针对细胞角蛋白的抗肿瘤反应制造技术

本发明专利技术涉及可以用于癌症免疫治疗的瓜氨酸化细胞角蛋白肽。经修饰的肽可以用作疫苗或用作T细胞受体(TCR)疗法和过继性T细胞转移疗法的靶标。这种疫苗或靶标可以用于治疗癌症。这种疫苗或靶标可以用于治疗癌症。这种疫苗或靶标可以用于治疗癌症。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】针对细胞角蛋白的抗肿瘤反应
[0001]本专利技术涉及可以用于癌症免疫治疗的经修饰的细胞角蛋白肽。经修饰的肽可以用作疫苗或用作T细胞受体(TCR)疗法和过继性T细胞转移疗法的靶标。这种疫苗或靶标可以用于治疗癌症。
[0002]癌症疫苗需要诱导能够打破耐受性并克服免疫抑制性肿瘤环境的强效免疫反应以便有效。最近已经强调了CD4 T细胞在介导肿瘤破坏方面的重要性，然而已经证实诱导自身特异性CD4反应较为困难。相比之下，识别经修饰的自身表位的CD4 T细胞已经显示在一些自身免疫疾病的病理生理学方面发挥作用，如类风湿性关节炎(RA)、胶原蛋白II诱导的关节炎、肉状瘤病、乳糜泻和银屑病(Choy 2012；Grunewald和Eklund 2007；Coimbra等人2012；Holmdahl等人1985)。这些常见修饰之一是精氨酸的瓜氨酸化，其涉及精氨酸的带正电荷的醛亚胺基(＝NH)转化为瓜氨酸的带中性电荷的酮基(＝O)。瓜氨酸化经由肽酰精氨酸脱亚胺酶(PAD)介导，该酶是见于各种组织中的钙依赖性酶家族。Ireland等人的最近的报告(Ireland和Unanue 2011)表明，瓜氨酸化的T细胞表位在抗原提呈细胞(APC)上的提呈也依赖于自噬和PAD活性。这种过程也被证明是使得能够加工内源性抗原以在专职APC以及上皮细胞的MHC II类分子上提呈的有效机制(Munz 2012；Schmid,Pypaert,和Munz 2007)。自噬在APC中是组成性的，但是在其它细胞中只在应激下才被诱导(Green和Levine 2014)。识别瓜氨酸化表位的T细胞不会针对不表达瓜氨酸化肽的正常健康细胞。自噬是由应激(如低氧和缺营养)引发的，并且被上调以促进肿瘤的存活(Green和Levine 2014)。
[0003]细胞角蛋白是在所有上皮细胞上表达的最大的中间丝(IF)蛋白家族，它们具有显著的生化多样性(Liao、Ku和Omary 1997)、广泛的组织分布、多种功能和疾病关联(Chou、Skalli和Goldman 1997；Chang等人2013)。它们通过形成从质膜发出的细胞质支架在维持细胞的形状和刚性方面发挥重要作用(Fuchs和Cleveland 1998)。除了结构功能外，它们还参与调节细胞周期进程、细胞凋亡、细胞应激反应、蛋白质合成、细胞大小和膜运输的细胞信号通路(Paramio和Jorcano 2002；Coulombe和Omary 2002；Oshima 2002)。
[0004]细胞角蛋白的表达谱分析允许根据特定细胞角蛋白的存在对上皮细胞进行分类(Moll、Divo和Langbein 2008；Moll等人1982)。细胞角蛋白8、18和19在简单上皮细胞上表达，而细胞角蛋白5和14在基底上皮细胞上表达。细胞角蛋白丝是灵活的，可以重新组织以响应机械和非机械刺激的变化，以调节包括细胞信号传导和迁移在内的不同细胞过程(Gu和Coulombe 2007；Chung，Rotty和Coulombe 2013)。
[0005]细胞角蛋白的表达已被病理学家用来帮助对不同癌症类型进行分类；大多数癌细胞起源于上皮细胞。对肿瘤进行细胞角蛋白表达染色已被证明对帮助病理学家鉴定肿瘤极有用；自从1980年代以来，细胞角蛋白特异性单克隆抗体已被用于诊断癌症(Oshima 2007；Moll、Divo和Langbein 2008)。例如，对于非小细胞肺癌(NSCLC)，与腺癌相比，细胞角蛋白17的过度表达与鳞状细胞癌相关(Moll、Divo和Langbein 2008)。
[0006]越来越多的研究已经表明，细胞角蛋白在癌细胞转移中起作用，并且有助于患者预后(Karantza 2011)。例如，在结肠直肠癌中，细胞角蛋白8和细胞角蛋白20的表达降低与上皮
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间充质(EMT)癌细胞转化以及患者存活率降低有关(Knosel等人2006)。在胰腺癌患者
中，细胞角蛋白20在患有胰腺腺癌的患者的骨髓和/或血液中的表达与不良预后相关(Soeth等人2005；Matros等人2006；Schmitz
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Winnenthal等人2006)。透明细胞RCC中细胞角蛋白7和细胞角蛋白19的共表达与更好的临床结局相关(Mertz等人，2008)。然而，细胞角蛋白8和18在循环肿瘤细胞上的共表达与原发性肿瘤切除时存在转移和较差的总体存活相关(Bluemke等人，2009)。与细胞角蛋白表达和预后的其他相关性也发现于许多其他癌症中，包括胃癌(Katsuragi等人，2007)、肝细胞癌(Yang等人，2008)、子宫内膜癌(Stefansson、Salvesen和Akslen，2006)和皮肤癌(Chen等人，2009)。
[0007]存在54种角蛋白基因，其中28种I型序列和26种II型序列，它们受到调节使得I型和II型细胞角蛋白的异二聚体形成，其进一步聚合以形成细丝。该过程在转录水平和翻译后水平受到调节(Gu和Coulombe 2007)。细胞角蛋白8，也称为角蛋白(Keratin)，II型细胞骨架8，角蛋白8(KRT8，CK8，K8)，是位于12号染色体上的II型细胞角蛋白家族的成员。通过选择性启动子使用和选择性剪接来产生两种可变剪接变体(图1A)，同种型1(P05787
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1)，其具有53kDa、483个氨基酸；和同种型2(P05787
‑
2)，其具有56kDa、511个氨基酸。大量突变也已经被鉴定出并且与肝脏疾病、胰腺炎和炎症性肠病相关(Szeverenyi等人，2008)。
[0008]细胞角蛋白8(Cyk8)是熟知的上皮标志物蛋白，其与细胞角蛋白18聚合。这种细胞角蛋白配对首先在胚胎发生中表达。在成体组织中，这种配对的表达限制于简单(如肝脏、胰腺、肾脏)和混合(如乳腺、肺)上皮细胞(Moll等人1982；Owens和Lane 2003；Franke等人1981；Blobel等人，1984)。已经在腺癌和鳞状细胞癌中观察到这种配对的过度表达(Oshima、Baribault和Caulin 1996；Vaidya等人1989)。据报道，在乳腺癌和黑色素瘤中，细胞角蛋白8和18的表达连同波形蛋白导致乳腺细胞癌和黑色素瘤的耐药性、侵袭和转移增加(Thomas等人，1999)。Cyk8的异常表达存在于非小细胞肺癌中，也存在于NSCLC患者的血清中(Fukunaga等人，2002)。Cyk8的自身抗体也已经在患有类风湿性关节炎(RA)的患者中发现，并且被描述为所称的与RA相关的抗角蛋白抗体的真抗原之一(Wang等人，2015)。
[0009]细胞角蛋白在维持上皮结构完整性上发挥着重要作用，尤其在应激期间。它们是关键的细胞调节剂，但越来越多的证据表明它们在上皮肿瘤发生和癌症治疗反应中发挥作用。蛋白质的翻译后修饰发生在细胞应激条件下。其中一种修饰涉及瓜氨酸化，即由肽酰精氨酸脱亚胺酶(PAD)将精氨酸残基转化为瓜氨酸。瓜氨酸化的发生是作为在应激细胞中诱导的降解和再循环进程(自噬)的结果(Irel本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种瓜氨酸化T细胞抗原，包括以下、基本上由以下组成、或由以下组成：i)氨基酸序列中的一种或多种：KFASFIDKVRFLEQQNKMLE(SEQ ID NO:1)LREYQELMNVKLALDIEI(SEQ ID NO:2)KSYKMSTSGPRAFSSRSFT(SEQ ID NO:16)KSYKVSTSGPRAFSSRSYT(SEQ ID NO:3)KLALDIEIATYRKLLEGEE(SEQ ID NO:4)RSNMDNMFESYINNLRRQL(SEQ ID NO:5)和LTDEINFLRQLYEEEIRELQ(SEQ ID NO:6)，其中所述序列中的至少一个精氨酸(R)残基被瓜氨酸取代，和/或ii)i)中的一种或多种氨基酸序列，但是其中在非精氨酸位置上具有1、2或3个氨基酸置换，和/或1、2或3个氨基酸插入，和/或1、2或3个氨基酸缺失。2.根据权利要求1所述的抗原，包括以下、基本上由以下组成、或由以下组成：i)以下的氨基酸序列中的一种或多种：KFASFIDKV
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cit
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FLEQQNKMLEL
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cit
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EYQELMNVKLALDIEI(SEQ ID NO:11)KSYKMSTSGP
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cit
‑
AFSSRSFT(SEQ ID NO:23)KSYKVSTSGP
‑
cit
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AFSS
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cit
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SYT(SEQ ID NO:12)KLALDIEIATY
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cit
‑
KLLEGEE(SEQ ID NO:13)cit
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SNMDNMFESYINNL
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cit
‑
cit
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QL(SEQ ID NO:14)LTDEINFL
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【专利技术属性】
技术研发人员：琳达，
申请(专利权)人：斯坎塞尔有限公司，
类型：发明
国别省市：