结晶性有机聚合物纳米片作为免疫佐剂的应用以及一种免疫制剂制造技术

本发明专利技术涉及免疫技术领域，提供了结晶性有机聚合物纳米片作为免疫佐剂的应用以及一种免疫制剂。本发明专利技术将结晶性有机聚合物纳米片作为免疫佐剂应用，结晶性有机聚合物纳米片具有二维单层片状形貌，通过活性结晶驱动自组装作用得到，可以缓解因无机纳米佐剂在体内富集所引起的毒副作用，对于免疫活性物质具有较高的包裹性和保护性，对机体具有良好的生物安全性、生物相容性、生物降解性；此外，结晶性有机聚合物纳米片易于进行表面修饰，具有结构多样性并可通过聚合物降解来达到对免疫活性物质的控制释放，用于疫苗免疫佐剂可通过促进树突状细胞（DC）的成熟，有效的激活特异性免疫反应，从而促进疫苗的开发，并用于肿瘤免疫治疗。并用于肿瘤免疫治疗。并用于肿瘤免疫治疗。

【技术实现步骤摘要】
结晶性有机聚合物纳米片作为免疫佐剂的应用以及一种免疫制剂
[0001]

[0002]本专利技术涉及生物医用材料领域，具体而言，涉及一种结晶驱动自组装的具有活性生长、外延生长以及刺激免疫细胞成熟并激活特异性免疫反应的结晶性有机聚合物微纳米片作为疫苗免疫佐剂中的应用以及一种免疫制剂。
[0003]
技术介绍

[0004]疫苗作为人类历史上最重要的公共卫生成就之一，自发现以来已成为抵御疾病的重要手段，接种疫苗被认为是预防疾病的最有效方法之一。近几十年来，疫苗在临床和临床前免疫治疗方面取得了重大进展和突破，这对保护人类健康具有重要意义。
[0005]大多数传统疫苗(如灭活病毒疫苗，减活病毒疫苗等)因为存在安全性风险，限制了它们的有效应用。随着生物技术的不断发展，研究人员设计和制备了一些新型疫苗应用于疾病研究中，这些新型疫苗比传统疫苗更安全，副作用更小，但是却存在免疫原性差的问题。而目前在研究如何提高疫苗功效的各种策略中，最受欢迎的方法是选择适当的佐剂。虽然佐剂能对免疫反应起到促进作用，但是佐剂的使用还是会受到免疫应答不理想和各种潜在毒副作用的限制。
[0006]目前，常见的佐剂包括铝佐剂，锰佐剂，硅佐剂，氧化锌，磷酸钙，金纳米颗粒，弗式佐剂等。然而，这类佐剂大多为无机材料，存在一些缺点，包括不易修饰、富集导致的安全问题、诱发副作用、抗原效率低下和不能诱导有效的免疫应答等。
[0007]因此，有必要开发更安全更有效的疫苗佐剂或载体来诱导足够强的抗原特异性体液免疫和细胞免疫。
[0008]
技术实现思路

[0009]基于上述存在的问题，为了克服现有的免疫佐剂诱导免疫应答能力弱和毒副作用较大的缺陷，本专利技术提供了结晶自组装的有机聚合物纳米片作为免疫佐剂的应用及一种免疫制剂。本专利技术将结晶自组装的有机聚合物纳米片作为免疫佐剂使用，可刺激BMDCs等其他免疫细胞的成熟，从而可用于激活特异性免疫反应和肿瘤免疫治疗，提高机体的特异性免疫应答，并具有良好的生物安全性、生物相容性、生物降解性。
[0010]本专利技术的目的通过下述技术方案实现：结晶性有机聚合物纳米片作为免疫佐剂的应用，所述结晶性有机聚合物纳米片具有纳米片结构，该纳米片结构由结晶性聚合物通过活性结晶驱动自组装作用围绕着聚合物晶核在二维方向上进行延伸结晶生长而形成，所述结晶性聚合物为聚己内酯聚合物，包括
聚己内酯嵌段共聚物。
[0011]优选地，所述结晶性有机聚合物纳米片厚度小于20nm，长度为1000~2000nm。
[0012]优选地，所述聚己内酯嵌段共聚物包括PCL
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PDMA、PCL
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PDMAEMA中的至少一种。
[0013]优选地，所述结晶性聚合物还包括PCL均聚物，为聚己内酯嵌段共聚物和PCL均聚物的混合。
[0014]优选地，所述聚合物晶核的材料为聚己内酯嵌段共聚物。
[0015]具体地，所述结晶性有机聚合物纳米片的制备方法为：通过活性结晶驱动自组装作用获得聚合物纳米棒；将所述聚合物纳米棒破碎，获得短棒状的聚合物晶核；通过活性结晶驱动自组装作用使结晶性聚合物围绕着聚合物晶核在二维方向上进行延伸结晶生长而形成平面状的纳米片结构，得到结晶性有机聚合物纳米片。
[0016]在一具体实施方案中，所述聚合物晶核的材料为PCL
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PDMA共聚物，所述结晶性聚合物为PCL均聚物和PCL
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PDMA共聚物的混合，其中，PCL均聚物用于增加结晶作用力，加快结晶速度，保持较高的结晶效率，其制备方法具体包括如下步骤：步骤1、称取PCL
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PDMA粉末，溶于无水乙醇中，70℃油浴加热3小时后再冷却，溶液中存在熔融的无定形胶束、自由的聚合物单链、少部分结晶性胶束，聚合物单链在结晶性胶束上外延生长，经过加热和冷却之后，形成了一维的结晶性有机聚合物纳米棒状胶束。
[0017]步骤2、将步骤1中得到的有机聚合物纳米棒稀释，随后在干冰丙酮状态下超声，得到短的有机聚合物纳米短棒。
[0018]步骤3、将步骤2中得到的有机聚合物纳米短棒作为晶核种子，加入PCL均聚物和PCL
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PDMA共聚物所制得的混合体系，加入后立即剧烈摇晃，得到结晶性有机聚合物纳米片。
[0019]在另一具体实施方案中，所述结晶性聚合物为PCL均聚物和PCL
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PDMAEMA共聚物的混合，所得到的结晶性有机聚合物纳米片为正电结晶性有机聚合物纳米片，其制备方法具体包括如下步骤：步骤1、称取PCL
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PDMA粉末，溶于无水乙醇中，70℃油浴加热3小时后再冷却，溶液中存在熔融的无定形胶束、自由的聚合物单链、少部分结晶性胶束，聚合物单链在结晶性胶束上外延生长，经过加热和冷却之后，形成了一维的结晶性有机聚合物纳米棒状胶束。
[0020]步骤2、将步骤1中得到的有机聚合物纳米棒稀释，随后在干冰丙酮状态下超声，得到短的有机聚合物纳米短棒。
[0021]步骤3、将步骤2中得到的有机聚合物纳米短棒作为晶核种子，加入PCL均聚物和PCL
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PDMA共聚物所制得的混合体系，加入后立即剧烈摇晃，得到结晶性有机聚合物纳米片。
[0022]该方案中，所制备得到的正电结晶性有机聚合物纳米片在中性pH环境中带正电荷。因此，该纳米片能够通过静电作用吸引包裹抗原，并通过质子海绵效应从内含体/溶酶体逃脱以促进交叉呈递和细胞免疫。
[0023]本专利技术还提供了一种免疫制剂，包括抗原和免疫佐剂，所述免疫佐剂为上述方案所述应用中的结晶性有机聚合物纳米片；所述免疫佐剂和所述抗原的质量比为100：10~100。
[0024]具体地，所述抗原可以为抗原蛋白卵清蛋白OVA以外，还可以为肿瘤疾病相关特异性抗原（ E7, MUC1）等。
[0025]本专利技术还提供上述免疫制剂的制备方法，通过将所述抗原和免疫佐剂在溶剂中混
合得到免疫制剂。具体包括如下步骤：步骤1、将抗原和结晶性有机聚合物纳米片分别溶于溶剂中，分别配成相应的溶液。
[0026]步骤2、将抗原溶液与结晶性有机聚合物纳米片在室温下充分搅拌，制备得到免疫制剂。
[0027]具体地，上述步骤1中的溶剂为水、PBS、HEPES或生理盐水的任一种。
[0028]本专利技术具有以下有益效果：本专利技术提供了结晶性有机聚合物纳米片作为免疫佐剂的应用，该结晶性有机聚合物纳米片具有纳米片结构，由结晶性聚合物通过活性结晶驱动自组装作用围绕着聚合物晶核在二维方向上进行延伸结晶生长而形成，该结晶性有机聚合物纳米片易于修饰，可携带抗原、激动剂等免疫成分，相对于现有的疫苗免疫佐剂，具有良好的生物相容性、生物安全性、生物降解性，且该结晶性有机聚合物纳米片通过结晶驱动自组装和活性结晶驱动自组装作用形成，形貌可控，尺寸大小均一，结构较为稳定，具有较高的抗原负载率，还可实现有效的特异性免疫应答效果，能够更有效地促进抗原特异性体液免疫和细胞免疫应答，包括显著本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.结晶性有机聚合物纳米片作为免疫佐剂的应用，其特征在于，所述结晶性有机聚合物纳米片具有纳米片结构，该纳米片结构由结晶性聚合物通过活性结晶驱动自组装作用围绕着聚合物晶核在二维方向上进行延伸结晶生长而形成，所述结晶性聚合物为聚己内酯聚合物。2.根据权利要求1所述的结晶性有机聚合物纳米片作为免疫佐剂的应用，其特征在于，所述结晶性有机聚合物纳米片厚度小于20nm，长度为1000~2000nm。3.根据权利要求1所述的结晶性有机聚合物纳米片作为免疫佐剂的应用，其特征在于，所述结晶性聚合物为聚己内酯嵌段共聚物，所述聚己内酯嵌段共聚物包括PCL
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PDMA、PCL
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PDMAEMA中的至少一种。4.根据权利要求1所述的结晶性有机聚合物纳米片作为免疫佐剂的应用，其特征在于，所述结晶性聚合物为PCL均聚物和聚己内酯嵌段共聚物的混合。5.根据权利要求1所述的结晶性有机聚合物纳米片作为免疫佐剂的应用，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢雨洁，程辉，余美花，陈雨，吴叶，冯炜，代新月，
申请(专利权)人：上海大学，
类型：发明
国别省市：