靶向制造技术

本发明专利技术涉及双靶向

【技术实现步骤摘要】
靶向CD19和CD22嵌合抗原受体及其用途
本专利技术专利申请是专利技术名称为“靶向
CD19
和
CD22
嵌合抗原受体及其用途”、
申请号为
201810503222.3
的专利技术专利申请的分案申请
。


[0001]本专利技术属于细胞治疗领域，具体涉及双靶向
CD19
和
CD22
的嵌合抗原受体及其用途
。

技术介绍

[0002]嵌合抗原受体
(Chimeric Antigen Receptor
‑
T cell
，
CAR
‑
T)T
细胞是指经基因修饰后，能以
MHC
非限制性方式识别特定目的抗原，并且持续活化扩增的
T
细胞
。2012
年国际细胞治疗协会年会中指出生物免疫细胞治疗已经成为手术
、
放疗
、
化疗外的第四种治疗肿瘤的手段，并将成为未来肿瘤治疗必选手段
。CAR
‑
T
细胞回输治疗是当前肿瘤治疗中最明确有效的免疫治疗形式
。
大量研究表明，
CAR
‑
T
细胞可以有效的识别肿瘤抗原，引起特异性的抗肿瘤免疫应答，显著改善患者的生存状况
。
[0003]嵌合抗原受体
(CAR)
是
CAR
‑
T
>的核心部件，赋予
T
细胞
HLA
非依赖的方式识别肿瘤抗原的能力，这使得经过
CAR
改造的
T
细胞相较于天然
T
细胞表面受体
TCR
能够识别更广泛的目标
。CAR
的基础设计中包括一个肿瘤相关抗原
(tumor
‑
associated antigen
，
TAA)
结合区
(
通常来源于单克隆抗体抗原结合区域的
scFV
段
)
，一个胞外铰链区，一个跨膜区和一个胞内信号区
。
目标抗原的选择对于
CAR
的特异性
、
有效性以及基因改造
T
细胞自身的安全性来讲都是关键的决定因素
。
[0004]CD19
是一种
B
细胞表面的
95kDa
的糖蛋白，从
B
细胞发育的早期即开始表达，直至其分化为浆细胞
。CD19
是免疫球蛋白
(Ig)
超家族的成员之一，作为
B
细胞表面信号转导复合物的组成元素之一，参与调控了
B
细胞受体的信号转导过程
。
在
CD19
缺陷的小鼠模型中，外周淋巴组织中
B
细胞的数量会出现明显的减少，对疫苗和丝裂原的应答也会下降，同时伴有血清
Ig
水平的减低
。
通常认为，
CD19
的表达只限于
B
细胞系
(B
‑
cell lineage)
，而不表达于多能造血干细胞表面
。CD19
还表达于大多数
B
细胞淋巴瘤
、
套细胞淋巴瘤
、ALLs、CLLs、
多毛细胞白血病，和一部分急性髓性白血病细胞的表面
。
因此，在对白血病
/
淋巴瘤的治疗中，
CD19
是一种非常有价值的免疫治疗靶点
。
重要的是，
CD19
不会表达于除
B
细胞外的大多数正常细胞表面，包括多能造血干细胞，这一特征使
CD19
可以作为一种安全的治疗靶点，可将患者发生自身免疫性疾病或不可逆性骨髓毒性损伤的风险降至最低
。
当前，已经研制出了抗
CD19
的抗体或
scFv
片段，并且在小鼠模型和人类
/
灵长类动物中证明了其应用的前景
。
[0005]近年来，
CD19 CAR T
细胞领域竞争激烈，一些大的制药公司也和研究机构建立了合作关系
。
接受表达
CD28
或4‑
1BB
的
CD19 CAR T
细胞治疗后，小儿和成人复发或难治性急性
B
细胞淋巴瘤具有大约
90
％的完全缓解率
。
最近，
CD19 CAR T
细胞治疗在弥漫性大
B
细胞淋巴瘤，滤泡淋巴瘤或慢性淋巴瘤中具有
50
％
‑
100
％的总体缓解率
。CD19 CAR T
细胞治疗多发性骨髓瘤病人中具有临床优势，由于终末分化的浆细胞不表达
CD19
，恶性
B
细胞前体持续
产生恶性浆细胞
。
[0006]CD22
广泛表达在
B
细胞前体的急性淋巴白血病
(BCP
‑
ALL)
中，在研究的
111
病例数中有
109
例的原始细胞中都表达
CD22
抗原，表达率大于
90
％
。Lars Nitschke
报道
CD22
隶属于唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素
(Siglecs
，
sialic acid
‑
binding immunoglobulin
‑
like lectins)
家族
。
这个家族的蛋白只在免疫系统的细胞中表达，所有自身免疫和获得性免疫系统里的细胞类型至少表达一种
Siglecs
家族蛋白
。B
细胞表达两个这个家族的成员，其中之一就是
CD22
，另外一个是
Siglec
‑
G。
大部分
Siglecs
都带有酪氨酸免疫受体依赖的抑制结构
(ITIMs
，
immunoreceptor tyrosine
‑
based inhibitory motifs)
，对免疫进行负调节
。ITIMs
上的酪氨酸经过
Src
家族蛋白激酶磷酸化后，产生了一些含有
SH2(Src homology2)
结构域分子的结合位点
。SHP1(SHP
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种多核苷酸序列，所述多核苷酸序列选自：
(1)
含有依次连接的抗
CD19
和抗
CD22
单链抗体的编码序列
、
人
CD8
铰链区的编码序列
、
人
CD8
跨膜区的编码序列
、
人
41BB
胞内区的编码序列
、
人
CD3
ζ
胞内区的编码序列和任选的
EGFR
的含胞外结构域
III
和胞外结构域
IV
的片段的编码序列的多核苷酸序列；和
(2)(1)
所述多核苷酸序列的互补序列
。2.
如权利要求1所述的多核苷酸序列，其特征在于，在所述抗
CD19
单链抗体的编码序列前的所述信号肽的编码序列如
SEQ ID NO:1
第1‑
66
位核苷酸序列所示；和
/
或所述抗
CD19
单链抗体的轻链可变区的编码序列如
SEQ ID NO:1
第
67
‑
387
位核苷酸序列所示；和
/
或所述抗
CD22
单链抗体的重链可变区的编码序列如
SEQ ID NO:1
第
403
‑
774
位核苷酸序列所示；和
/
或所述抗
CD22
单链抗体的轻链可变区的编码序列如
SEQ ID NO:1
第
829
‑
1149
位核苷酸序列所示；和
/
或所述抗
CD19
单链抗体的重链可变区的编码序列如
SEQ ID NO:1
第
1165
‑
1524
位核苷酸序列所示；和
/
或所述人
CD8
铰链区的编码序列如
SEQ ID NO:1
第
1531
‑
1671
位核苷酸序列所示；和
/
或所述人
CD8
跨膜区的编码序列如
SEQ ID NO:1
第
1672
‑
1737
位核苷酸序列所示；和
/
或所述人
41BB
胞内区的编码序列如
SEQ ID NO:1
第
1738
‑
1878
位核苷酸序列所示；和
/
或所述人
CD3
ζ
胞内区的编码序列如
SEQ ID NO:1
第
1879
‑
2214
位核苷酸序列所示
。3.
一种融合蛋白，所述融合蛋白选自：
(1)
含有依次连接的抗
CD19
单链抗体
、
抗
CD22
单链抗体
、
人
CD8
铰链区
、
人
CD8
跨膜区
、
人
41BB
胞内区和人
CD3
ζ
胞内区的融合蛋白和任选的
EGFR
的含胞外结构域
III
和胞外结构域
IV
的片段的编码序列；和
(2)
在
(1)
限定的氨基酸序列中经过取代
、
缺失或添加一个或几个氨基酸且保留活化
T
细胞活性的由
(1)
衍生的融合蛋白；优选地，所述抗
CD19
单链抗体为抗
CD19
单克隆抗体
FMC63。
优选地，所述抗
CD22
单链抗体为抗
CD22
单克隆抗体
M971。4.
如权...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘雅容，金涛，
申请(专利权)人：上海恒润达生生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：