【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】修饰的细胞毒性T细胞及其使用方法
[0001]交叉引用
[0002]本申请要求2019年10月23日提交的美国临时专利申请号62/925,111的优先权，该申请以引用方式整体并入本文。
技术介绍
[0003]适应性免疫反应涉及存在于T细胞表面上的T细胞受体(TCR)与抗原递呈细胞(APC)表面上非共价递呈的小肽抗原通过主要组织相容性复合物(MHC；在人中也称为人白细胞抗原(HLA)复合物)进行的接合。此接合表示免疫系统的靶向机制且为T细胞调节(活化或抑制)及效应物功能的必需分子相互作用。在表位特异性细胞靶向之后，通过使APC上所见的共刺激蛋白与T细胞上的对应物共刺激蛋白接合来激活所靶向的T细胞。驱动T细胞特异性及活化或抑制需要两种信号，即表位/TCR结合及APC共刺激蛋白与T细胞共刺激蛋白的接合。TCR对于给定表位具有特异性；然而，共刺激蛋白并非表位特异性的且相反通常在全部T细胞上或大T细胞子集上表达。
技术实现思路
[0004]本公开提供体外修饰的细胞毒性T细胞(CTL)，其包含：a)对人体内的预选抗原有特异性的T细胞受体(TCR)；和b)编码对癌症相关抗原有特异性的嵌合抗原受体(CAR)的核酸。本公开提供产生修饰的CTL的方法。本公开提供治疗癌症的方法，其包括向有此需要的个体施用修饰的CTL。
附图说明
[0005]图1为生成和使用根据本公开的修饰的CTL的示意性描绘。
[0006]图2A
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2D提供TMMP的示例性实施方案的示意性描绘。
[0007]图3A...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种体外组合物，其包含一定量的修饰的细胞毒性T细胞(“mCTL”)，其中所述量包含靶mCTL，所述靶mCTL包含：a)对存在于人体内的预选抗原有特异性的T细胞受体(TCR)；和b)包含编码嵌合抗原受体(CAR)的核苷酸序列的一种或多种核酸，其中所述CAR包含对癌症相关抗原有特异性的抗原结合结构域，且其中所述组合物中靶mCTL细胞的百分比超过所述组合物中T细胞总数的至少1％。2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述预选抗原是由病毒或细菌编码的抗原。3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述预选抗原是由选自由以下组成的组的病毒或细菌编码的抗原：巨细胞病毒(CMV)、爱泼斯坦
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巴尔病毒(EBV)、人乳头状瘤病毒(HPV)、腺病毒、流感病毒及破伤风梭菌。4.根据权利要求3所述的组合物，其中所述预选抗原是CMV多肽。5.根据权利要求4所述的组合物，其中所述CMV抗原是CMV pp65多肽。6.根据权利要求1至5中任一项所述的组合物，其中所述CAR包含：a)包含所述抗原结合结构域的胞外结构域；b)跨膜区；和c)包含胞内信号传导结构域的胞质结构域。7.根据权利要求6所述的组合物，其中所述胞质结构域包含一种或多种共刺激多肽。8.根据权利要求7所述的组合物，其中所述共刺激多肽选自CD28、4
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1BB及OX
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40。9.根据权利要求6至8中任一项所述的组合物，其中所述胞内信号传导结构域包含来自人CD3的ζ链的信号传导结构域。10.根据权利要求1至9中任一项所述的组合物，其中所述抗原结合结构域是单链Fv多肽或纳米抗体。11.根据权利要求1至10中任一项所述的组合物，其中所述CAR是单一多肽链CAR。12.根据权利要求1至10中任一项所述的组合物，其中所述CAR包含至少两条多肽链。13.根据权利要求1至12中任一项所述的组合物，其中所述癌症相关抗原选自AFP、BCMA、CD10、CD117、CD123、CD133、CD128、CD171、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD34、CD38、CD5、CD56、CD7、CD70、CD80、CD86、CEA、CLD18、CLL
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1、cMet、EGFR、EGFRvIII、EpCAM、EphA2、GD
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2、glypican
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3、GPC3、HER
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2、κ免疫球蛋白、LeY、LMP1、间皮素、MG7、MUC1、NKG2D配体、PD
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L1、PSCA、PSMA、ROR1、ROR1R、TACI及VEGFR2。14.根据权利要求1至13中任一项所述的组合物，其中所述组合物中作为靶mCTL的T细胞总数的百分比选自由以下组成的组：至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％及100％。15.根据权利要求1至14中任一项所述的组合物，其中所述靶mCTL是CD8
+
T细胞。16.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至15中任一项所述的组合物。17.根据权利要求16所述的药物组合物，其包含药学上可接受的载剂。18.根据权利要求17所述的药物组合物，其中所述药学上可接受的载剂包括盐水。19.根据权利要求16至18中任一项所述的药物组合物，其中所述靶mCTL以约106个细胞/mL至约109个细胞/mL的浓度存在于所述组合物中。20.一种制备根据权利要求1至15中任一项所述的体外组合物的方法，其包括以下步骤：(i)提供包含一定量T细胞的组合物，其中所述量包含靶T细胞，所述靶T细胞具有对所
述预选抗原有特异性的T细胞受体(TCR)；(ii)至少部分地将靶T细胞与包含对所述预选抗原不具特异性的T细胞受体(TCR)的非靶T细胞分离，从而产生一定量的至少部分分离的靶T细胞；以及(iii)通过向所述至少部分分离的靶T细胞中引入一种或多种核酸来修饰所述至少部分分离的靶T细胞，所述一种或多种核酸包含编码嵌合抗原受体(CAR)的核苷酸序列，所述嵌合抗原受体包含对癌症相关抗原有特异性的抗原结合结构域。21.根据权利要求20所述的方法，其中至少部分分离靶T细胞的步骤包括将所述靶T细胞与结合所述靶T细胞的TCR的多肽结合。22.根据权利要求21所述的方法，其中与所述靶T细胞的TCR结合的所述多肽在表面上。23.根据权利要求22所述的方法，其中与所述靶T细胞的TCR结合的所述多肽存在于珠的表面上。24.根据权利要求23所述的方法，其中与TCR结合的所述多肽是负载肽的MHC多聚体。25.根据权利要求20至24中任一项所述的方法，其中存在于人体内的所述预选抗原是由病毒或细菌编码的抗原。26.根据权利要求20至24中任一项所述的方法，其中所述预选抗原是由选自由以下组成的组的病毒或细菌编码的抗原：巨细胞病毒(CMV)、爱泼斯坦
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巴尔病毒(EBV)、人乳头状瘤病毒(HPV)、腺病毒、流感病毒及破伤风梭菌。27.根据权利要求26所述的方法，其中所述预选抗原是CMV多肽。28.根据权利要求27所述的方法，其中所述CMV多肽是CMV pp65多肽。29.根据权利要求20至28中任一项所述的方法，其中所述CAR包含：a)包含所述抗原结合结构域的胞外结构域；b)跨膜区；和c)包含胞内信号传导结构域的胞质结构域。30.根据权利要求29所述的方法，其中所述胞内信号传导结构域包含来自人CD3的ζ链的信号传导结构域。31.根据权利要求29或30所述的方法，其中所述胞质结构域包含一种或多种共刺激多肽。32.根据权利要求31所述的方法，其中所述共刺激多肽选自CD28、4
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1BB及OX
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40。33.根据权利要求20至32中任一项所述的方法，其中所述抗原结合结构域是单链Fv多肽或纳米抗体。34.根据权利要求20至33中任一项所述的方法，其中所述CAR是单一多肽链CAR。35.根据权利要求20至33中任一项所述的方法，其中所述CAR包含两条多肽链。36.根据权利要求20至35中任一项所述的方法，其中所述癌症相关抗原选自AFP、BCMA、CD10、CD117、CD123、CD133、CD128、CD171、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD34、CD38、CD5、CD56、CD7、CD70、CD80、CD86、CEA、CLD18、CLL
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1、cMet、EGFR、EGFRvIII、EpCAM、EphA2、GD
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2、glypican
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3、GPC3、HER
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2、κ免疫球蛋白、LeY、LMP1、间皮素、MG7、MUC1、NKG2D配体、PD
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L1、PSCA、PSMA、ROR1、ROR1R、TACI及VEGFR2。37.根据权利要求20至36中任一项所述的方法，其中所述组合物中作为靶CTL的T细胞总数的百分比选自由以下组成的组：至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％及100％。
38.根据权利要求20至37中任一项所述的方法，其中在步骤(ii)之前，使所述包含一定量T细胞的组合物在体外或体内与包含T细胞调节多肽的组合物接触，所述T细胞调节多肽大体上仅结合并激活包含对所述预选抗原有特异性的T细胞受体(TCR)的T细胞。39.根据权利要求38所述的方法，其中所述T细胞调节多肽是T细胞多聚体多肽(TMMP)，其包含至少一个异二聚体，所述异二聚体包含：(i)包含肽表位和第一主要组织相容性复合物(MHC)多肽的第一多肽，其中所述肽表位是长度为4个氨基酸至约25个氨基酸的肽，并且其中所述肽表位是所述预选抗原的表位；(ii)包含第二MHC多肽的第二多肽；和(iii)至少一种激活包含对所述预选抗原有特异性的T细胞受体(TCR)的T细胞的免疫调节多肽，其中所述第一多肽和/或所述第二多肽包含所述免疫调节多肽，且任选地，其中所述多聚体多肽包含免疫球蛋白(Ig)Fc多肽或非Ig支架。40.根据权利要求39所述的方法，其中所述TMMP包含两个异二聚体，其中两个异二聚体都包含Ig Fc多肽，且其中所述异二聚体通过介于第一异二聚体与第二异二聚体的Ig Fc多肽之间的一个或多个二硫键共价结合。41.根据权利要求39所述的方法，其中所述TMMP包含：a1)第一多肽，其以从N端至C端的次序包含：i)肽表位；和ii)第一MHC多肽；和b1)第二多肽，其以从N端至C端的次序包含：i)至少一种免疫调节多肽；ii)第二MHC多肽；和iii)免疫球蛋白(Ig)Fc多肽；或a2)第一多肽，其以从N端至C端的次序包含：i)肽表位；ii)第一MHC多肽；和iii)至少一种免疫调节多肽；和b2)第二多肽，其以从N端至C端的次序包含：i)第二MHC多肽；和ii)Ig Fc多肽；或a3)第一多肽，其以从N端至C端的次序包含：i)肽表位；和ii)第一MHC多肽；和b3)第二多肽，其以从N端至C端的次序包含：i)第二MHC多肽；和ii)Ig Fc多肽；和iii)至少一种免疫调节多肽；或a4)第一多肽，其以从N端至C端的次序包含：i)肽表位；和
ii)第一MHC多肽；和b4)第二多肽，其以从N端至C端的次序包含：i)第二MHC多肽；和ii)至少一种免疫调节多肽；或a5)第一多肽，其以从N端至C端的次序包含：i)肽表位；和ii)第一MHC多肽；和b5)第二多肽，其以从N端至C端的次序包含：i)至少一种免疫调节多肽；和ii)第二MHC多肽；或a6)第一多肽，其以从N端至C端的次序包含：i)肽表位；ii)第一MHC多肽；和iii)至少一种免疫调节多肽；和b6)第二多肽，其包含：i)第二MHC多肽。42.根据权利要求39至41中任一项所述的方法，其中所述至少一种免疫调节多肽是天然存在的多肽、天然存在的多肽的变体、或天然存在的或变体多肽的片段，且其中所述多肽选自由以下组成的组：4
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1BBL多肽、B7
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1多肽；B7
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2多肽、ICOS
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L多肽、OX
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40L多肽、CD80多肽、CD86多肽、PD
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L1多肽、FasL多肽、细胞因子、PD
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L2多肽及其组合。43.根据权利要求42所述的方法，其中所述至少一种免疫调节多肽是天然存在的细胞因子、天然存在的细胞因子的变体或天然存在的细胞因子的片段。44.根据权利要求43所述的方法，其中所述细胞因子是IL
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2。45.根据权利要求39至44中任一项所述的方法，其中所述至少一种免疫调节多肽是天然存在的多肽、天然存在的多肽的变体、或天然存在的或变体多肽的片段，其中所述至少一种免疫调节多肽选自4
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1BBL多肽和CD80多肽。46.根据权利要求39至45中任一项所述的方法，其中所述TMMP包含2种或更多种免疫调节多肽。47.根据权利要求46所述的方法，其中所述2种或更多种免疫调节多肽是串联的。48.根据权利要求45至47中任一项所述的方法，其中所述多聚体多肽包含：a)第一多肽，其以从N端至C端的次序包含：i)...
【专利技术属性】
技术研发人员：阿尼什，
申请(专利权)人：库尔生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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