一种快速检测小鼠基因型的方法与试剂盒技术

本发明专利技术属于生物医学领域，具体涉及一种快速检测小鼠基因型的方法与试剂盒

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测小鼠基因型的方法与试剂盒


[0001]本专利技术属于生物医学领域，具体涉及一种快速检测小鼠基因型的方法与试剂盒
。

技术介绍

[0002]携带外源基因的小鼠
(
亦称转基因小鼠
)
是人类疾病研究的重要工具，在医学和生命科学研究领域的应用越来越广泛
。
在应用转基因小鼠开展科学研究前，通常需要对小鼠的基因型进行鉴定，区分转基因小鼠以及野生型小鼠
。
小鼠基因鉴定，涉及小鼠
DNA
的获取
、
目标
DNA
片段扩增
、DNA
电泳
。
[0003]目前传统的
DNA
提取方法包括酚
/
氯仿提取法和高盐提取法
。
这些方法虽然能够获取较高纯度和较高得率的组织
DNA
，但都有一些不足之处：一是操作步骤比较繁琐，例如多次涉及离心；二是涉及过多的试剂，例如均采用了氯仿
、
乙醇
、
蛋白酶
K
等试剂；三是时间偏长，部分实验步骤包含过夜流程
。
即便是近年来的相关文献公开的方法和现有试剂盒
(
例如
Vazyme、Promega
和
Takara
公司试剂盒等
)
提供的方法，其
DNA
提取部分所花时间也在
30min
到数小时之间，而且含有耗材
(
如收集柱等
)
和多种试剂
(
如裂解液
、
中和液
、
蛋白酶
K
等
)。
上述问题都在一定程度上增加了实验成本
(
包括试剂成本
、
耗材成本和人力成本
)
，从而制约了转基因小鼠基因分型的工作效率
。

技术实现思路

[0004]为解决上述问题，本专利技术提供了一种快速检测小鼠基因型的方法，包括以下步骤：
[0005](1)
配制裂解液：将
DMSO
与
Tween 20
混合均匀制成裂解液；
[0006](2)
取样：将裂解液加入螺口反应管中，用咽拭子取小鼠唾液样本，放入螺口反应管中，剪去多余部分，旋紧反应管盖；
[0007](3)
样品处理：将反应管沸水水浴，离心后去上清液；
[0008](4)
检测：将去上清后的样本进行
PCR
反应，将反应产物进行琼脂糖凝胶电泳获得鉴定结果
。
[0009]进一步的，步骤
(1)
中所述
DMSO
浓度为1％，所述
Tween20
浓度为
0.5
％
。
[0010]步骤
(1)
中所述裂解液中
DMSO
浓度为1％，
Tween20
浓度为
0.5
％
。
[0011]进一步的，所述步骤
(2)
中螺口反应管中加入裂解液的量为
100
μ
L。
[0012]进一步的，所述步骤
(2)
中先将咽拭子在裂解液中浸润，再取小鼠唾液；取唾液样本时需在小鼠口腔中剐蹭3～
5s。
[0013]进一步的，所述步骤
(3)
中沸水水浴时间为
10
～
20
分钟，离心为
10000
～
14000rpm
，离心时间为3～7分钟
。
[0014]本专利技术还提供了一种快速检测小鼠基因型的试剂盒，所述试剂盒包括
DMSO、Tween20、
咽拭子和螺口反应管
。
[0015]本专利技术具有以下有益效果：
[0016]与剪鼠尾相比，不会造成小鼠流血，减少对小鼠的伤害与应急
。
[0017]本专利技术只需要沸水浴
、
离心等简单步骤，消耗时间远远少于鼠尾法
。
[0018]本专利技术所涉及的试剂仅有少量的
Tween
‑
20
及
DMSO
，不需要氢氧化钠
、
异丙醇等化学物质，对环境的负担小
。
[0019]本专利技术所用到的试剂及耗材简单易得，大大降低检测成本
。
附图说明
[0020]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图
。
[0021]图1样本处理步骤；
[0022]图2不同裂解液对鉴定结果的影响；
[0023]图3不同加样量对基因型鉴定结果的影响；
[0024]图4使用野生型小鼠再次确认本方法；
[0025]图5传统方法不同基因型电泳图；
[0026]图6传统方法与本方法鉴定结果比较
。
具体实施方式
[0027]现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，实施例中方法如无特殊说明均采用常规方法，使用试剂如无特殊说明，均为常规市售试剂或采用常规方法配置的试剂
。
该详细说明不应认为是对本专利技术的限制，而应理解为是对本专利技术的某些方面
、
特性和实施方案的更详细的描述
。
[0028]应理解本专利技术中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本专利技术
。
另外，对于本专利技术中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值
。
在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本专利技术内
。
这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内
。
[0029]除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本专利技术所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义
。
虽然本专利技术仅描述了优选的方法和材料，但是在本专利技术的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料
。
本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和
/
或材料
。
在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准
。
[0030]在不背离本专利技术的范围或精神的情况下，可对本专利技术说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的
。
由本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种快速检测小鼠基因型的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)
配制裂解液：将
DMSO、Tween 20
加入水中混合均匀制成裂解液；
(2)
取样：将裂解液加入螺口反应管中，用咽拭子取小鼠唾液样本，放入螺口反应管中，剪去多余部分，旋紧反应管盖；
(3)
样品处理：将反应管沸水水浴，离心后去上清液；
(4)
检测：将去上清后的样本进行
PCR
反应，将反应产物进行琼脂糖凝胶电泳获得鉴定结果
。2.
根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤
(1)
中所述裂解液中
DMSO
浓度为1％，
Tween20
浓度为
0.5
％
。3.
...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁少杰，谢黎炜，朱达坚，毛达彬，王坤，李君阳，
申请(专利权)人：广东医科大学顺德妇女儿童医院佛山市顺德区妇幼保健院，
类型：发明
国别省市：