或由其组成，LCDR3的序列包含SEQ ID NO:20所示的序列或由其组成，(7)HCDR1的序列包含SEQ ID NO:10所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO:11所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO:12
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17中任一个所示的序列或由其组成，LCDR1的序列包含SEQ ID NO:18所示的序列或由其组成，LCDR2的序列包含SEQ ID NO:19所示的序列或由其组成，LCDR3的序列包含SEQ ID NO:20所示的序列或由其组成，其中所述变体与所述对应的CDR序列分别具有3，2或1个氨基酸差异(优选保守氨基酸置换)或分别具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性，并且所述变体保留与CD28的结合亲和力。2.权利要求1所述的抗CD28抗体或抗原结合片段，其中所述抗CD28抗体包含选自以下各项组成的组的重链可变区和轻链可变区，或其变体：(1)包含SEQ ID NO:1所示的序列或由其组成的重链可变区，包含SEQ ID NO:7所示的序列或由其组成的轻链可变区；(2)包含SEQ ID NO:2所示的序列或由其组成的重链可变区，包含SEQ ID NO:7所示的序列或由其组成的轻链可变区；(3)包含SEQ ID NO:3所示的序列或由其组成的重链可变区，包含SEQ ID NO:7所示的序列或由其组成的轻链可变区；(4)包含SEQ ID NO:4所示的序列或由其组成的重链可变区，包含SEQ ID NO:7所示的序列或由其组成的轻链可变区；(5)包含SEQ ID NO:5所示的序列或由其组成的重链可变区，包含SEQ ID NO:7所示的序列或由其组成的轻链可变区；或(6)包含SEQ ID NO:6所示的序列或由其组成的重链可变区，包含SEQ ID NO:7所示的序列或由其组成的轻链可变区，其中所述变体与所述对应的可变区分别具有3，2或1个氨基酸差异(优选保守氨基酸置换)或分别具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性，并且所述变体保留与CD28的结合亲和力，优选地，所述抗CD28抗体包含SEQ ID NO:8所示的轻链恒定区和SEQ ID NO:9所示的重链恒定区。3.权利要求1或2所述的抗CD28抗体或抗原结合片段，其中所述抗原结合片段选自Fab、Fab'、F(ab')2、F(ab)2、Fd、Fv、Fab/c、互补决定区片段、scFv、scFv多聚体、二硫键稳定性Fv(dsFv)、(dsFv)2、双特异性dsFv(dsFv
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dsFv')、双链抗体(Diabody)、二硫键稳定的双链抗体(ds
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Diabody)、由包含一个或多个CDR的抗体的一部分形成的多特异性抗体、单域抗体(sdAb)、纳米抗体、结构域抗体或二价结构域抗体。4.特异性结合CD28的多肽，其选自以下各项组成的组：
(1)多肽，其包含SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12所示的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合CD28的抗CD28抗体的一部分，所述抗体还包含SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20所示的序列；(2)多肽，其包含SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20所示的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合CD28的抗CD28抗体的一部分，所述抗体还包含SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12所示的序列；(3)多肽，其包含SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:13所示的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合CD28的抗CD28抗体的一部分，所述抗体还包含SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20所示的序列；(4)多肽，其包含SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄俊杰，徐振前，张慧，吴精博，汪志炜，陈俊有，张少榆，黄贤明，李胜峰，
申请(专利权)人：百奥泰生物制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：