一种流感病毒和RSV的联合疫苗、其制备方法与应用技术

本发明专利技术涉及一种流感病毒和RSV联合疫苗、其制备方法与应用，所述联合疫苗包括：I、包括来自流感病毒的血凝素的流感疫苗原液和II、包括来自RSV的融合蛋白的RSV疫苗原液，所述联合疫苗将野生型抗原进行突变，获得的融合蛋白具有更高的免疫原性、稳定性和安全性，多个病毒抗原联合应用，相互无抑制作用，并可以协同提高疫苗的免疫原性，广谱抗原，可同时刺激机体产生针对多种亚型的流感病毒以及多种RSV亚型的体液或者细胞免疫保护效力。的体液或者细胞免疫保护效力。的体液或者细胞免疫保护效力。

【技术实现步骤摘要】
一种流感病毒和RSV的联合疫苗、其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及预防流感病毒和RSV感染的流感病毒和RSV的联合疫苗、其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]无论是下呼吸道感染还是上呼吸道感染，绝大部分是由病毒引起的，称病毒性呼吸道感染，常见的病毒包括流感病毒和RSV。
[0003]流感病毒（Influenza virus）是流行性感冒病毒的简称。属于正黏液病毒科，为单链RNA膜病毒，其RNA含有八个片断。流感病毒的基因结构使其有不断交换基因片断进而形成优势变异的条件。根据核蛋白和膜表面蛋白抗原，它分为甲（A）、乙（B）、丙（C）和丁（D）型，流感病毒的外层有两种不同糖蛋白构成辐射状突起，即血凝素（H）和神经氨酸酶（N）。流感病毒的抗原变异就是指H和N抗原结构的改变。其中人类主要以甲型和乙型感染为主，甲型流感病毒最容易发生变异，流感大流行就是甲型流感病毒出现新亚型或旧亚型重现引起的。甲型流感病毒根据H和N抗原不同，又分为许多亚型，H可分为18个亚型（H1～H18），N有11个亚型（N1～N11）。常见的乙型流感病毒包括BY和BV。
[0004]RSV是呼吸道合胞病毒（Respiratory Syncytial Virus，RSV）的简称，于 1955 年首次被发现，属于副黏病毒科（Paramyxoviridae），肺炎病毒亚科（Pneumovirinae），肺炎病毒属（Pneumovirus），依据 G 蛋白的序列可分为 A 和 B 两个亚型。RSV 为非节段性的负链 RNA 病毒，其基因组长度为 15.2kb，有 10 个基因，共编码 11 种蛋白，包括非结构蛋白（NS1，NS2）、核蛋白（N）、磷蛋白（P）、基质蛋白（M）、RNA 依赖 RNA 聚合酶（L）、转录延伸因子（M2
‑
1）、调控因子（M2
‑
2）和 3 种包膜糖蛋白（黏附蛋白（G）、融合蛋白（F）和小疏水蛋白（SH））。
[0005]RSV 是引起呼吸道感染（Respiratory tract infection，RTI）的病毒性病原体，感染主要引起下呼吸道感染症状，其中严重症状的患者占有相当高的比例（如毛细支气管炎和肺炎），需要住院治疗，具有较高的死亡率。RSV 可以通过人与人之间接触传播，或者通过咳嗽或打喷嚏而吸入传播，也可通过接触污染物而获得感染，主要感染鼻腔以及肺部大、小气道的上皮细胞，也可能感染肺泡巨噬细胞和肺部其它类型的细胞，可引起细胞融合在一起形成合胞体。
[0006]根据现有的数据，流感病毒和RSV的流行时间窗口有很大程度的重合。因而开发同时针对流感病毒和RSV的联合疫苗将会在免疫接种方案和成本上提供极大的方便和优势。
[0007]然而，无论是流感病毒还是RSV，都是一种RNA病毒，容易在复制过程中出错，大量复制可引起多种变异，并且变异速度极快，因此经常会因为突变而出现免疫逃逸的现象，导致疫苗的保护性下降。随着流感病毒和RSV的不断进化，现有疫苗的保护效果受到不同程度的影响。因此，研究和开发更为有效的、针对各种突变毒株的通用型疫苗对于预防流感病毒和RSV感染具有重要的意义和广泛的临床应用前景。

技术实现思路

[0008]为解决上述技术问题，本专利技术提供一种具有预防流感病毒和RSV感染，更为有效的、针对各种突变毒株的通用型疫苗，具体的，本专利技术第一方面，提供一种联合疫苗，所述联合疫苗包括：I、包括来自流感病毒的血凝素的流感疫苗原液和II、包括来自RSV的融合蛋白的RSV疫苗原液，其中，I、所述血凝素来自至少一种流感病毒亚型；II、所述来自RSV的融合蛋白包括pre
‑
F蛋白的突变蛋白，所述突变蛋白包括相对于野生型pre
‑
F蛋白的突变，所述突变包括第67、88、110、144、159、173、202、227、236、248、289、309、334、344、370、389、419和/或468位中一个或者多个位点的突变。
[0009]进一步的，所述组分I、II在下文进行更为详细的说明。I、 包括来自流感病毒的血凝素的流感疫苗原液:
[0010]优选的，所述流感病毒至少包括一种或者多种流感病毒亚型，更优选的，所述流感病毒来自甲型、乙型、丙型和/或丁型流感病毒。
[0011]更优选的，所述流感病毒至少包括甲型流感病毒，例如H1N1、H3N2、H5N1、H7N1、H7N2、H7N3、H7N7、H7N9、H9N2和H10N8等等。
[0012]在一个具体的实施方式中，所述流感病毒至少包括H1N1和H3N2亚型；更优选的，所述流感病毒包括甲型和乙型流感病毒。
[0013]在一个具体的实施方式中，所述流感病毒至少包括H1N1、H3N2亚型、乙型BY和BV亚型。
[0014]所述联合疫苗中，所述每种流感病毒亚型的血凝素含量为15
‑
50
µ
g/ml，可以是上述范围内的任一范围或者数值，例如具体可为15、18、20、22、25、18、30、35、40、45、48、50
µ
g/ml。II、包括来自RSV的融合蛋白的RSV疫苗原液：
[0015]所述来自RSV的融合蛋白包括pre
‑
F蛋白的突变蛋白，所述突变蛋白包括相对于野生型pre
‑
F蛋白的突变，所述突变包括第67、88、110、144、159、173、202、227、236、248、289、309、334、344、370、389、419和/或468位中一个或者多个位点的突变。
[0016]优选的，所述突变包括在第88位的突变，更优选的，所述突变包括：II
‑
1）在第88和289位的突变；II
‑
2）在第88和389位的突变；II
‑
3）在第88、289、309和468位的突变；II
‑
4）第67、88、144和389位的突变；II
‑
5）在第67、88、110、144、289、309、389和468位的突变。
[0017]优选的，所述突变包括在第202和334位的突变，更优选的，所述突变包括：II
‑
6）在第202位、334和389位的突变；II
‑
7）在第202位、289和334的突变；II
‑
8）在第159、202、248、334、344和389位的突变；II
‑
9）在第67、110、144、202、227、248、334、344和389位的突变；II
‑
10）在第159、202、289、334、344和468位的突变；II
‑
11）在第67、110、144、159、202、236、248、289、309、334、370、389、419和468位的
突变。
[0018]优选的，所述突变包括在143和144之间本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种联合疫苗，其特征在于，所述联合疫苗包括：I、包括来自流感病毒的血凝素的流感疫苗原液和II、包括来自RSV的融合蛋白的RSV疫苗原液，其中，I、所述血凝素来自至少一种流感病毒亚型；II、所述来自RSV的融合蛋白包括pre
‑
F蛋白的突变蛋白，所述突变蛋白包括相对于野生型pre
‑
F蛋白的突变，所述突变包括第67、88、110、144、159、173、202、227、236、248、289、309、334、344、370、389、419和/或468位中一个或者多个位点的突变。2.根据权利要求1所述的联合疫苗，其特征在于，在I、 包括来自流感病毒的血凝素的流感疫苗原液中，所述流感病毒至少包括甲型流感病毒。3.根据权利要求2所述的联合疫苗，其特征在于，所述甲型流感病毒包括H1N1、H3N2、H5N1、H7N1、H7N2、H7N3、H7N7、H7N9、H9N2和/或H10N8。4.根据权利要求3所述的联合疫苗，其特征在于，所述甲型流感病毒至少包括H1N1和H3N2亚型。5.根据权利要求2所述的联合疫苗，其特征在于，所述流感病毒包括甲型和乙型流感病毒。6.根据权利要求5所述的联合疫苗，其特征在于，所述流感病毒至少包括H1N1、H3N2亚型、乙型BY和BV亚型。7.根据权利要求1所述的联合疫苗，其特征在于，在II、包括来自RSV的融合蛋白的RSV疫苗原液中，所述pre
‑
F蛋白的突变蛋白的突变包括在第88位的突变。8.根据权利要求7所述的联合疫苗，其特征在于，所述突变包括：II
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1）在第88和289位的突变；II
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2）在第88和389位的突变；II
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3）在第88、289、309和468位的突变；II
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4）第67、88、144和389位的突变；II
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5）在第67、88、110、144、289、309、389和468位的突变。9.根据权利要求7所述的联合疫苗，其特征在于，所述pre
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F蛋白的突变蛋白的突变包括在第202和334位的突变。10.根据权利要求9所述的联合疫苗，其特征在于，所述pre
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F蛋白的突变蛋白的突变包括II
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6）在第202位、334和389位的突变；II
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7）在第202位、289和334的突变；II
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8）在第159、202、248、334、344和389位的突变；II
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9）在第67、110、144、202、227、248、334、344和389位的突变；II
‑
10）在第159、202、289、334、344和468位的突变；II
‑
11）在第67、110、144、159、202、236、248、289、309、334、370、389、419和468位的突变。11.根据权利要求7所述的联合疫苗，其特征在于，所述pre
‑
F蛋白的突变蛋白的突变包括在143和144之间插入半胱氨酸。12.根据权利要求7所述的联合疫苗，其特征在于，所述突变包括替换、插入和/或缺失。13.根据权利要求7所述的联合疫苗，其特征在于，所述突变包括如下a1）
‑
a19）中至少
一种突变后得到的蛋白： a1）将Pre
‑
F蛋白氨基酸序列第67位的异亮氨酸突变为天冬酰胺； a2）将Pre
‑
F蛋白氨基酸序列第88位的丝氨酸突变为天冬酰胺； a3）将Pre
‑
F蛋白氨基酸序列第110位的半胱氨酸突变为丙氨酸； a4）将Pre
‑
F蛋白氨基酸序列第143位和第144位氨基酸之间插入甘氨酸；a5）将Pre
‑
F蛋白氨基酸序列在第144位天冬酰胺突变为半胱氨酸； a6）将Pre
‑
F蛋白氨基酸序列第159位的酪氨酸突变为半胱氨酸； a7）将Pre
‑
F蛋白氨基酸序列第173位的半胱氨酸缺失； a8）将Pre
‑
F蛋白氨基酸序列第202位的丙氨酸突变为半胱氨酸； a9）将Pre
‑
F蛋白氨基酸序列第227位的异亮氨酸突变为天冬酰胺； a10）将Pre
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F蛋白氨基酸序列第236位的丝氨酸突变为精氨酸； a11）将Pre
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F蛋白氨基酸序列第248位的丝氨酸突变为半胱氨酸； a12）将Pre
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F蛋白氨基酸序列第289位的谷氨酸突变为天冬酰胺； a13）将Pre
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F蛋白氨基酸序列第309位的丝氨酸突变为天冬酰胺； a14）将Pre
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F蛋白氨基酸序列第334位的精氨酸突变为酪氨酸； a15）将Pre
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F蛋白氨基酸序列第344位的天冬酰胺突变为谷氨酸； a16）将Pre
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：王希良，程晋霞，张金灿，丁志航，司炳银，刘昕阳，王莉，李世崇，
申请(专利权)人：吉诺卫廊坊临空自贸区生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：