一种新冠病毒和流感病毒的联合疫苗、其制备方法与应用技术

本发明专利技术涉及一种新冠病毒和流感病毒的联合疫苗、其制备方法与应用，所述联合疫苗包括：I、包括来自SARS

【技术实现步骤摘要】
一种新冠病毒和流感病毒的联合疫苗、其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及预防新型冠状病毒和流感病毒的新冠和流感的联合疫苗、其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]无论是下呼吸道感染还是上呼吸道感染，绝大部分是由病毒引起的，称病毒性呼吸道感染，常见的病毒包括新型冠状病毒(SARS
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2)和流感病毒。
[0003]新型冠状病毒(SARS
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2，或者简称为新冠病毒)是一种单股正链的RNA病毒，基因组约为30KB，由内部的遗传物质RNA以及刺突蛋白(Spike Protein，S蛋白)、包膜蛋白(Envelop Protein，E蛋白)、膜蛋白(Membrane Protein，M蛋白)和核衣壳蛋白(Nucleoprotein，N蛋白)等构成。其中刺突蛋白(S蛋白)是形成病毒“冠状”形态的主要蛋白之一，介导SARS
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2进入细胞，其在病毒粒子表面形成较大的皇冠状突起，高度糖基化，是病毒感染宿主细胞的武器。冠状病毒宿主特异性的重要决定因素就是位于囊膜表面的三聚体刺突糖蛋白。S蛋白可分为N端的S1亚单位和靠近病毒膜的C端S2区，跨膜区和一段小的胞内区。SARS
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2的受体结合区(Receptor binding domain，RBD)位于S1的C端，约有240个氨基酸残基，可以与哺乳动物细胞上的受体ACE2(血管紧张素转换酶2，Angiotensin converting enzyme 2)结合，并介导SARS
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2病毒进入细胞，病毒进入细胞后，不断增殖的SARS
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2病毒颗粒通过胞吐作用进入细胞外液中，进而感染其他宿主细胞。
[0004]流感病毒(Influenza virus)是流行性感冒病毒的简称。属于正黏液病毒科，为单链RNA膜病毒，其RNA含有八个片断。流感病毒的基因结构使其有不断交换基因片断进而形成优势变异的条件。根据核蛋白和膜表面蛋白抗原，它分为甲(A)、乙(B)、丙(C)和丁(D)型，流感病毒的外层有两种不同糖蛋白构成辐射状突起，即血凝素(H)和神经氨酸酶(N)。流感病毒的抗原变异就是指H和N抗原结构的改变。其中人类主要以甲型和乙型感染为主，甲型流感病毒最容易发生变异，流感大流行就是甲型流感病毒出现新亚型或旧亚型重现引起的。甲型流感病毒根据H和N抗原不同，又分为许多亚型，H可分为18个亚型(H1～H18)，N有11个亚型(N1～N11)。常见的乙型流感病毒包括BY和BV。
[0005]根据现有的数据，新型冠状病毒和流感病毒的流行时间窗口有很大程度的重合。因而开发同时针对新型冠状病毒和流感病毒的联合疫苗将会在免疫接种方案和成本上提供极大的方便和优势。
[0006]然而，无论是SARS
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2和流感病毒，都是一种RNA病毒，容易在复制过程中出错，大量复制可引起多种变异，并且变异速度极快，因此经常会因为突变而出现免疫逃逸的现象，导致疫苗的保护性下降。随着新冠病毒和流感病毒的不断进化，现有疫苗的保护效果受到不同程度的影响。因此，研究和开发更为有效的、针对各种突变毒株的通用型疫苗对于预防新型冠状病毒和流感病毒感染具有重要的意义和广泛的临床应用前景。

技术实现思路

[0007]为解决上述技术问题，本专利技术提供一种具有预防新型冠状病毒(SARS
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2，或者简称为新冠病毒)、和流感病毒感染，更为有效的、针对各种突变毒株的通用型疫苗，具体的，
[0008]本专利技术第一方面，提供一种联合疫苗，所述联合疫苗包括：I、包括来自SARS
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2的融合蛋白的新冠疫苗原液；和，II、包括来自流感病毒的血凝素的流感疫苗原液，其中，
[0009]I、所述来自SARS
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2的融合蛋白包括SARS
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2的刺突蛋白(S蛋白)RBD的突变蛋白，所述突变蛋白包括相对于野生型S蛋白RBD的突变，所述突变包括第28、99、126、128、134、142、166和/或168位中一个或者多个位点的突变；
[0010]II、所述血凝素来自至少一种流感病毒亚型。
[0011]进一步的，所述组分I、II在下文进行更为详细的说明。
[0012]I、包括来自SARS
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2的融合蛋白的新冠疫苗原液：
[0013]优选的，所述突变蛋白的突变包括取代、缺失和/或添加。
[0014]优选的，所述突变包括取代，更优选的，所述突变位点包括28、99、126、128、134、142、166和/或168位；
[0015]进一步优选的，所述突变蛋白包括选自下列残基取代的突变：R28T、K99N、K126T、G128S、L134R、N142K、E166A和/或F168V。
[0016]优选的，所述野生型S蛋白RBD参考序列如SEQ ID No.13所示，可以理解的是，不同亚型或者不同株病毒的野生型S蛋白RBD氨基酸不一定相同，可能会有替换、插入或者删除的突变，上述参考序列如SEQ ID No.13所示，但也可以是其它结构不同的野生型序列，其突变位点对应于SEQ ID No.13的上述位点，所述对应理解为基于氨基酸结构和/或功能分析后的对应关系。
[0017]更优选的，所述S蛋白RBD的突变蛋白包括下述任一种：
[0018]A1)氨基酸序列是SEQ ID No.1的蛋白质；
[0019]A2)将SEQ ID No.1所示的氨基酸序列经过氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与A1)所示的蛋白质具有80％以上的同一性且具有相同功能的蛋白质，进一步优选的，所述氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加发生在第28、99、126、128、134、142、166和168位之外。
[0020]所述突变蛋白命名可为RBD8M蛋白。
[0021]本文所述取代可为保守性取代(也称为保守性替换)或非核心功能区的非保守性取代。本领域技术人员所公知，保守性取代或是在非核心功能区进行非保守取代，对蛋白质的功能通常不会产生质的影响。本文所述取代不包括本专利技术所述8个突变位点上的氨基酸残基的取代。
[0022]优选的，所述融合蛋白包括突变蛋白的N端和/或C端连接标签或信号肽。
[0023]本文所述连接标签包括但不限于：GST(谷胱甘肽巯基转移酶)标签蛋白、His标签蛋白(His
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tag)、MBP(麦芽糖结合蛋白)标签蛋白、Flag标签蛋白、GST标签蛋白、SUMO标签蛋白、HA标签蛋白、Myc标签蛋白、eG本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种联合疫苗，其特征在于，所述联合疫苗包括：I、包括来自SARS
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2的融合蛋白的新冠疫苗原液；和，II、包括来自流感病毒的血凝素的流感疫苗原液，其中，I、所述来自SARS
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2的融合蛋白包括SARS
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2的刺突蛋白(S蛋白)RBD的突变蛋白，所述突变蛋白包括相对于野生型S蛋白RBD的突变，所述突变包括第28、99、126、128、134、142、166和/或168位中一个或者多个位点的突变；II、所述血凝素来自至少一种流感病毒亚型。2.根据权利要求1所述的联合疫苗，其特征在于，在I、所述来自SARS
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2的融合蛋白中，所述突变蛋白的突变包括取代、缺失和/或添加，优选的，所述S蛋白RBD的突变蛋白包括选自下列残基取代的突变：R28T、K99N、K126T、G128S、L134R、N142K、E166A和/或F168V，更优选的，所述S蛋白RBD的突变蛋白包括下述任一种：A1)氨基酸序列是SEQ ID No.1的蛋白质；A2)将SEQ ID No.1所示的氨基酸序列经过氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与A1)所示的蛋白质具有80％以上的同一性且具有相同功能的蛋白质，进一步优选的，所述氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加发生在第28、99、126、128、134、142、166和168位之外。3.根据权利要求1
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2任一所述的联合疫苗，其特征在于，在I、所述来自SARS
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2的融合蛋白中，所述来自SARS
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2的融合蛋白还包括多聚体标签蛋白，优选的，所述多聚体为三聚体或二聚体，更优选的，所述多聚体为三聚体，所述三聚体标签蛋白包括但不限于T4噬菌体纤维蛋白“折叠”三聚体结构域(T4Foldon)、源自酵母转录激活因子GCN4的异亮氨酸拉链和卷曲螺旋三聚体结构域、前胶原C－前肽结构域(Trimer
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Tag)、大肠杆菌天冬氨酸转氨甲酰酶(ATCase)的催化亚基、胶原蛋白XV的三聚体结构域、胶原蛋白XVIII的三聚体结构域、真核热休克转录因子的卷曲螺旋三聚体结构域，进一步优选的，所述T4Foldon的氨基酸序列如SEQ ID No.4的第252
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277位所示，或者上述序列经过氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与SEQ ID No.4的第252
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277位所示的蛋白质具有80％以上的同一性且具有相同功能的蛋白质，优选的，所述多聚体标签蛋白直接或通过接头连接在所述突变蛋白的N端或C端，更优选的，所述接头可为柔性肽接头，如包括甘氨酸和/或丝氨酸残基的肽接头，进一步优选的，所述接头为GGGGS(SEQ ID No.9)、GSGSGSG(SEQ ID No.10)、GGGGSGGGGS(SEQ ID No.11)或GSGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID No.12)；进一步优选的，在I、所述来自SARS
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2的融合蛋白中，来自SARS
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2的融合蛋白可包括下述任一种：B1)氨基酸序列包括SEQ ID No.4的第26
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244位和第252
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277位，或者包括SEQ ID No.4的第26
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277位的蛋白质；B2)将B1)所示的氨基酸序列经过氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与B1)所示的蛋白质具有80％以上的同一性且具有相同功能的蛋白质；B3)在B1)或B2)的N端和/或C端连接标签或信号肽得到的具有相同功能的融合蛋白质；其中优选，B3)所述融合蛋白质可包括下述任一种：
C1)氨基酸序列包括SEQ ID No.4的第1
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277位的蛋白质或将SEQ ID No.4的第1
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277位所示的氨基酸序列经过氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与SEQ ID No.4的第1
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277位所示的蛋白质具有80％以上的同一性且具有相同功能的蛋白质；C2)氨基酸序列包括SEQ ID No.4的蛋白质或将SEQ ID No.4所示的氨基酸序列经过氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与SEQ ID No.4所示的蛋白质具有80％以上的同一性且具有相同功能的蛋白质。4.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：王希良，程晋霞，王亚丽，宋娅莉，徐骁，刘昕阳，王莉，李世崇，
申请(专利权)人：吉诺卫廊坊临空自贸区生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：