T细胞调节性多聚体多肽及其使用方法技术

本公开提供了变体免疫调节多肽，以及包含所述变体免疫调节肽的融合多肽。本公开提供了T细胞调节性多聚体多肽，以及包含所述T细胞调节性多聚体多肽的组合物，其中所述T细胞调节性多聚体多肽包含本公开的变体免疫调节多肽。本公开提供了包含编码所述T细胞调节性多聚体多肽的核苷酸序列的核酸，以及包含所述核酸的宿主细胞。本公开提供了调节T细胞的活性的方法；所述方法包括使所述T细胞与本公开的T细胞调节性多聚体多肽接触。调节性多聚体多肽接触。

【技术实现步骤摘要】
T细胞调节性多聚体多肽及其使用方法
[0001]本申请是申请号为201780086846.3的中国专利申请的分案申请，原申请是申请日为2017年12月20日的国际申请PCT/US2017/067663的中国国家阶段申请。
[0002]交叉引用
[0003]本申请要求2016年12月22日提交的美国临时专利申请号62/438,272、2017年3月13日提交的美国临时专利申请号62/470,774、2017年9月7日提交的美国临时专利申请号62/555,435以及2017年11月6日提交的美国临时专利申请号62/582,132的权益，所述申请各自以引用的方式整体并入本文。
[0004]以引用的方式并入呈文本文件提供的序列表
[0005]序列表特此提供为2017年11月14日创建的文本文件“CUEB
‑
107WO_SEQ_LISTING_171133_ST25.txt”并且其大小为153KB。所述文本文件的内容以引用的方式整体并入本文。
[0006]引言
[0007]适应性免疫应答涉及存在于T细胞表面上的T细胞受体(TCR)与抗原呈递细胞(APC)表面上非共价呈递的小肽抗原通过主要组织相容性复合物(MHC；在人类中也称为人白细胞抗原(HLA)复合物)接合。这种接合代表了免疫系统靶向机制，并且是T细胞调节(活化或抑制)和效应子功能的必需分子相互作用。在表位特异性细胞靶向后，通过APC上发现的共刺激蛋白与T细胞的对应物共刺激蛋白的接合而活化靶向的T细胞。两种信号
‑
表位/TCR结合和APC共刺激蛋白与T细胞共刺激蛋白的接合
‑
均是驱动T细胞特异性和活化或抑制所必需的。TCR对给定表位有特异性；然而，共刺激蛋白不是表位特异性的，而是通常在所有T细胞或大T细胞亚群上表达。

技术实现思路

[0008]本公开提供了变体免疫调节多肽，以及包含所述变体免疫调节肽的融合多肽。本公开提供了T细胞调节性多聚体多肽，以及包含所述T细胞调节性多聚体多肽的组合物，其中所述T细胞调节性多聚体多肽包含本公开的变体免疫调节多肽。本公开提供了包含编码所述T细胞调节性多聚体多肽的核苷酸序列的核酸，以及包含所述核酸的宿主细胞。本公开提供了调节T细胞的活性的方法；所述方法包括使所述T细胞与本公开的T细胞调节性多聚体多肽接触。
附图说明
[0009]图1A
‑
1D示意性地示出本公开的T细胞调节性多聚体多肽的多种实施方案。在这些实施方案中，二硫键在单独的多肽中存在的MHC(例如，HLA)多肽之间形成。
[0010]图2A
‑
2Q提供野生型人IL
‑
2的氨基酸序列(图2A)；以及变体IL
‑
2多肽的氨基酸序列(图2B
‑
2Q)。
[0011]图3A
‑
3C提供IL
‑
2受体α链(图3A)、β链(图3B)以及γ链(图3C)的氨基酸序列。
[0012]图4A
‑
4C提供免疫球蛋白Fc多肽的氨基酸序列。
[0013]图5A
‑
5C提供人白细胞抗原(HLA)I类重链多肽的氨基酸序列。信号序列加下划线。
[0014]图6提供来自智人(Homo sapiens)(NP_004039.1；SEQ ID NO：95)、黑猩猩(Pan troglodytes)(NP_001009066.1；SEQ ID NO：96)、猕猴(Macaca mulatta)(NP_001040602.1；SEQ ID NO：97)、黄牛(Bos Taurus)(NP_776318.1；SEQ ID NO：98)以及小家鼠(Mus musculus)(NP_033865.2；SEQ ID NO：99)的β
‑
2微球蛋白(β2M)前体(即，包括前导序列)的多重氨基酸序列比对。氨基酸1
‑
20是信号肽。
[0015]图7A
‑
7B示出在瞬时转染后本公开的IL
‑
2/synTac(“Cue
‑
IL
‑2‑
a”和Cue
‑
IL
‑2‑
b”)的产生。图7A示出未纯化的产率；图7B示出纯化的产物。
[0016]图8A
‑
8B示出本公开的IL
‑
2/synTac的产生，其中IL
‑
2多肽存在于轻链(具有MHC I类分子的轻链(例如β2M)的多肽链)或重链(具有MHC I类分子的重链的多肽链)上。
[0017]图9示出IL
‑
2/syn
‑
Tac的表达水平，其中IL
‑
2是野生型(wt)或包含F42A、D20K、Q126A、E15A、Y45A和H16A的各种组合。
[0018]图10示出本公开的IL
‑
2/synTac的表达，其中IL
‑
2以一个拷贝(1X)、两个拷贝(2X)或三个拷贝(3X)存在于synTac中。
[0019]图11示出本公开的IL
‑
2/synTac对抗原特异性CD8
+
T细胞和非特异性CD8
+
T细胞的体外刺激，其中包含F42A和H16A取代的IL
‑
2变体以两个拷贝存在于synTac中。
[0020]图12示出IL
‑
2/synTac与特异性(淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒；LCMV)或非特异性(OT1；识别卵白蛋白)CD8
+
T细胞的结合。
[0021]图13示出抗原特异性(LCMV)或非特异性(BL6)CD8
+
T细胞中的IL
‑
2/synTac介导的信号传导。
[0022]图14A
‑
14F示出在各种IL
‑
2/synTac浓度下用本公开的IL
‑
2/synTac刺激CD8
+
抗原特异性(LCMV)或非特异性(BL6)细胞后磷酸信号转导和转录活化因子5(pSTAT5)阳性细胞的百分比。
[0023]图15示出本公开的IL
‑
2/synTac的体内活性。左图示出在施用磷酸盐缓冲盐水(PBS)、重组IL
‑
2(rIL
‑
2)或本公开的IL
‑
2/synTac后抗原特异性CD8
+
T细胞数量的倍数变化。右图示出在施用PBS、rIL
‑
2或本公开的IL
‑
2/synTac后的抗原特异性和非抗原特异性应答。
[0024]图16A
‑
16B示出剂量递增(图16A)和施用途径(图16B)效应。
[0025]图17A
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种变体IL
‑
2多肽，其包含与SEQ ID NO：1中列出的具有至少85％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中所述变体IL
‑
2多肽具有相对于SEQ ID NO：1列出的一个或多个氨基酸取代，并且其中所述变体IL
‑
2多肽对包含具有图3A
‑
3C中示出的氨基酸序列的α、β和γ多肽的IL
‑
2受体(IL2R)表现出的结合亲和力与SEQ ID NO：1之一中列出的IL
‑
2氨基酸序列对所述IL2R的结合亲和力相比降低。2.权利要求1所述的变体IL2多肽，其中所述变体包含E15、H16、D20、F42、Y45和Q126中的一个或多个的取代。3.权利要求1或权利要求2所述的变体IL2多肽，其中所述变体免疫调节多肽对所述IL2R表现出的结合亲和力低于SEQ ID NO：1中列出的所述IL2氨基酸序列对所述IL2R表现出的结合亲和力的10％至50％。4.权利要求1
‑
3中任一项所述的变体IL2多肽，其中所述变体包含用Ala、Gly、Val、Ile或Leu进行的F42的取代。5.权利要求1
‑
3中任一项所述的变体IL2多肽，其中所述变体包含F42和D20的取代或F42和H16的取代。6.权利要求1
‑
3中任一项所述的变体IL2多肽，其中所述变体包含F42、D20和Y45的取代；或者其中所述变体包含F42、H16和Q126的取代。7.一种多聚体多肽，其包含：a)第一多肽，所述第一多肽从N
‑
末端至C
‑
末端依次包含：i)表位；ii)第一主要组织相容性复合物(MHC)多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从N
‑
末端至C
‑
末端依次包含：i)第二MHC多肽；以及ii)任选的免疫球蛋白(Ig)Fc多肽或非Ig支架，其中所述多聚体多肽包含一个或多个免疫调节结构域，其中所述一个或多个免疫调节结构域是：A)在所述第一多肽的所述C
‑
末端；B)在所述第二多肽的所述N
‑
末端；C)在所述第二多肽的所述C
‑
末端；或D)在所述第一多肽的所述C
‑
末端且在所述第二多肽的所述N
‑
末...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗纳德，
申请(专利权)人：库尔生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：