复制型逆转录病毒检测引物及方法技术

本发明专利技术涉及复制型逆转录病毒(Replication Competent Retroviruses，RCR)检测引物及方法，具体提供了一种可快速检测样品中RCR的引物组，经方法学验证表明具有优异的专属性、灵敏度和耐用性。本发明专利技术的方法符合国家药监局药审中心发布的《人源干细胞产品药学研究与评价技术指导原则(试行)》的规定，参照美国食品与药品监督管理局FDA发布的《基于逆转录病毒载体的人类基因治疗产品在产品生产和患者随访期间对复制能力逆转录病毒的测试》行业指南中对基于逆转录病毒载体的基因治疗产品RCR检测的要求，开发了本文所述的RCR检测引物及方法，可有效减少相关基因治疗产品如CAR‑T、CAR‑NK等免疫细胞治疗产品检测放行的周期和成本。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物检测领域，具体涉及复制型逆转录病毒的检测。

技术介绍

1、随着病毒分子生物学，结构生物学的发展，人们对病毒的更深入的认识为基因治疗提供了稳定的理论基础，并且促成了病毒载体在临床研究中的广泛应用。γ-逆转录病毒载体是第一个进入临床研究的病毒载体，对病毒载体在基因治疗的应用的可行性及安全性进行了评估。截至2012年，仍有2/3的临床试验用到了病毒载体，其中逆转录病毒载体占到了19.7％。其中，γ-逆转录病毒载体是一类rna病毒，其中的许多野生型病毒都具有致病性，如murine leukaemia virus和feline leukaemia virus等，因此对在基因治疗产品中使用的病毒载体的安全性应当进行评估。

2、一个重要的考虑是由于逆转录病毒可将外源基因整合进入细胞基因组中，可能引起插入突变(insertional mutagenesis)，使得细胞基因序列发生改变并长期影响细胞基因表达，如整合位点位于原癌基因附近的细胞基因表达的上调可以改变细胞生长，影响宿主细胞基因型和表型的改变和导致内源性病毒的激活。在基因治疗重症免疫系本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于检测样品中是否存在复制型逆转录病毒的引物组，其特征在于，所述引物组的正向引物与SEQ ID NO:1具有不低于90％的同一性，所述引物组的反向引物与SEQ IDNO:2具有不低于90％的同一性。

2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述引物组的正向引物与SEQ ID NO:1具有或约有90％、90.9％、95％、95.2％或100％的同一性，所述引物组的反向引物与SEQ IDNO:2具有或约有91.3％、92％、95.7％、95.8％或100％的同一性；或所述引物组还包括探针，所述探针与SEQ ID NO:3具有不低于85％的同一性，优选地，所述探针与SE...

【技术特征摘要】

1.一种用于检测样品中是否存在复制型逆转录病毒的引物组，其特征在于，所述引物组的正向引物与seq id no:1具有不低于90％的同一性，所述引物组的反向引物与seq idno:2具有不低于90％的同一性。

2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述引物组的正向引物与seq id no:1具有或约有90％、90.9％、95％、95.2％或100％的同一性，所述引物组的反向引物与seq idno:2具有或约有91.3％、92％、95.7％、95.8％或100％的同一性；或所述引物组还包括探针，所述探针与seq id no:3具有不低于85％的同一性，优选地，所述探针与seq id no:3具有或约有86.7％、88.2％、93.3％、93.8％或100％的同一性。

3.权利要求1所述的引物组在制备检测样品中是否存在逆转录病毒的试剂中的应用，所述逆转录病毒含有galv包膜或是以长臂类人猿白血病病毒(gibbon ape leukemiavirus，galv)包膜蛋白为包膜的γ-逆转录病毒。

4.一种用于检测样品中是否存在复制型逆转录病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1或2所述的引物组。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含qpcr反应体系的常规成分，如dntps、pcr反应缓冲液或dna聚合酶。

6.一种检测样品中是否存在复...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨艳梅，魏洁琼，赵威，
申请(专利权)人：上海恒润达生生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：