编码包含人IgG1的经修饰的Fc区和至少一种异源抗原的多肽的核酸制造技术

本发明专利技术涉及核酸和由那些核酸编码的多肽。特别地，所述肽包含经修饰的IgG1Fc区和一个或多个异源表位，其可以是B

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】编码包含人IgG1的经修饰的Fc区和至少一种异源抗原的多肽的核酸
[0001]本专利技术涉及核酸和由那些核酸编码的肽。特别地，所述肽包含经修饰的IgG1 Fc区和一个或多个异源表位，其可为B
‑
细胞表位或T
‑
细胞表位。本专利技术的核酸和肽可用作刺激高亲合力CD8 T细胞、Th1 CD4 T
‑
细胞和强烈抗体应答的疫苗。对于癌症疫苗，至关重要的是刺激包括CD4和CD8 T细胞应答在内的强效细胞免疫。对于传染性疾病疫苗，重要的是刺激细胞免疫和中和抗体。
[0002]免疫系统是可用于对抗有害病原体和恶性肿瘤的强大防御机制。特别是适应性免疫系统可通过疫苗接种来训练以靶向恶性疾病所特有的改变、突变或过表达的自体抗原和入侵的外来病原体(如，病毒)。
[0003]免疫系统可以识别并消除癌细胞的概念被称为免疫监视[1,2]。癌症和自身之间的免疫学差异可被天然检测到，并导致许多个体中癌细胞的消除。该理论表明，免疫系统天然能够检测并消除癌细胞。在免疫活性小鼠中的研究显示，肿瘤的排斥和所获得的保护可通过转移T细胞过继转移至小鼠[3]。小鼠敲除模型显示，干扰素γ(IFNγ)和淋巴细胞对降低致癌物诱导的肉瘤和自发性上皮癌的发病率很重要[4]。患有自发性消退性黑色素瘤的患者显示肿瘤特异性克隆T细胞扩增的迹象，提供了免疫监视的证据[5]。最近的工作表明，在转化过程中由肿瘤引起的突变可产生能够被T细胞有效靶向的新抗原[6]。这项工作都强调了这样的事实：免疫系统能够区分肿瘤和自身，但是在许多免疫健康的个体中仍然发生癌症。这是由于肿瘤的高突变频率，其可导致免疫平衡，在这种免疫平衡的情况下，肿瘤避免原始免疫应答，但免疫应答可适应且仍攻击肿瘤。最终，尽管免疫应答，肿瘤仍在被称为“免疫编辑”的过程中逃逸并生长[7]。
[0004]免疫疗法寻求将免疫细胞募集到肿瘤微环境中并增强抗肿瘤免疫。有两个主要原因可以阻止这种情况的发生。首先，肿瘤没有提供正确的环境条件来引发(prime)有效的免疫应答。在缺乏由诸如Toll样受体(TLR)或损伤相关分子模式分子(DAMPS)的信号诱导的共刺激来刺激危险或充分呈递肿瘤特异性表位来引发应答的情况下，不产生能够进行肿瘤裂解的高亲合力T细胞[8,9]。刺激不能杀死肿瘤细胞的低亲合力T细胞被认为是许多早期肿瘤疫苗失败的原因。解决T细胞引发缺乏并诱导肿瘤特异性免疫应答的策略包括疫苗。有效的抗癌免疫疗法依赖于可被高亲合力T细胞识别的抗原的有效靶向。在肿瘤上表达的许多抗原也在正常组织上表达，并且识别它们的T细胞经历胸腺耐受。这留下了众多的低亲合力T细胞，这些T细胞可被高剂量的免疫原刺激，但从未观察到足够地靶向肿瘤细胞来杀死它们。目标是发现非胸腺表达且在肿瘤细胞上以高丰度存在而在健康组织中不存在的抗原。
[0005]病毒可被大体分类为“无包膜的”或“有包膜的”。在功能上，病毒包膜能够使病毒进入其宿主。包膜表面上的病毒糖蛋白识别并结合宿主细胞膜上的受体位点。这导致病毒包膜与宿主的膜融合，进入并释放病毒基因组，以及感染宿主。在病毒感染早期，产生CD4和CD8 T细胞应答来定位并杀死病毒感染的细胞，从而阻止病毒的进一步复制。随后的感染中，产生病毒中和抗体(VNab)来帮助防止再感染。记忆T细胞应答和VNab的组合在预防对相同或相关病毒的新感染中都是重要的。同样的现象也适用于其他病原体感染。疫苗需要在
暴露于病毒/病原体之前刺激免疫应答，并且将疫苗设计为使宿主能够快速应答且有效地去除低病毒载量并防止与病毒相关的任何发病。因此，疫苗需要刺激识别低抗原载量的高亲合力T细胞和防止病毒进入细胞的中和抗体。T细胞可识别病毒蛋白，因为它们都会在受感染细胞的细胞表面的环境MHC中呈递。然而，中和抗体需要与病毒蛋白结合，这些病毒蛋白接触宿主细胞上的受体并允许它们进入细胞。最有效的病毒疫苗是刺激强效T细胞和抗体应答但与低发病率相关的减毒病毒。已经有几种获得许可的减毒病毒疫苗，包括天花、麻疹和脊髓灰质炎。然而，许多病毒已进化为逃避免疫识别，因而不适合作为减毒病毒疫苗。这可通过使用灭活的病毒来克服，病毒的灭活使用化学物质如甲醛或热灭活来实现。这类疫苗可刺激抗体应答，但是需要大量的病毒/病原体，并且在刺激高亲合力T细胞应答方面很差。类似的方法是使用病毒样颗粒，其组装且看起来像病毒，但不能复制。同样，这些疫苗诱导强烈抗体应答，并且已获得预防HPV感染的许可。减毒病毒的替代物是使用杂合病毒。对诸如麻疹或腺病毒的病毒进行遗传修饰以由异源病毒产生蛋白质。使这些病毒弱化或丧失能力，使得它们不能致病；它们仍可在细胞内复制，或它们已缺失了基因使得它们不能复制。病毒载体往往具有良好的安全性，埃博拉病毒疫苗最近获得批准。然而，存在对病毒载体(麻疹，腺病毒)的任何预先存在的免疫力可能影响它们的有效性并限制加强减弱的免疫应答的能力。它们也可仅用于单一病毒，因为一旦建立了对载体病毒的免疫应答，它们就不能用作新病毒的载体。病毒疫苗的优势在于它们可产生高水平的蛋白表达，诱导强烈抗体应答。这也可使用蛋白疫苗来实现。然而，蛋白疫苗还需要佐剂以模拟强效免疫应答；此外，经常需要多剂量。蛋白和异源病毒疫苗都产生高水平的抗原，但是这刺激低亲合力T细胞应答，这样仅杀死具有高病毒载量的细胞，这很危险，因为这些细胞可能在低亲合力T细胞有时间反应之前就被病毒裂解，并且使大量病毒涌入宿主中。
[0006]US7067110B1公开了Fc
‑
抗原融合蛋白的应用，其中将完整抗原或抗原结构域与抗体的铰链
‑
CH2
‑
CH3结构域融合，可增强抗体和细胞免疫。WO2002/058728公开了利用与抗原融合的人IgG1 Fc多肽靶向FcγRI可刺激高亲合力T
‑
细胞应答。WO2008/116937公开了包含非特异性启动子和至少一个编码免疫球蛋白分子的重组重链的序列的核酸，其中重链具有至少一个异源T细胞表位，使得核酸表达时重链不能呈现其天然构象。破坏一抗结构，抑制折叠和/或将分泌仅限于重链或非常少量的完整抗体，刺激强烈的辅助和抗原特异性T细胞应答。
[0007]第一方面，本专利技术提供了一种编码多肽的核酸，所述多肽包含：
[0008](i)人IgG1的经修饰的Fc区，和
[0009](ii)至少一种异源抗原，
[0010]其中与相应的野生型Fc区相比，(a)所述经修饰的Fc区至少包含能够结合CD64的Fc部分，(b)所述经修饰的Fc区的至少一个残基被修饰为来自小鼠IgG3抗体的相应残基，并且(c)所述经修饰的Fc区具有增强的对Fc
‑
γ受体(FcγR)的亲合力。
[0011]第二方面，本专利技术提供了一种编码多肽的核酸，所述多肽包含：
[0012](i)人IgG1的经修饰的Fc区，和
[0013](ii)至少一种异源抗原，
[0014]其中与相应的野生型Fc区相比，(a)所述经修饰的Fc区至少包含能够结合TRIM21的Fc部分，(b)所述Fc区的至少一个残本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种编码多肽的核酸，所述多肽包含：(i)人IgG1的经修饰的Fc区，和(ii)至少一种异源抗原，其中与相应的野生型Fc区相比，(a)所述经修饰的Fc区至少包含能够结合CD64的Fc部分，(b)所述Fc区的至少一个残基被修饰为来自小鼠IgG3抗体的相应残基，并且(c)所述经修饰的Fc区具有增强的对Fc
‑
γ受体(FcγR)的亲合力。2.一种编码多肽的核酸，所述多肽包含：(i)人IgG1的经修饰的Fc区，和(ii)至少一种异源抗原，其中与相应的野生型Fc区相比，(a)所述经修饰的Fc区至少包含能够结合TRIM21的Fc部分，(b)所述Fc区的至少一个残基被修饰为来自小鼠IgG3抗体的相应残基，并且(c)所述经修饰的Fc区具有增强的对Fc
‑
γ受体(FcγR)的亲合力。3.一种编码多肽的核酸，所述多肽包含：(i)人IgG1的经修饰的Fc区，和(ii)至少一种异源抗原，其中与相应的野生型Fc区相比，(a)所述经修饰的Fc区至少包含能够结合CD64和/或TRIM21的Fc部分，(b)所述Fc区的至少一个残基被修饰为来自小鼠IgG3抗体的相应残基，并且(c)所述经修饰的Fc区具有增强的对Fc
‑
γ受体(FcγR)的亲合力。4.如权利要求1至3中任一项所述的核酸，其中与相应的野生型人IgG1 Fc区相比，对Fc
‑
γ受体(FcγR)的亲合力增强至少约10％。5.如权利要求1至4中任一项所述的核酸，其中所述Fc区的至少一个残基选自：N286、K288、K290、A339、Q342、P343、R344、E345、L351、S354、D356、E357、L358、T359、N361、Q362、K370、G371、Y373、P374、S375、D376、A378，任选地，其中所述至少一个经修饰的残基选自：N286T、K288W、K290Q、A339P、Q342R、P343A、R344Q、E345T、L351I、S354P、D356E、E357Q、L358M、T359S、N361K、Q362K、K370T、G371N、Y373F、P374S、S375E、D376A、A378S。6.如权利要求5所述的核酸，其中所述人IgG3 Fc区包含以下修饰中的全部：N286T、K288W、K290Q、A339P、Q342R、P343A、R344Q、E345T、L351I、S354P、D356E、E357Q、L358M、T359S、N361K、Q362K、K370T、G371N、Y373F、P374S、S375E、D376A、A378S。7.如权利要求6所述的核酸，其中所述经修饰的Fc区包含SEQ ID NO:1提供的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:1具有至少90％同一性的氨基酸序列。8.如前述权利要求中任一项所述的核酸，其中所述至少一种异源抗原与人IgG1的经修饰的Fc区的N端直接连接或通过接头连接。9.如权利要求1至7中任一项所述的核酸，其中所述多肽还包含抗体可变区，所述至少一种异源抗原插入或替换到所述抗体可变区中，任选地，其中所述至少一种异源抗原替换到抗体可变区的CDR中。10.如前述权利要求中任一项所述的核酸，其中所述至少一种异源抗原包含T细胞表位和/或B细胞表位。11.如前述权利要求中任一项所述的核酸，其中所述至少一种异源抗原来自癌症或传染性疾病。
12.如前述权利要求中任一项所述的核酸，其中所述至少一种异源抗原包含选自图28至图33中任一个列出的表位中的一个或多个表位。13.如前述权利要求中任一项所述的核酸，其中所述至少一种异源抗原包含选自表2或表3列出的表位中的一个或多个表位。14.如前述权利要求中任一项所述的核酸，其中所述至少一种异源抗原包含选自以下的一个或多个表位：(a)GTGRAMLGTHTMEVTVYH(SEQ ID NO:29)；(b)SVYDFFVWL(SEQ ID NO:30)；和(c)WNRQLYPEWTEAQRLD(SEQ ID NO:31)。15.如前述权利要求中任一项所述的核酸，其中所述至少一种异源抗原包含选自以下的一个或多个表位：(a)GTGRAMLGTHTMEVTVYH(SEQ ID NO:29)；(b)SVYDFFVWL(SEQ ID NO:30)；(c)WNRQLYPEWTEAQRLD(SEQ ID NO:31)；和(d)VPLDCVLYRYGSFSVTLDIVQG(SEQ ID NO:32)。16.如前述权利要求中任一项所述的核酸，其中所述至少一种异源抗原包含选自以下的一个或多个表位：(a)GTGRAMLGTHTMEVTVYH(SEQ ID NO:29)；(b)SVYDFFVWL(SEQ ID NO:30)；(c)WNRQLYPEWTEAQRLD(SEQ ID NO:31)；(d)VPLDCVLYRYGSFSVTLDIVQG(SEQ ID NO:32)；(e)ANCSVYDFFVWLHYYSVRDTLLGPGRPYR(SEQ ID NO:33)；和(f)QCTEVRADTRPWSGPYILRNQDDRELWPRKFF(SEQ ID NO:34)。17.如前述权利要求中任一项所述的核酸，其中所述至少一种异源抗原包含选自以下的一个或多个表位：(a)LLMWITQCF(SEQ ID NO:35)；(b)SLLMWITQC(SEQ ID NO:36)；(c)PESRLLEFYLAMPFATPMEAELARRSLAQ(SEQ ID NO:37)；和(d)PGVLLKEFTVSGNILTIRLTAADHR(SEQ ID NO:38)。18.如前述权利要求中任一项所述的核酸，其中所述至少一种异源抗原包含选自以下的一个或多个表位：(a)LLMWITQCF(SEQ ID NO:35)；(b)SLLMWITQC(SEQ ID NO:36)；(c)PESRLLEFYLAMPFATPMEAELARRSLAQ(SEQ ID NO:37)；(d)PESRLLEFY(SEQ ID NO:39)；(e)RLLEFYLAMPFATP(SEQ ID NO:40)；(f)LEFYLAMPF(SEQ ID NO:41)；(g)EFYLAMPFATPM(SEQ ID NO:42)；(h)MPFATPMEA(SEQ ID NO:43)；
(i)LAMPFATPM(SEQ ID NO:44)；(j)LLEFYLAMPFATPM(SEQ ID NO:45)；(k)LLEFYLAMPFATPMEAELARRSLAQ(SEQ ID NO:46)；(l)PGVLLKEFTVSGNILTIRLTAADHR(SEQ ID NO:38)；(m)LKEFTVSGNILTIRL(SEQ ID NO:47)；(n)KEFTVSGNILT(SEQ ID NO:48)；(o)KEFTVSGNILTI(SEQ ID NO:49)；(p)TVSGNILTIR(SEQ ID NO:50)；和(q)TVSGNILTI(SEQ ID NO:51)。19.如前述权利要求中任一项所述的核酸，其中所述至少一种异源抗原包含选自以下的一个或多个表位：(a)KIADYNYKL(SEQ ID NO:52)；(b)KLPDDFTGCV(SEQ ID NO:53)；(c)ELLHAPATV(SEQ ID NO:54)；(d)CPFGEVFNATRFASVTAWNR(SEQ ID NO:55)；(e)RIS...

【专利技术属性】
技术研发人员：琳达，
申请(专利权)人：斯坎塞尔有限公司，
类型：发明
国别省市：