本发明专利技术涉及抗CD70纳米抗体及其用途。本发明专利技术提供一种CD70结合分子，包含抗CD70纳米抗体或其抗原结合片段，所述抗CD70纳米抗体的互补决定区CDR包含CDR1、CDR2和CDR3。本发明专利技术还提供含有所述CD70结合分子的嵌合抗原受体及其表达细胞。本文所述抗体和细胞具有良好的安全性以及靶向CD70的治疗效果。以及靶向CD70的治疗效果。
【技术实现步骤摘要】
抗CD70纳米抗体及其用途
[0001]本专利技术涉及生物免疫治疗
，具体涉及抗CD70纳米抗体及其用途。
技术介绍
[0002]CD70属于肿瘤坏死因子(TNF)超家族成员，正常组织中CD70是一种II型跨膜糖蛋白，仅仅短暂地表达在活化的T细胞、B细胞及成熟的树突状细胞中，CD27是其受体。在病理状态下，研究发现CD70高表达于多种肿瘤细胞中。目前以CD70为靶点的免疫治疗药物已经在临床前期研究中应用。
[0003]研究表明CD70在多种恶性肿瘤中表达均异常升高，包括肾细胞癌、急性骨髓性白血病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫性大细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、胰腺癌、乳腺癌、胶质母细胞瘤及其它肿瘤等，是一个有前景的肿瘤免疫治疗靶标。
[0004]嵌合抗原受体T细胞(Chimeric Antigen Receptor
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T cell，CAR
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T)是一种针对肿瘤细胞表面特异性抗原的新型免疫治疗方法。现在，许多研究人员正在开发治疗实体瘤的CAR
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T细胞。
[0005]抗体作为CAR中重要的组成部分，其对于CAR
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T发挥特异性高效杀伤作用、降低毒性具有决定性影响。因此能够以高特异性结合目标抗原、同时具有低免疫原性的抗体是开发CAR
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T产品的重点。羊驼体内能够产生特异性、亲和力高的VHH抗体，同时由于VHH抗体本身的特性使其能够识别传统scFv抗体不能识别的抗原表位，另外羊驼VHH基因与人VH基因具有较高的同源性，所以免疫原性比较低也利于人源化改造。本领域尚无含抗CD70纳米抗体的CAR
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T细胞报道。
技术实现思路
[0006]本专利技术提供一种CD70结合分子，包含抗CD70纳米抗体或其抗原结合片段，所述抗CD70纳米抗体的互补决定区CDR包含CDR1、CDR2和CDR3，其中CDR1包括SEQ ID NO:1
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7中任一所示的序列、CDR2包括SEQ ID NO:8
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13中任一所示的序列、和CDR3包括SEQ ID NO:14
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20中任一所示的序列。
[0007]在一个或多个实施方案中，所述抗CD70纳米抗体的重链可变区序列如SEQ ID NO:21
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28中任一所示。
[0008]在一个或多个实施方案中，所述抗CD70纳米抗体的FR1可选自SEQ ID NO:21
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28中任一所示的VHH的FR1，FR2可选自SEQ ID NO:21
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28中任一所示的VHH的FR2，FR3可选自SEQ ID NO:21
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28中任一所示的VHH的FR3，FR4可选自SEQ ID NO:21
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28中任一所示的VHH的FR4，
[0009]在一个或多个实施方案中，所述CD70结合分子是包含一条、两条或多条抗CD70纳米抗体或其抗原结合片段的单价或多价纳米抗体或单域抗体、或多特异性纳米抗体或单域抗体。
[0010]在一个或多个实施方案中，所述多价结合分子或多特异性结合分子通过连接子连接多个抗CD70纳米抗体或其抗原结合片段。所述连接子由选自G和S的1
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15个氨基酸组成。
[0011]在一个或多个实施方案中，所述纳米抗体是骆驼重链抗体或软骨鱼重链抗体。
[0012]在一个或多个实施方案中，所述纳米抗体还包含重链恒定区。
[0013]在一个或多个实施方案中，所述重链恒定区是骆驼重链抗体的恒定区，包含CH2和CH3。在一个或多个实施方案中，所述CH2和CH3是人IgG Fc的CH2和CH3，例如IgG1的CH2和CH3。优选地，所述重链恒定区如SEQ ID NO:37所示。
[0014]在一个或多个实施方案中，所述重链恒定区是软骨鱼重链抗体的恒定区，包含CH1、CH2、CH3、CH4和CH5。
[0015]在一个或多个实施方案中，本专利技术任一实施方案所述的CD70结合分子为嵌合抗体或完全人抗体；优选为完全人抗体。
[0016]本专利技术另一方面提供一种嵌合抗原受体，包含任选的信号肽序列、本文任一实施方案所述的CD70结合分子、铰链区、跨膜区和胞内区。
[0017]在一个或多个实施方案中，胞内区包括胞内共刺激域和/或胞内信号域。
[0018]在一个或多个实施方案中，从N端到C端，该嵌合抗原受体依次含有信号肽、本文任一实施方案所述的CD70结合分子、铰链区、跨膜区、胞内共刺激域和胞内信号域。
[0019]本专利技术还提供核酸分子，其具有选自以下任一项的序列：
[0020](1)本文任一实施方案所述CD70结合分子或嵌合抗原受体的编码序列；
[0021](2)(1)的互补序列；
[0022](3)(1)或(2)中任一序列的5
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50bp的片段。
[0023]在一个或多个实施方案中，所述片段是引物。
[0024]本专利技术还提供一种核酸构建物，包含本文所述的核酸分子。
[0025]在一个或多个实施方案中，所述核酸构建物是克隆载体、表达载体或整合载体。
[0026]本专利技术还提供一种宿主细胞，选自：
[0027](1)表达和/或分泌本文任一实施方案所述CD70结合分子或嵌合抗原受体；
[0028](2)包含本文所述的核酸分子；和/或
[0029](3)包含本文所述的核酸构建物。
[0030]在一个或多个实施方案中，所述宿主细胞是免疫效应细胞，优选T细胞。
[0031]本专利技术还提供一种产生本文任一实施方案CD70结合分子的方法，包括：在适合产生CD70结合分子(例如纳米抗体或其抗原结合片段，单价或多价纳米抗体或单域抗体、或多特异性纳米抗体或单域抗体)的条件下培养本文所述的宿主细胞，和任选的从培养物中纯化所述CD70结合分子。
[0032]本专利技术还提供一种药物组合物，包含本文任一实施方案所述CD70结合分子、核酸分子、核酸构建物或宿主细胞，和药学上可接受的辅料。
[0033]在一个或多个实施方案中，所述药物组合物用于治疗CD70表达相关的疾病或病况。
[0034]本专利技术还提供本文任一实施方案所述CD70结合分子、嵌合抗原受体、核酸分子、核酸构建物或宿主细胞在制备活化的免疫细胞(例如T细胞)中的用途。
[0035]本专利技术还提供本文任一实施方案所述CD70结合分子、嵌合抗原受体、核酸分子、核酸构建物或宿主细胞在制备用于预防或治疗CD70表达相关的疾病或病况的药物中的用途。
[0036]在一个或多个实施方案中，所述疾病或病况选自以下的一种或多种：肾细胞癌、急
性骨髓性白血病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫性大细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、胰腺癌、乳腺癌、胶质母细胞瘤。
[0037]本专利技术还提供一种本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种CD70结合分子，包含抗CD70纳米抗体或其抗原结合片段，所述抗CD70纳米抗体的互补决定区CDR包含CDR1、CDR2和CDR3，其中CDR1包括SEQ ID NO:1
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7中任一所示的序列、CDR2包括SEQ ID NO:8
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13中任一所示的序列、和CDR3包括SEQ ID NO:14
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20中任一所示的序列，优选地，所述CD70结合分子还具有选自以下一项或多项的特征：所述抗CD70纳米抗体的重链可变区序列如SEQ ID NO:21
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28中任一所示，所述CD70结合分子是包含一条、两条或多条抗CD70纳米抗体或其抗原结合片段的单价或多价纳米抗体或单域抗体、或多特异性纳米抗体或单域抗体，所述纳米抗体是骆驼重链抗体或软骨鱼重链抗体，所述纳米抗体还包含重链恒定区，CD70结合分子为嵌合抗体或完全人抗体。2.一种嵌合抗原受体，包含任选的信号肽序列、权利要求1所述的CD70结合分子、铰链区、跨膜区和胞内区，优选地，胞内区包括胞内共刺激域和/或胞内信号域，优选地，从N端到C端，该嵌合抗原受体依次含有信号肽、权利要求1所述的CD70结合分子、铰链区、跨膜区、胞内共刺激域和胞内信号域。3.一种核酸分子，其具有选自以下任一项的序列：(1)权利要求1所述CD70结合分子或权利要求2所述的嵌合抗原受体的编码序列；(2)(1)的互补序列；(3)(1)或(2)中任一序列的5
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50bp的片段，优选地，所述片段是引物。4.一种核酸构建物，包含权利要求3所述的核酸分子，优选地，所述核酸构建物是克隆载体、表达载体或整合载体。5.一种宿主细胞...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄慧，彭涛，胡红明，刘翔，陈燕，
申请(专利权)人：上海恒润达生生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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