具有缀合位点的T细胞调节多肽及其使用方法技术

本发明专利技术提供T细胞调节多肽(T细胞

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有缀合位点的T细胞调节多肽及其使用方法
[0001]序列表并入
[0002]本申请含有经由EFS
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web以电子方式提交的序列表，该序列表既可作为纸质副本，也可作为计算机可读形式(CRF)，并且由2021年7月13日创建的大小为641,516字节的名为“123640
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8021US02_seqlist.txt”的档案组成，并且其以全文引用的方式并入本文中。

技术介绍

[0003]诱导适应性免疫反应的能力涉及存在于T细胞表面上的T细胞受体(TCR)与小肽或非肽分子(例如，分子的表位，诸如多肽)的接合，该小肽或非肽分子由位于抗原呈递细胞(APC)表面上的主要组织相容性复合体(MHC；在人中也称为人白细胞抗原(HLA)复合体)呈递。此接合代表免疫系统的靶向机制且为用于T细胞调节(活化或抑制)和效应子功能的必不可少的分子相互作用。在表位特异性细胞靶向后，所靶向T细胞的反应由免疫调节分子(其中一些发现于APC表面上)的存在决定，所述分子通过与T细胞上的对应受体接合而起作用。需要两种信号——表位/TCR结合和免疫调节分子与T细胞上的其对应受体的接合—来驱动目标T细胞功能的活化或抑制。TCR对给定表位具有特异性；然而，免疫调节分子的对应受体不是表位特异性的，并且相反通常表达于所有T细胞或较大T细胞子集上。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供T细胞调节多肽(一种“T细胞
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MP”或多种“T细胞
‑
MP”)，其尤其可用于体内、离体和体外治疗哺乳动物(例如，人)的各种疾病(例如，癌症、病毒感染和自身免疫性病症)和其他病症的方法以及用于制备用于此类治疗的药物中。在一个方面中，本文所述的T细胞
‑
MP包含I类MHC
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H多肽、β2M多肽、用于共价连接表位呈递分子的化学缀合位点和至少一种免疫调节多肽(本文中也称为“MOD多肽”或简称为“MOD”)。T细胞
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MP中存在的任何一种或多种MOD可为野生型(“wt.”)或对其细胞结合配偶体/受体(例如，T细胞表面)展现改变的结合亲和力的变体，称为Co
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MOD。
[0005]T细胞
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MP可为未缀合的，在此情况下，其包含至少一个化学缀合位点，在该位点处，可共价结合包含目标抗原决定簇(例如，肽、糖肽或非肽，诸如呈递表位的碳水化合物)的分子以形成T细胞
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MP
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表位缀合物，以呈递至携载T细胞受体的细胞。包含用于连接表位的化学缀合位点的未缀合T细胞
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MP可用于快速制备可调节对所呈递的表位具有特异性的T细胞的活性的T细胞
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MP
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表位缀合物，并且因此可用于调节个体中涉及那些T细胞的免疫反应。
[0006]本文所述的T细胞
‑
MP适用于在基于细胞的表达系统中生产，其中大部分或实质上所有(例如，大于75％、85％或90％)或所有所表达的未缀合T细胞
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MP多肽/蛋白处于可溶的非聚集状态下，该状态在37℃下为适当稳定的以用于在组织培养中生产和至少在高至该温度下使用。T细胞
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MP可有利地作为由包含在单一载体中的核酸序列编码的单一多肽产生。T细胞
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MP可形成高级结构，诸如双链体(参见例如图1)，其可为如图9中的同二聚体，或在由两个T细胞
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MP形成时的异二聚体，例如，如图10和图11中所说明。未缀合T细胞
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MP可以高产
量表达，例如大于25、40、60或80毫克/升(mg/liter)(例如，在CHO细胞中约25至约40、约40至约60或约60至约80mg/l)。在MHC
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H链α1螺旋的羧基端与MHC
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H链α2‑1螺旋之间存在二硫键(例如，Y84C
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A139C二硫键)时，产量可尤其高，并且MHC
‑
H多肽序列与β2M多肽之间的接头具有足够的长度(例如，约10至约50个aa长)。在α1与α2螺旋之间存在二硫键的情况下，未缀合T细胞
‑
MP表达量可超过80mg/l(例如，约80至约100、约100至约120、约120至约140、约140至约160、约160至约180或约180至约200mg/l)。
[0007]一旦纯化，大部分、实质上所有(例如，大于85％或90％的T细胞
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MP)或所有所表达的未缀合T细胞
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MP蛋白即使在缀合于表位(例如，肽表位)后仍保持在可溶性非聚集状态下且与未缀合T细胞
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MP相比是类似稳定的。未缀合T细胞
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MP和其表位缀合物可另外包含可将T细胞
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MP表位缀合物引导至特定细胞或组织(例如，肿瘤)的靶向序列。有效负载(例如，生物活性物质或标记)，诸如用于与特定目标表位共同递送的治疗剂(例如，化学治疗剂)，也可诸如通过交联剂而共价连接至T细胞
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MP。因此，T细胞
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MP
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表位缀合物可被视为以表位特异性方式任选地在靶向序列辅助下藉以将MOD(例如，IL
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2、4
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1BBL、FasL、TGF
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β、CD70、CD80、CD86或其变体)和/或有效负载(例如，化学治疗剂)递送至T细胞的手段。
[0008]T细胞
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MP可包含有助于在细胞内运输期间和/或在即便在不存在相关表位(例如，肽表位)的情况下也由表达多聚体多肽的细胞分泌之后使未缀合T细胞
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MP稳定的修饰。一种此类修饰为形成于I类MHCα1螺旋(或其侧接氨基酸序列aac1和aac2)的羧基端的氨基酸位置84与I类MHCα2‑1螺旋(或其侧接氨基酸序列aac3和aac4)的氨基端的氨基酸位置139之间的键(例如，二硫键)。举例而言，在MHC
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H的氨基酸84(Y84C取代)和139(A139C取代)或等效位置(例如参见图3I)处插入半胱氨酸残基可形成有助于使T细胞
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MP稳定的二硫键。参见例如，Z.Hein等人，(2014),Journal of Cell Science 127:2885
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2897。
[0009]本文所述的T细胞
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MP分子的一个方面广泛关于一种未缀合T细胞
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MP，该多肽包含(例如，自N端至C端)：
[0010](i)任选的一个或多个MOD多肽序列(例如，两个或更多个诸如串连的MOD多肽序列，其中当存在两个或更多个MOD多肽序列时，其任选地通过独立选择的L1接头彼此接合)；
[0011](ii)任选的L2接头多肽序列，其将一个或多个任选的MOD多肽序列接合至β2M多肽序列；
[0012](iii)本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种未缀合T细胞调节多肽(T细胞
‑
MP)，所述多肽包含：(i)任选的一个或多个MOD多肽序列或两个或更多个串连的MOD多肽序列，其中当存在两个或更多个MOD多肽序列时，其任选地通过独立选择的L1接头彼此接合；(ii)任选的L2接头多肽序列，其将所述一个或多个MOD多肽序列接合至β2M多肽序列；(iii)所述β2M多肽序列；(iv)L3接头多肽序列，其长度为10至50个aa；(v)I类MHC
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H多肽序列，其中所述MHC
‑
H多肽包含在位置84和139处的半胱氨酸取代，所述半胱氨酸取代形成链内二硫键；(vi)任选的L4接头多肽序列；(vii)支架多肽序列；(viii)任选的L5接头多肽序列；和(ix)任选的一个或多个MOD多肽序列或两个或更多个串连的MOD多肽序列，其中当存在两个或更多个MOD多肽序列时，其任选地通过独立选择的L6接头彼此接合；其中所述未缀合T细胞
‑
MP包含至少一个MOD多肽序列作为元件(i)或(ix)的部分；并且其中所述β2M多肽序列、所述L3接头多肽序列和/或所述MHC
‑
H多肽序列中的至少一种包含用于表位缀合的化学缀合位点。2.如权利要求1所述的未缀合T细胞
‑
MP，所述多肽自N端至C端包含：(i)任选的一个或多个MOD多肽序列或两个或更多个串连的MOD多肽序列，其中当存在两个或更多个MOD多肽序列时，其任选地通过独立选择的L1接头彼此接合；(ii)任选的L2接头多肽序列；(iii)β2M多肽序列；(iv)L3接头多肽序列，其长度为10至50个aa；(v)I类MHC
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H多肽序列，其中所述MHC
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H多肽包含在位置84和139处的半胱氨酸取代，所述半胱氨酸取代形成链内二硫键；(vi)任选的L4接头多肽序列；(vii)支架多肽序列；(viii)任选的L5接头多肽序列；和(ix)任选的一个或多个MOD多肽序列或两个或更多个诸如串连的MOD多肽序列，其中当存在两个或更多个MOD多肽序列时，其任选地通过独立选择的L6接头彼此接合；其中所述未缀合T细胞
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MP包含至少一个MOD多肽序列作为元件(i)或(ix)的部分；并且其中所述β2M多肽序列、所述L3接头多肽序列和/或所述MHC
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H多肽序列中的至少一种包含用于表位缀合的化学缀合位点。3.如权利要求1所述的未缀合T细胞
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MP，所述多肽自N端至C端包含：(i)一个或多个MOD多肽序列或两个或更多个串连的MOD多肽序列，其中当存在两个或更多个MOD多肽序列时，其任选地通过独立选择的L1接头彼此接合；(ii)任选的L2接头多肽序列；(iii)β2M多肽序列；(iv)L3接头多肽序列，其长度为10至50个aa；(v)I类MHC
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H多肽序列，其中所述MHC
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H多肽包含在位置84和139处的半胱氨酸取代，所
述半胱氨酸取代形成链内二硫键；(vi)任选的L4接头多肽序列；(vii)支架多肽序列；(viii)任选的L5接头多肽序列；和(ix)任选的一个或多个MOD多肽序列或两个或更多个串连的MOD多肽序列，其中当存在两个或更多个MOD多肽序列时，其任选地通过独立选择的L6接头彼此接合；其中所述β2M多肽序列、所述L3接头多肽序列和/或所述MHC
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H多肽序列中的至少一种包含用于表位缀合的化学缀合位点。4.如权利要求1所述的未缀合T细胞
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MP，所述多肽自N端至C端包含：(i)任选的一个或多个MOD多肽序列或两个或更多个串连的MOD多肽序列，其中当存在两个或更多个MOD多肽序列时，其任选地通过独立选择的L1接头彼此接合；(ii)任选的L2接头多肽序列；(iii)β2M多肽序列；(iv)L3接头多肽序列，其长度为10至50个aa；(v)I类MHC
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H多肽序列，其中所述MHC
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H多肽包含在位置84和139处的半胱氨酸取代，所述半胱氨酸取代形成链内二硫键；(vi)任选的L4接头多肽序列；(vii)支架多肽序列；(viii)任选的L5接头多肽序列；和(ix)一个或多个MOD多肽序列或两个或更多个串连的MOD多肽序列，其中当存在两个或更多个MOD多肽序列时，其任选地通过独立选择的L6接头彼此接合；其中所述β2M多肽序列、所述L3接头多肽序列和/或所述MHC
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H多肽序列中的至少一种包含用于表位缀合的化学缀合位点。5.如任一前述权利要求所述的未缀合T细胞
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MP，其中所述β2M多肽序列、所述L3接头多肽序列或所述MHC
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H多肽序列包含用于表位缀合的化学缀合位点。6.如权利要求5所述的未缀合T细胞
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MP，其中所述β2M多肽序列与图4中提供的成熟人β2M多肽NP_004039.1SEQ ID NO:61的至少70个或至少90个连续aa具有至少90％或至少95％序列同一性。7.如权利要求6所述的未缀合T细胞
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MP，其中所述MHC
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H多肽序列包含选自HLA
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A、HLA
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B、HLA
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C、HLA
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E、HLA
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F和HLA
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GMHC
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H多肽序列的人I类MHC
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H链多肽序列，其与图3A至图3H中的任一个中提供的MHC
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H多肽的至少200个连续aa具有至少85％序列同一性。8.如权利要求7所述的未缀合T细胞
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MP，其中所述MHC
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H多肽序列包含在位置84与位置139之间的二硫键。9.如权利要求8所述的未缀合T细胞
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MP，其中所述MHC
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H多肽序列包含与以下的至少200个连续aa具有至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列：HLA
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A*0101(SEQ ID NO:24)、HLA
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A*0201(SEQ ID NO:27)、HLA
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A*0301(SEQ ID NO:35)、HLA
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【专利技术属性】
技术研发人员：罗纳德，
申请(专利权)人：库尔生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：