包含SARS-CoV-2刺突蛋白或其受体的融合蛋白制造技术

一种融合蛋白，包含全长SARS

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含SARS
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CoV
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2刺突蛋白或其受体的融合蛋白


[0001]本申请涉及COVID
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19诊断或治疗的医学领域，并且特别是涉及包含严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS
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CoV
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2)刺突蛋白或SARS
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CoV
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2刺突蛋白的亚基1或亚基2之一或SARS
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CoV
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2刺突蛋白的人类血管紧张素转化酶2(ACE2)受体的融合蛋白。所述融合蛋白可用于开发能够筛选抑制病毒刺突蛋白与人类ACE2结合的试剂的测定。
[0002]背景
[0003]SARS
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CoV
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2是一种来自冠状病毒科(Coronaviridae)的包膜RNA病毒(Gorbalenya,A.E等人,2020,Nature Microbiology,5(4):p.536
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544)，具有若干种结构组分，包括刺突(S)、包膜(E)、膜(M)和核衣壳(N)蛋白(Lu,R.等人,2020,Lancet 395(10224):p.565
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574)。S蛋白由两个亚基(S1和S2)组成，它们在病毒膜上形成三聚体；S1包含负责与ACE2宿主细胞受体结合的RBD(Hoffmann,M.等人,2020,Cell,181(2):p.271
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280.e8)，而S2使宿主和病毒膜之间的融合成为可能(Lan,J.,等人,2020,Nature,581(7807):215
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220；Wrapp,D.,等人,2020,Science,367(6483):p.1260
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1263)。
[0004]SARS
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CoV
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2已经造成了广泛的COVID
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19大流行，感染了全球数百万人，并且夺去了数十万人的生命。目前，主要和最准确的诊断方法是通过鼻咽拭子的PCR测试(Peng等人,2020,J Med Virol.24；10.1002/jmv.25936)；然而，迫切需要开发能够不论临床症状如何而识别所有受感染的个体的可靠、高度灵敏和特异性的抗体测试。这一信息将对于建立社区监测和实施遏制病毒传播的政策至关重要。
[0005]美国食品药品监督管理局(FDA)已经批准了市场上多种免疫测定测试的紧急使用授权(EUA)，但这些测定都没有得到充分验证。由于缺乏有效的免疫测定(其是理解风险、流行病学因素、发病机理和死亡率的关键)，我们开发了重组刺突和ACE2分子设计，旨在作为SARS
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CoV
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2免疫测定中的试剂。
[0006]尽管有多种方法来中和病毒，但由于病毒进入对ACE2的依赖性，仍然需要提供可用于中和病毒并且还可用于检测阻断刺突蛋白与ACE2结合的中和试剂的组合物。
[0007]本专利技术的专利技术人开发了包含全长SARS
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2刺突蛋白(FLS)、或SARS
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2刺突蛋白的S1结构域或S2结构域、或SARS
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2刺突蛋白的人类血管紧张素转化酶2(ACE2)受体，以及其他结构元件或结构域的融合蛋白，所述融合蛋白可用于开发能够筛选抑制病毒刺突蛋白与人类ACE2结合的试剂的测定。尽管有多种方法来中和病毒，但由于病毒进入对ACE2的依赖性，这代表了一种可以检测阻断刺突蛋白与ACE2结合的中和试剂的测定。本专利技术的新型重组融合蛋白具有改进的亲和力、表达、溶解度、可制造性和测定灵敏度。
[0008]概述
[0009]在第一方面，本专利技术涉及一种融合蛋白，包含全长SARS
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CoV
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2刺突蛋白、或SARS
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CoV
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2刺突蛋白的S1结构域或S2结构域或其片段、或SARS
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CoV
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2刺突蛋白的人类血管紧张素转化酶2(ACE2)受体或其片段和N
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末端信号肽，以及多组氨酸标签、链霉亲和素结合结构域、接头或寡聚化标签中的至少一种。
[0010]在一种实施方案中，所述N
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末端信号肽选自刺突内源性信号肽、组织纤溶酶原激
活物(tPa)信号肽、人类白细胞介素2(hIL2)信号肽、鼠免疫球蛋白G(IgG)重链信号肽和血管紧张素转化酶2(ACE2)信号肽。
[0011]在一种实施方案中，所述N
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末端信号肽的氨基酸序列选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5。
[0012]在另一种实施方案中，所述接头的氨基酸序列是柔性接头或弯折接头(kinked linker)。在另一种实施方案中，所述接头具有选自SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:15的氨基酸序列。
[0013]在另一种实施方案中，所述多组氨酸标签由4个、6个、8个、10个或12个组氨酸残基组成。在另一种实施方案中，所述多组氨酸标签的氨基酸序列选自SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:18。
[0014]在另一种实施方案中，所述寡聚化标签选自T4纤维蛋白折叠子(fibritin foldon)结构域、短T4纤维蛋白折叠子结构域、网格蛋白三聚化结构域、人类胶原三聚化结构域、CGN4三聚化结构域、四联凝集素三聚化结构域、p53四聚化结构域和鼠或人类Fc结构域。在另一种实施方案中，所述寡聚化标签的氨基酸序列选自SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28或SEQ ID NO:36。
[0015]在另一种实施方案中，所述链霉亲和素结合结构域的氨基酸序列选自SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30或SEQ ID NO:31。
[0016]在本专利技术的融合蛋白的一些实施方案中，所述全长SARS
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CoV
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2刺突蛋白的氨基酸序列在SEQ ID NO:32中列出。
[0017]在本专利技术的融合蛋白的一些实施方案中，SARS
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CoV
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2刺突蛋白的所述S1结构域或其片段的氨基酸序列在SEQ ID NO:33中列出。
[0018]在本专利技术的融合蛋白的一些实施方案中，SARS
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CoV
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2刺突蛋白的所述S2结构域或其片本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种融合蛋白，包含全长SARS
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CoV
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2刺突蛋白、或SARS
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CoV
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2刺突蛋白的S1结构域或S2结构域或其片段、或SARS
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CoV
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2刺突蛋白的人类血管紧张素转化酶2(ACE2)受体或其片段和N
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末端信号肽，以及多组氨酸标签、链霉亲和素结合结构域、接头或寡聚化标签中的至少一种。2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中所述N
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末端信号肽选自刺突内源性信号肽、组织纤溶酶原激活物(tPa)信号肽、人类白细胞介素2(hIL2)信号肽、鼠免疫球蛋白G(IgG)重链信号肽和血管紧张素转化酶2(ACE2)信号肽。3.根据权利要求1或2所述的融合蛋白，其中所述N
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末端信号肽的氨基酸序列选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5。4.根据前述权利要求中任一项所述的融合蛋白，其中所述接头是柔性接头或弯折接头。5.根据权利要求4所述的融合蛋白，其中所述接头的氨基酸序列选自SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:15。6.根据前述权利要求中任一项所述的融合蛋白，其中所述多组氨酸标签由4个、6个、8个、10个或12个组氨酸残基组成。7.根据权利要求4所述的融合蛋白，其中所述多组氨酸标签的氨基酸序列选自SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:18。8.根据前述权利要求中任一项所述的融合蛋白，其中所述寡聚化标签选自T4纤维蛋白折叠子结构域、短T4纤维蛋白折叠子结构域、网格蛋白三聚化结构域、人类胶原三聚化结构域、CGN4三聚化结构域、四联凝集素三聚化结构域、p53四聚化结构域和鼠或人类Fc结构域。9.根据权利要求8所述的融合蛋白，其中所述寡聚化标签的氨基酸序列选自SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27或SEQ ID NO:28。10.根据前述权利要求中任一项所述的融合蛋白，其中所述链霉亲和素结合结构域的氨基酸序列选自SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30或SEQ ID NO:31。11.根据前述权利要求中任一项所述的融合蛋白，其中所述全长SARS
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2刺突蛋白的氨基酸序列在SEQ ID NO:32中列出。12.根据权利要求1至10中任一项所述的融合蛋白，其中所述SARS
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CoV
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2刺突蛋白的所述S1结构域或其片段的氨基酸序列在SEQ ID NO:33中列出。13.根据权利要求1至10中任一项所述的融合蛋白，其中所述SARS
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2刺突蛋白的所述S2结构域或其片段的氨基酸序列在SEQ ID NO:35中列出。14.根据权利要求1至10中任一项所述的融合蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：伊丽莎白，
申请(专利权)人：盖立复诊断解决方案公司，
类型：发明
国别省市：