TGF-β多肽制造技术

本公开提供转化生长因子β(TGF

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】TGF
‑
β
多肽
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年10月23日提交的美国临时申请号62/925,227的权益，所述申请以引用方式整体并入本文。
[0003]通过引用序列表的方式并入
[0004]本申请含有以电子方式提交的序列表，其充当纸质副本和计算机可读形式(CRF)，并且由名为“123640
‑
8012WO00_seqlist.txt”的文件组成，所述文件创建于2020年10月21日，大小为341,966字节，并且所述序列表以引用方式整体并入本文。
[0005]I.引言
[0006]A.TGF
‑
β及其作用
[0007]转化生长因子β(TGF
‑
β)是属于转化生长因子超家族的细胞因子，所述超家族包含三种哺乳动物(人)同工型，TGF
‑
β1、TGF
‑
β2和TGF
‑
β3。TGF
‑
β作为前体分子来合成，所述前驱分子除了作为TGF
‑
β的活性形式均二聚化的TGF
‑
β序列以外还含有前肽区域。TGF
‑
β由巨噬细胞和其他细胞类型以潜伏复合物形式分泌，在所述复合物中其与两种其他多肽潜伏TGF
‑
β结合蛋白(LTBP)和潜伏相关肽(LAP)组合。潜伏TGF
‑
β复合物储存在细胞外基质(ECM)中，例如，通过CD36经由血小板反应蛋白/>‑
1结合至细胞表面(其中所述复合物可由胞浆素活化)或结合至潜伏转化生长因子β结合蛋白1、2、3和/或4(LTBP1
‑
4)。
[0008]在潜伏TGF
‑
β活化之后，观察到TGF
‑
β的生物功能，所述活化响应于ECM扰动受到严格调控。TGF
‑
β可通过多种细胞或组织特异性途径或在多个细胞或组织类型中观察到的途径来活化；然而，此类活化途径背后的完整机制尚不完全清楚。活化剂包括但不限于蛋白酶、整联蛋白、pH和活性氧物种(reactive oxygen species，ROS)。事实上，细胞/组织结合的潜伏TGF
‑
β复合物起到环境扰动的作用、感知并且对环境扰动作出反应，从而以空间和/或时间方式释放活性TGF
‑
β。所释放的TGF
‑
β用于促进或抑制细胞增殖，这取决于其释放的环境。其还募集干细胞/祖细胞来参与组织再生/重塑过程。TGF
‑
β配体表达、生物利用度、活化、受体功能或转录后修饰的异常干扰正常功能，并且可导致与许多疾病相关的病理后果，诸如通过募集过量祖细胞(例如，在骨关节炎或卡
‑
恩二氏病(Camurati
–
Engelmann disease)中)，或通过将驻留细胞转分化成不利的谱系(例如，在癌症转移或组织/器官纤维化期间，上皮向间质的转变)。Xu等人Bone Research,6(论文编号2)(2018)。
[0009]1非整联蛋白依赖性和整联蛋白依赖性活化
[0010]a.非整联蛋白依赖性活化
[0011]非整联蛋白依赖性的TGF
‑
β活化手段是通过蛋白酶和/或金属蛋白酶、活性含氧物(ROS)和血小板反应蛋白
‑
1等起作用的手段。
[0012]胞浆素和若干基质金属蛋白酶(MMP)通过细胞外基质组分的蛋白水解来促进肿瘤入侵和组织重塑。TGF
‑
β可通过将潜伏复合物自基质中释放的此类蛋白酶的作用而变得活化，随后是LAP的蛋白水解以将TGF
‑
β释放给其受体。已知基质金属蛋白酶
‑
9和
‑
2均可裂解潜伏TGF
‑
β。
[0013]已经证明在辐射曝露以诱导ROS释放之后，TGF
‑
β可在活体内快速活化。认为ROS会
改变LAP与TGF
‑
β之间的相互作用，导致其活化。
[0014]已知一种在健康个体的血浆中发现的糖蛋白，血小板反应蛋白
‑
1(Thrombospondin
‑
1，TSP
‑
1)，其响应于损伤而增加。TSP
‑
1被认为通过形成与潜伏TGF
‑
β复合物的直接相互作用并且防止其结合至成熟的TGF
‑
β而激活潜伏TGF
‑
β。血小板反应蛋白介导的活化被认为涉及伤口(例如，皮肤伤口)愈合。
[0015]b.通过含有α(V)的整联蛋白的活化
[0016]已理解整联蛋白并且特别是含有β6、αV和β8的整联蛋白可促成潜伏TGF
‑
β(例如，TGF
‑
β1)活化。活化似乎通过诱导潜伏TGF
‑
β1复合物的构形变化并由此释放活性TGF
‑
β1或通过整联蛋白
‑
蛋白酶依赖性机制而发生。已理解在无蛋白水解的情况下，导致TGF
‑
β1活化的构形变化(尤其在上皮细胞中)通过整联蛋白结合存在于LAP
‑
β1或LAP
‑
β3中的精氨酰基
‑
甘氨酰基
‑
天冬氨酸细胞黏附基序(RGD基序)而发生。含有RGD基序的LAP由大部分含有αV的整联蛋白所识别。例如，αVβ6整联蛋白可通过结合至存在于LAP
‑
β1和LAP
‑
β3中的RGD基序而活化/释放TGF
‑
β1。另外，整联蛋白
‑
蛋白酶依赖性TGF
‑
β活化可通过在潜伏TGF
‑
β复合物与MMP诸如MMP
‑
2和MMP
‑
9之间产生连接而发生，所述连接可通过潜伏TGF
‑
β复合物的蛋白水解降解来活化TGF
‑
β。
[0017]2 TGF
‑
β信号传导和作用
[0018]活化的TGF
‑
β在细胞分化以及T
‑
细胞调控中发挥关键作用。参见例如Cold Spring HarborPerspect.Biol.2017；9:a022236和其中的引用。TGF
‑
β通过支持胸腺衍生的Treg(tTreg)、恒定自然杀伤T细胞(iNKT)和CD8α+ T
‑
细胞前体的存活，并且因此促进可由强促效剂配体诱导的T
‑
细胞的发育来促进若干T
‑
细胞谱系的胸腺发育。TGF
‑
β通过促进白细胞介素(interleukin，IL)
‑
7Rα的胸腺细胞表本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种构建体，其包含以下各项作为第一多肽：i)支架多肽序列；ii)TGF
‑
β多肽序列；iii)掩蔽多肽序列，所述掩蔽多肽序列任选地包含TGF
‑
β受体多肽序列或抗TGF
‑
β多肽序列；iv)任选地，一个或多个独立选择的MOD多肽序列；以及v)任选地，一个或多个独立选择的接头多肽序列；包含这些元件的构建体统称为“掩蔽的TGF
‑
β构建体”，其中所述掩蔽多肽序列与所述TGF
‑
β多肽序列彼此结合。2.如权利要求1所述的掩蔽的TGF
‑
β构建体，其中所述第一多肽以从N末端至C末端的顺序包含：i)所述支架多肽序列、所述掩蔽多肽序列和所述TGF
‑
β多肽序列；ii)第一MOD多肽序列、所述支架多肽序列、所述掩蔽多肽序列和所述TGF
‑
β多肽序列；或iii)第一独立选择的MOD多肽序列、第二独立选择的MOD多肽序列、所述支架多肽序列、所述掩蔽多肽序列和所述TGF
‑
β多肽序列；其中所述掩蔽的TGF
‑
β构建体任选地包含一个或多个独立选择的接头多肽序列。3.如权利要求1或权利要求2所述的掩蔽的TGF
‑
β构建体，其中所述支架多肽包含二聚化序列，任选地其中所述支架多肽包含种间二聚化序列。4.如权利要求1
‑
3中任一项所述的掩蔽的TGF
‑
β构建体，其还包含第二多肽，所述第二多肽与所述第一多肽二聚化以形成掩蔽的TGF
‑
β复合物异二聚体；其中所述第二多肽包含：i)支架多肽序列；ii)TGF
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β多肽序列；iii)掩蔽多肽序列，所述掩蔽多肽序列任选地包含TGF
‑
β受体多肽序列或抗TGF
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β多肽序列；iv)任选地，一个或多个独立选择的MOD多肽序列；以及v)任选地，一个或多个独立选择的接头多肽序列。5.如权利要求4所述的掩蔽的TGF
‑
β构建体，其中所述第一多肽包含支架多肽，所述支架多肽包含种间二聚化序列，其中所述第二多肽包含支架多肽序列，所述支架多肽序列包含所述第一多肽的所述种间结合序列的对应种间二聚化序列；并且其中所述种间结合序列与所述对应种间结合序列在所述异二聚体中彼此相互作用。6.一种TGF
‑
β复合物，其包含第一多肽和第二多肽作为异二聚体，其中：(i)所述第一多肽包含a)包含种间二聚化序列的支架多肽序列，b)掩蔽多肽序列，所述掩蔽多肽序列任选地包含TGF
‑
β受体多肽序列或抗TGF
‑
β多肽序
列，c)任选地，一个或多个独立选择的MOD多肽序列，以及d)任选地，一个或多个独立选择的接头多肽序列；并且(ii)所述第二多肽包含a)支架多肽序列，所述支架多肽序列包含所述第一多肽中的所述种间二聚化序列的对应种间二聚化序列，b)TGF
‑
β多肽序列，c)任选地，一个或多个独立选择的MOD多肽序列，以及d)任选地，一个或多个独立选择的接头多肽序列；包含这些元件的复合物统称为“掩蔽的TGF
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β复合物”，其中所述掩蔽多肽序列与所述TGF
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β多肽序列彼此结合；其中所述种间结合序列与所述对应种间结合序列在所述异二聚体中彼此相互作用(例如，共价或非共价结合)；并且其中所述掩蔽的TGF
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β第一多肽和/或第二多肽任选地包含一个或多个独立选择的接头多肽序列。7.如权利要求6所述的掩蔽的TGF
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β复合物异二聚体，其中：所述第一多肽从N末端至C末端包含，a)一个或两个(或更多个)独立选择的MOD序列、包含所述种间二聚化序列的所述支架多肽序列和所述掩蔽多肽序列；或b)包含种间二聚化...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗纳德，
申请(专利权)人：库尔生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：