靶向RANKL的治疗性抗体制造技术

本发明专利技术提供了RANKL的单克隆抗体，特别是高亲和力的RANKL人源化单克隆抗体。本发明专利技术还提供与人、食蟹猴和小鼠的RANKL交叉反应的功能性单克隆抗体。本发明专利技术进一步提供了本发明专利技术的抗体的氨基酸序列、克隆或表达载体、宿主细胞和用于表达或分离抗体的方法、鉴定抗体的表位。还提供包含本发明专利技术抗体的治疗组合物。本发明专利技术还提供了用抗RANKL抗体治疗癌症和其它疾病的方法。的方法。

【技术实现步骤摘要】
靶向RANKL的治疗性抗体
[0001]本申请是申请日为2018年10月25日、专利技术名称为“靶向RANKL的治疗性抗体”的中国申请号为201811299652.4的分案申请。


[0002]本专利技术一般涉及针对RankL的抗体及其组合物，以及使用抗RankL抗体治疗与骨丢失相关的疾病的疗法。

技术介绍

[0003]NF kappa
‑
B配体(RANKL)的受体激活剂，也称为骨保护素配体(OPGL)和肿瘤坏死因子配体超家族成员11(TNFSF11)，是TNF超家族的成员(Anderson DM,et.al,Nature 390(6656):175
‑
179)。RANKL可以在细胞表面或以可溶形式表达(Findlay DM,et.al,Osteoporos Int 22(10):2597
‑
2602)。通过与破骨细胞及其前体上的受体RANK结合，介导破骨细胞的形成、活化和存活(Hsu H,et.al,Proc Natl Acad Sci U S A.1999Mar 30；96(7):3540
‑
2545)。越来越多的证据也表明，肿瘤细胞在骨内相互作用，刺激RANK
‑
RANKL系统的受体激活剂，导致癌症诱发的骨质破坏(Roodman GD,N Engl J Med 2004；350:1655
‑
1664)。
[0004]早期动物研究证明了RANKL作为治疗破骨细胞介导的骨丢失的治疗靶标的潜力(Lacey DL,et.al,Cell.1998；93:165
‑
176；Ann E.Kearns,et.al,Endocrine Reviews 29(2):155
‑
192)。使用OPG Fc融合蛋白(一种内源性RNAKL抑制剂)的动物研究和临床试验提供了RANKL在骨重建中至关重要的有力证据(Ann E.Kearns,et.al,Endocrine Reviews29(2):155
‑
192；Bekker PJ,J Bone Miner Res.2001；16:348
‑
360)。
[0005]Denosumab是一种经FDA批准的RANKL全人单克隆抗体，其临床研究显示椎骨、非椎骨和髋部骨折明显减少，并提供了与绝经后骨质疏松症女性使用denosumab相符的证据(David W.Dempster,Clin Ther.2012；34:521
‑
536)。三项关键的随机III期试验也表明，Denosumab在预防骨骼相关事件(SRE)方面优于唑来膦酸，对晚期癌症骨转移患者具有良好的安全性和便利性(Clin Ther.2012；34:521
‑
536；Prasad Narayanan,Journal of Cancer.2013；2(4):272
‑
277)。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供分离的抗体，特别是单克隆抗体或人源化单克隆抗体。
[0007]一方面，本专利技术提供抗体或其抗原结合片段，其中抗体或抗原结合片段与人、猴和小鼠RANKL结合。
[0008]一方面，本专利技术提供抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段
[0009]a)结合于人RANKL，K
D
为6.98E
‑
10M以下；并且
[0010]b)结合于猴RANKL，K
D
为5.32E
‑
11M以下。
[0011]前述抗体或抗原结合片段具有下列性质中的至少一种：
[0012]a)结合于人RANKL，K
D
为6.98E
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10M至6.33E
‑
11M，并且结合于猴RANKL，K
D
为5.32E
‑
11M至9.03E
‑
12M；
[0013]b)抑制RANKL介导的细胞功能；
[0014]c)抑制RAW细胞分化成破骨细胞样细胞。
[0015]本专利技术提供一种抗体或其抗原结合片段，其包含一个氨基酸序列，所述氨基酸序列与选自由SEQ ID NOs﹕1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、和14所组成的组中的序列具有至少70％、80％、90％、95％、或99％的同源性，
[0016]其中所述抗体或抗原结合片段特异性结合RANKL。
[0017]本专利技术提供一种抗体或其抗原结合片段，其包含一个氨基酸序列，所述氨基酸序列选自由SEQ ID NOs﹕1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、和14所组成的组中的序列，
[0018]其中所述抗体或抗原结合片段特异性结合RANKL。
[0019]本专利技术提供一种抗体或其抗原结合片段，包含：
[0020]a)重链可变区，其具有的氨基酸序列与选自由SEQ ID NOs﹕1、2、3、4、5、6、和7所组成的组中的序列具有至少70％、80％、90％或95％的同源性；以及
[0021]b)轻链可变区，其具有的氨基酸序列与选自由SEQ ID NOs﹕8、9、10、11、12、13、和14所组成的组中的序列具有至少70％、80％、90％或95％的同源性，
[0022]其中所述抗体或抗原结合片段特异性结合RANKL。
[0023]本专利技术提供一种抗体或其抗原结合片段，包含：
[0024]a)重链可变区，其具有的氨基酸序列选自由SEQ ID NO﹕1、2、3、4、5、6、和7所组成的组中的序列；以及
[0025]b)轻链可变区，其具有的氨基酸序列选自由SEQ ID NOs﹕8、9、10、11、12、13、和14所组成的组中的序列，
[0026]其中所述抗体或抗原结合片段特异性结合RANKL。
[0027]在各种实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含：
[0028]a)具有选自SEQ ID NO﹕1的氨基酸序列的重链可变区；和
[0029]b)具有选自SEQ ID NO﹕8的氨基酸序列轻链的可变区，
[0030]其中抗体或抗原结合片段特异性结合RANKL；
[0031]或抗体或其抗原结合片段包括：
[0032]a)具有选自SEQ ID NO﹕2的氨基酸序列的重链可变区；和
[0033]b)具有选自SEQ ID NO﹕9的氨基酸序列的轻链可变区，
[0034]其中抗体或抗原结合片段特异性结合RANKL；
[0035]或抗体或其抗原结合片段包括：
[0036]a)具有选自SEQ ID NO﹕3的氨基酸序列的重链可变区；和
[0037]b)具有选自SEQ ID NO﹕10的氨基酸序列的轻链可变区，
[0038]其中抗体或抗原结合片段特异性结合RANKL；
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗体或其抗原结合片段，包含：包含CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区；以及包含CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区，其中所述重链可变区CDR1序列如SEQ ID NO﹕30所示，所述重链可变区CDR2序列如SEQ ID NO﹕25所示，所述重链可变区CDR3序列如SEQ ID NO﹕15所示；所述轻链可变区CDR1序列如SEQ ID NO﹕36所示，所述轻链可变区CDR2序列如SEQ ID NO﹕29所示，所述轻链可变区CDR3序列如SEQ ID NO﹕21所示；其中所述抗体或抗原结合片段特异性结合RANKL。2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区如SEQ ID NO﹕4所示；所述轻链可变区如SEQ ID NO﹕11所示。3.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段结合于人和猴的RANKL。4.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段a)结合于人RANKL，K
D
为4.04E
‑
11以下；并且b)结合于猴RANKL，K
D
为7.94E
‑
12以下。5.如权利要求4所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段具有下列性质中的至少一种：a)抑制RANKL介导的细胞功能；b)抑制RAW细胞分化成破骨细胞样细胞。6.如权利要求1至5中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段是嵌合抗体、人源化抗体、全人抗体、或大鼠抗体。7.一种核酸分子，其编码如权利要求1至6中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。8.一种克隆或表达载体，其包含如权利要求7所述的核酸分子。9.一种宿主细胞，其包含一个以上如权利要求8所述的克隆或表达载体。10.一种用于生产如权利要求1至6中任一项所述的抗体或其抗原结...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘洁颖，李竞，
申请(专利权)人：河北药明生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：