【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，尤其涉及tigit抗体、其制备方法和应用。
技术介绍
1、tigit是t细胞、nk细胞上广泛表达的一种共抑制性受体，当tigit与肿瘤细胞上的配体pvr/pvrl2结合时，通过信号通路传导，抑制cd8+t细胞或nk细胞的免疫杀伤活性，从而促使肿瘤细胞逃逸。
2、目前，tigit被认为是最有前景和潜力的靶点之一，多种证据支持tigit在限制肿瘤的适应性免疫和固有免疫方面起着关键作用。因而，本专利技术通过对tigit抗体进行设计和研究。而目前而言，多数的tigit抗体存在一定的使用缺陷，如部分竞争活性弱，或存在热稳定性差等。
技术实现思路
1、为解决现有的tigit抗体多存在一定的缺陷，本专利技术提供了新的tigit抗体、及其制备方法和应用。本专利技术的目的在于提供一种竞争活性强、特异性高、热稳定性更佳的tigit抗体，及其制备方法和应用。
2、为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案。
3、tigit抗体，
4、所述tigit抗体由重链和轻链组成；
5、所述重链包含以下至少一种：
6、第一重链（huvh1），其氨基酸序列与seq id no：1具有85～100 %的同一性；
7、第二重链（huvh2），其氨基酸序列与seq id no：2具有85～100 %的同一性；
8、第三重链（huvh3），其氨基酸序列与seq id no：3具有85～100 %的同一性；>
9、所述轻链包含以下至少一种：
10、第一轻链（huvl1），其氨基酸序列与seq id no：4具有85～100 %的同一性；
11、第二轻链（huvl2），其氨基酸序列与seq id no：5具有85～100 %的同一性；
12、第三轻链（huvl3），其氨基酸序列与seq id no：6具有85～100 %的同一性。
13、作为优选，
14、所述huvh1的氨基酸序列如seq id no：1所示；
15、所述huvh2的氨基酸序列如seq id no：2所示；
16、所述huvh3的氨基酸序列如seq id no：3所示；
17、所述huvl1的氨基酸序列如seq id no：4所示；
18、所述huvl2的氨基酸序列如seq id no：5所示；
19、所述huvl3的氨基酸序列如seq id no：6所示。
20、作为优选，
21、所述抗体为人源化抗体。
22、作为优选，
23、所述tigit抗体与人tigit重组蛋白（tigit-ecd-mfc）结合。
24、tigit抗体的制备方法，
25、所述方法包括：
26、1）杂交瘤抗体测序：培养鼠源性杂交瘤细胞，从中得到纯化后的rna，逆转录为cdna作为模板后采用特异性pcr引入对目的片段进行体外扩增，将阳性pcr产物连接t载体进行质粒的重组和转化，通过蓝白斑筛选和pcr验证，选取阳性克隆培养并测序，得到鼠源性抗体原始序列；
27、2）人源性序列构建：基于步骤1）所得的鼠源性抗体原始序列，利用3d建模的方法并经过数据库对比，将鼠源性抗体原始序列突变为人源性重链序列和人源性轻链序列；
28、3）抗体构建：将步骤2）所得的人源性重链序列和人源性轻链序列组合成人源化抗体；
29、4）抗体表达：于expi293哺乳动物表达系统中进行步骤3）所得人源化抗体的表达；
30、5）抗体纯化：经过步骤4）表达后收取细胞上清液进行纯化至纯度≥90 %。
31、作为优选，
32、步骤1）所述鼠源性杂交瘤细胞的培养方法包括：
33、1-1）利用人tigit重组蛋白对实验小鼠进行靶蛋白免疫注射，使小鼠体内产生能分泌特异性靶蛋白抗体的b细胞；
34、1-2）处死实验小鼠后取脾脏细胞进行小鼠细胞融合，得到融合细胞；
35、1-3）所得融合细胞经elisa法检测，筛选能够竞争结合人tigit重组蛋白的融合细胞进行亚克隆；
36、1-4）进行至少2个周期的亚克隆后经elisa法检测与tigit-his结合强及与pvr-hfc竞争强的11a12克隆进行建株，得到鼠源性杂交瘤细胞。
37、作为优选，
38、步骤1）鼠源性抗体原始序列包括：
39、重链核酸序列、重链氨基酸序列、轻链核酸序列和轻链氨基酸序列。
40、作为优选，
41、所述重链核酸序列如seq id no：7所示；
42、所述轻链核酸序列如seq id no：8所示。
43、作为优选，
44、所述重链氨基酸序列如seq id no：9所示；
45、所述轻链氨基酸序列如seq id no：10所示。
46、tigit抗体的应用，
47、所述tigit抗体用于制备药物和/或药物组合物；
48、所述药物和/或药物组合物用于治疗与人tigit相关的疾病；
49、所述疾病为肿瘤、癌症、免疫性疾病或感染性疾病。
50、本专利技术的有益效果在于：
51、本专利技术提供了一种高特异性、强竞争活性且热稳定性优异的tigit抗体，以及其详细的制备方法。且经试验，如图10所示本专利技术tigit抗体对细胞分泌ifn-γ具有明显的促进作用，且如图11所示，在皮下移植肿瘤模型药效学评价试验中表现出优异的肿瘤抑制效果。
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1.TIGIT抗体，其特征在于，
2.根据权利要求1所述的TIGIT抗体，其特征在于，
3.根据权利要求1或2所述的TIGIT抗体，其特征在于，
4.根据权利要求1或2所述的TIGIT抗体，其特征在于，
5.TIGIT抗体的制备方法，其特征在于，
6.根据权利要求5所述的TIGIT抗体的制备方法，其特征在于，
7.根据权利要求5所述的TIGIT抗体的制备方法，其特征在于，
8.根据权利要求7所述的TIGIT抗体的制备方法，其特征在于，
9.根据权利要求7所述的TIGIT抗体的制备方法，其特征在于，
10.TIGIT抗体的应用，其特征在于，
【技术特征摘要】
1.tigit抗体，其特征在于，
2.根据权利要求1所述的tigit抗体，其特征在于，
3.根据权利要求1或2所述的tigit抗体，其特征在于，
4.根据权利要求1或2所述的tigit抗体，其特征在于，
5.tigit抗体的制备方法，其特征在于，
6.根据权利要求5...
【专利技术属性】
技术研发人员：袁红，郭凌敏，徐永凤，戴悦毅，毛志鹏，丁慧，
申请(专利权)人：杭州美赛生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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