用于储存生物样品的组合物和方法技术

本发明专利技术涉及用于储存生物样品以用于随后核酸测试的水性组合物，所述组合物包含第一组分，所述第一组分包含：

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于储存生物样品的组合物和方法
[0001]描述


[0002]本专利技术涉及用于储存生物样品用于随后核酸测试的水性组合物，所述水性组合物包含阴离子洗涤剂
、
螯合剂
、I
族金属氢氧化物和缓冲剂
。
本专利技术的组合物提供了
a)
收集样品，
b)
裂解病毒
、
细胞或组织以从细胞碎片和外来生物分子释放核酸，这导致
c)
样品中存在的病毒
、
细菌
、
真菌
、
寄生虫和其他微生物的灭活，
d)
保护核酸免受核酸酶活性的降解，以及
e)
保存核酸用于随后的分离
、
检测
、
扩增和
/
或分子分析
。
所述五种功能可以通过使用单一组合物和在单一反应容器中实现，并且所得样品可以在室温储存延长的时间段，而样品中包含的多核苷酸不会显著降解
。
[0003]背景
[0004]当前的
COVID
‑
19
大流行已经提出了对快速且安全的用于在大量个体中诊断病毒病原体的方案的迫切需求
。COVID
‑
19
是由
SARS
‑
CoV
‑
2(
一种正义单链
RNA
病毒
)
引起的
。
由病毒和其他病原体引起的这种疾病和其他常见疾病的诊断是基于对病原体核酸的分析
。
基于核酸的检测平台的开发，诸如实时
PCR、
转录介导的扩增
(TMA)、
连接酶链式反应
(LCR)、
微阵列
、
下一代测序
(NSG)
和病原体基因芯片的开发，极大地改变了临床分子诊断领域
。
然而，生物样品中的核酸在室温会快速降解和
/
或变性，并且在进行诊断分析时，保持所述核酸稳定的能力通常决定了核酸是否能够被成功分析
。
在用于下游分析的所需核酸包括核糖核酸
(RNA)
时，这甚至更重要，因为核糖核酸
(RNA)
特别易被降解，例如被内切核酸酶和外切核酸酶活性降解
。
[0005]在处理生物样本时的另一个重要问题是活的感染性病原体或生物病原体
(biological agents)
从样本到环境中的潜在的接种
、
释放或播散
。
如果样品保持存活和
/
或生物完整，以保持其完整性用于测试，则参与收集
、
转移和测试过程的个体可能会暴露于高度危险的接触传染
(contagions)。
因此，所要求的安全性措施通常增加将这样的样品从一个位置移动至另一个位置并且完成其分析所要求的费用和精力
。
[0006]因此，对于保持即使危险的生物样本的核酸的完整性，通常用于进一步的分子分析或诊断测试，而不会对工作者造成风险的安全的收集
、
运送和储存组合物存在需求
。
[0007]用于处理包含来自疑似来自病毒或细菌感染的个体的核酸的生物样品的当前方案包括使用收集介质，该收集介质允许收集样品并保存核酸，直到进行诊断或分子生物学测试
。
[0008]为了检测
SARS
‑
CoV
‑2和其他呼吸道病毒，生物样品的收集通常通过使用拭子来进行，然后将该拭子引入包含收集介质
(
通常称为病毒运送介质
(Viral Transport Medium
，
VTM))
的管中
。VTM
通常包含经缓冲的蛋白
(
血清
、
白蛋白或明胶
)
和抗生素，以抑制污染细菌和真菌的生长
。
例如，
CDC
推荐包含
Hanks
平衡盐溶液
(HBSS)、
胎牛血清
(FBS)、
庆大霉素和两性霉素
B
的用于
SARS
‑
CoV
‑2的病毒运送介质
(VTM)(Centers for Disease Control and Prevention SOP#:DSR
‑
052
‑
05)。
[0009]商业制备的
VTM
以螺旋盖塑料管可用
。
将鼻
、
鼻咽或口咽拭子直接引入包含
VTM
溶液的管中，直到进行分子测试
。
然后，对管进行涡旋，并且将样品转移至包含提取缓冲剂的第二管中
。
所述提取缓冲剂通常包含必要的试剂，以使病毒灭活，裂解细胞以从细胞碎片和其他生物分子释放核酸，并且保护核酸免于被内切核酸酶活性降解
。
所述转移必须在安全柜中进行，以避免病毒传播，这增加了分子测试之前的步骤并且减慢了样品的制备
。
因此，当前可用的用于收集和处理样品的方案已被证明不足以满足大流行情况的需求，也不足以满足必须快速收集和处理大体积样品的其他情况的需求
。
[0010]最重要的是，提取缓冲剂通常包含有害的离液剂
(
诸如充当大分子的变性剂的硫氰酸胍
)
，使病毒灭活
。
硫氰酸胍能够通过使
RNA
酶灭活来降低样品中
RNA
分子的降解，因此保持核酸的完整性，这是其中
RNA
完整性必不可少的分子诊断方法的应用的基本
。
然而，所述离液剂在与皮肤接触时是有害的，并且可以进一步与测试装置中通常使用的其他试剂
(
诸如次氯酸钠
)
相互作用，产生有毒气体
。
[0011]因此，在需要快速收集
、
保存和分析大量疑似包含病原体的样品时，在减少病原体传播风险的同时减少方案的步骤数量是非常重要的
。
[0012]本专利技术的专利技术人开发了一种新的组合物，该新的组合物令人惊讶地使样品中存在的任何病原体灭活，同时保存了核酸用于进一步的分子测试
。
此外，所述组合物可以直接用于收集样品，而不要求至第二组合物或缓冲剂的任何转移，因为组合物本身也能够裂解病毒和细胞，并且使内切核酸酶和外切核酸酶灭活以用于保存核酸
。
此外，所述组合物与基于核酸的检测平台相容，特别是与常用的灭菌剂诸如次氯酸钠相容，并且减少与样品操作相关的健康风险
。
[0013]本专利技术还涵盖采用所述组合物的方法，所述组合物可以有利地改进用于本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
一种水性组合物，所述水性组合物用于储存生物样品以用于随后核酸测试，所述组合物包含第一组分，包含：
i)
以约1％至
20
％
(w/v)
的量的阴离子洗涤剂
、ii)
以约1％至5％
(w/v)
的量的
I
族金属氢氧化物
、iii)
以约
0.5
％至5％
(w/v)
的量的螯合剂和
iv)
第一缓冲剂，其中所述组合物还包含选自由以下组成的组的稀释组分：水
、
第二缓冲剂
、
运送介质
、
氯化钠
(
水溶液
)
及其组合，其中所述第一组分用所述稀释组分稀释多达最多约
50
％
(v/v)。2.
根据权利要求1所述的水性组合物，其中所述组分是氯化钠
(
水溶液
)。3.
根据权利要求1或2中任一项所述的水性组合物，其中所述阴离子洗涤剂包括
C5
‑
C20
烷基硫酸根离子
、C5
‑
C20
烯基硫酸根离子
、C5
‑
C20
炔基硫酸根离子或其任何组合
。4.
根据权利要求3所述的水性组合物，其中所述洗涤剂包括月桂基硫酸根离子
。5.
根据权利要求1至4中任一项所述的水性组合物，其中所述第一缓冲剂选自
Tris、MES、Bis
‑
Tris、HEPES、MOPS、
柠檬酸盐
、
碳酸氢钠
、
磷酸钠及其组合
。6.
根据权利要求5所述的水性组合物，其中所述第一缓冲剂包括
HEPES。7.
根据权利要求1至6中任一项所述的水性组合物，其中所述第一缓冲剂以约5％至
30
％
(w/v)
的量存在
。8.
根据权利要求1至6中任一项所述的水性组合物，其中所述第一缓冲剂以足以将
pH
维持在5与
10
之间的量存在
。9.
根据权利要求1至8中任一项所述的水性组合物，其中所述
I
族金属氢氧化物选自氢氧化锂
、
氢氧化钠
、
氢氧化钾及其组合
。10.
根据权利要求9所述的水性组合物，其中所述
I
族金属氢氧化物包括氢氧化锂
。11.
根据权利要求1至
10
中任一项所述的水性组合物，其中所述螯合剂选自
EGTA、HEDTA、DTPA、NTA、EDTA、
琥珀酸
、
无水柠檬酸盐
、
柠檬酸钠
、
柠檬酸钙
、
柠檬酸铵
、
柠檬酸氢铵
、
柠檬酸
、
柠檬酸二铵
、
柠檬酸钾
、
柠檬酸镁
、
柠檬酸铁铵
、
柠檬酸锂及其组合
。12.
根据权利要求
11
所述的水性组合物，其中所述螯合剂选自琥珀酸
、EGTA、EDTA
及其组合
。13.
根据权利要求1至
12
中任一项所述的水性组合物，其中所述第一缓冲剂以约
10
％至
25
％
(w/v)
的量存在，所述阴离子洗涤剂以约2％至
15
％
(w/v)
的量存在，所述螯合剂以约1％至4％
(w/v)
的量存在，并且所述
I
族金属氢氧化物以约1％至4％
(w/v)
的量存在
。14.
根据权利要求1至
13
中任一项所述的水性组合物，其中所述水性组合物的
pH
在5与
10
之间
。15.
根据权利要求
14
所述的水性组合物，其中所述水性组合物的
pH
在6与9之间
。16.
根据权利要求1至
15
中任一项所述的水性组合物，还包含以约
50
μ
l/L
至
750
μ
l/L
的量的消泡剂
。17.
根据权利要求
16
所述的水性组合物，其中所述消泡剂包括硅酮聚合物
、
聚山梨醇酯
、
有机聚醚分散体或其任何组合
。
18.
根据权利要求1至
17
中任一项所述的水性组合物，还包含多核苷酸群体，所述多核苷酸群体包括
RNA、DNA
或其任何组合
。19.
根据权利要求
18
所述的水性组合物，其中所述
RNA
包括体外合成的转录物
。20.
一种水性组合物，所述水性组合物用于储存生物样品以用于随后核酸测试，所述组合物包含：
i)
以约1％至
20
％
(w/v)
的量的阴离子洗涤剂
、ii)
以约1％至5％
(w/v)
的量的
I
族金属氢氧化物
、iii)
以约
0.5
％至5％
(w/v)
的量的螯合剂和
iv)
第一缓冲剂，其中所述组合物包含以约
50
μ
l/L
至
750
μ
l/L
的量的消泡剂
。21.
根据权利要求
20
所述的水性组合物，其中所述消泡剂包括硅酮聚合物
、
聚山梨醇酯
、
有机聚醚分散体或其任何组合
。22.
根据权利要求
20
或
21
中任一项所述的水性组合物，其中所述阴离子洗涤剂包括
C5
‑
C20
烷基硫酸根离子
、C5
‑
C20
烯基硫酸根离子
、C5
‑
C20
炔基硫酸根离子或其任何组合
。23.
根据权利要求
22
所述的水性组合物，其中所述洗涤剂包括月桂基硫酸根离子
。24.
根据权利要求
20
至
23
中任一项所述的水性组合物，其中所述第一缓冲剂选自
Tris、MES、Bis
‑
Tris、HEPES、MOPS、
柠檬酸盐
、
碳酸氢钠
、
磷酸钠及其组合
。25.
根据权利要求
24
所述的水性组合物，其中所述第一缓冲剂包括
HEPES。26.
根据权利要求
20
至
25
中任一项所述的水性组合物，其中所述第一缓冲剂以约5％至
30
％
(w/v)
的量存在
。27.
根据权利要求
20
至
25
中任一项所述的水性组合物，其中所述第一缓冲剂以足以将
pH
维持在5与
10
之间的量存在
。28.
根据权利要求
20
至
27
中任一项所述的水性组合物，其中所述
I
族金属氢氧化物选自氢氧化锂
、
氢氧化钠
、
氢氧化钾及其组合
。29.
根据权利要求
28
所述的水性组合物，其中所述
I
族金属氢氧化物包括氢氧化锂
。30.
根据权利要求
20
至
29
中任一项所述的水性组合物，其中所述螯合剂选自
EGTA、HEDTA、DTPA、NTA、EDTA、
琥珀酸
、
无水柠檬酸盐
、
柠檬酸钠
、
柠檬酸钙
、
柠檬酸铵
、
柠檬酸氢铵
、
柠檬酸
、
柠檬酸二铵
、
柠檬酸钾
、
柠檬酸镁
、
柠檬酸铁铵
、
柠檬酸锂及其组合
。31.
根据权利要求
30
所述的水性组合物，其中所述螯合剂选自琥珀酸
、EGTA、EDTA
及其组合
。32.
根据权利要求
20
至
31
中任一项所述的水性组合物，其中所述第一缓冲剂以约
10
％至
25
％
(w/v)
的量存在，所述阴离子洗涤剂以约2％至
15
％
(w/v)
的量存在，所述螯合剂以约1％至4％
(w/v)
的量存在，并且所述
I
族金属氢氧化物以约1％至4％
(w/v)
的量存在
。33.
根据权利要求
20
至
32
中任一项所述的水性组合物，其中所述水性组合物的
pH
在5与
10
之间
。34.
根据权利要求
33
所述的水性组合物，其中所述水性组合物的
pH
在6与9之间
。35.
根据权利要求
20
至
34
中任一项所述的水性组合物，其中所述组合物用选自由以下组成的组的组分稀释多达最多约
50
％
(v/v)
：水
、
第二缓冲剂
、
转运介质
、
氯化钠
(
水溶液
)
...

【专利技术属性】
技术研发人员：杰弗里，
申请(专利权)人：盖立复诊断解决方案公司，
类型：发明
国别省市：