Aβ1-42和Aβ1-40检测用联检试剂卡及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了Aβ1

【技术实现步骤摘要】
A
β1‑
42和A
β1‑
40检测用联检试剂卡及其制备方法与应用


[0001]本专利技术涉及免疫诊断检测
，尤其涉及一种Aβ1
‑
42和Aβ1
‑
40检测用联检试剂卡及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]目前，对于阿尔茨海默病的诊断，主要依据临床症状、脑部影像学、认知评估量表的评分以及分子生物标志物的改变。其中，脑脊液中的生物标志物可以直接反映阿尔茨海默病患者的神经病理损伤情况，从而为阿尔茨海默病的诊断提供有力的依据。
[0003]人β淀粉样蛋白1
‑
42(简称Aβ1
‑
42)和人β淀粉样蛋白1
‑
40(简称Aβ1
‑
40)均是目前被广泛认可的阿尔茨海默病的生物标志物。研究发现，Aβ1
‑
42在阿尔茨海默病患者的脑脊液中水平显著下降，其诊断阿尔茨海默病的灵敏度达80％，且测定Aβ1
‑
42和Aβ1
‑
40之间的比值可以显著提高对阿尔茨海默病诊断的准确性。因此，在进行阿尔茨海默病诊断时，应当联合检测多种生物标志物。
[0004]现有技术中，对Aβ1
‑
42和Aβ1
‑
40进行联合检测大多采用单独检测的模式，即先单独检测出Aβ1
‑
42的含量和Aβ1
‑
40的含量，之后再计算两者之间的比值。采用单独检测的模式存在两方面的不足：一方面，容易造成检测样本的浪费；另一方面，可能导致Aβ1
‑
42的检测结果和Aβ1
‑
40的检测结果之间不具有相关性。然而，将检测Aβ1
‑
42的项目和检测Aβ1
‑
40的项目结合在同一个检测试剂卡中，通常存在着竞争反应，从而导致检测结果不准确。
[0005]综上所述，急需一种检测时灵敏度高、竞争反应少、检测结果准确且能够实现快速检测的Aβ1
‑
42和Aβ1
‑
40检测用联检试剂卡。

技术实现思路

[0006]为了解决上述至少一种技术问题，开发一种检测时灵敏度高、竞争反应少、检测结果准确且能够实现快速检测的Aβ1
‑
42和Aβ1
‑
40检测用联检试剂卡，本专利技术提供一种Aβ1
‑
42和Aβ1
‑
40检测用联检试剂卡及其制备方法与应用。
[0007]一方面，本专利技术提供的一种Aβ1
‑
42和Aβ1
‑
40检测用联检试剂卡的制备方法，具体包括如下步骤：预处理荧光标记垫，具体是：分别向PE
‑
SA
‑
生物素
‑
抗Aβ1
‑
42抗体、PE
‑
SA
‑
生物素
‑
抗Aβ1
‑
40抗体以及PE
‑
SA
‑
生物素
‑
羊抗鸡IgY中加入生物素溶液，进行封闭处理，后脱盐纯化并混合；喷至玻璃纤维素膜上，干燥，得荧光标记垫；其中，混合时，抗Aβ1
‑
42抗体、抗Aβ1
‑
40抗体以及羊抗鸡IgY之间的质量比为4～6:2～4:1；预处理硝酸纤维素膜，具体是：将Aβ1
‑
42抗体和Aβ1
‑
40抗体分别用第一缓冲液稀释至0.8～1.2mg/mL和0.5～1mg/mL，将鸡IgY抗体用第二缓冲液稀释至0.8～1.2mg/mL，分别喷涂在硝酸纤维素膜上，干燥制得第一检测线、第二检测线以及质控线；拼装联检试剂卡，具体是：将样品垫、预处理后的荧光标记垫、预处理后的硝酸纤维素膜以及吸水垫拼装在底板上，得到联检试剂卡。
[0008]通过采用上述技术方案，本专利技术提供的制备方法制得的联检试剂卡采用荧光免疫分析技术，通过在荧光标记垫上包被PE
‑
SA
‑
生物素
‑
抗Aβ1
‑
42抗体和PE
‑
SA
‑
生物素
‑
抗Aβ1
‑
40抗体，能够极大提高荧光免疫反应的信号强度和灵敏度，使得低含量的Aβ1
‑
42和Aβ1
‑
40在进行免疫结合时，也能产生很强的荧光信号；同时，采用R
‑
藻红蛋白标记的链霉亲和素(简称PE
‑
SA)作为荧光标记物，能够克服选用荧光微球作为荧光标记物时造成的灵敏度较低的问题，从而提高联检试剂卡的灵敏度，实现对Aβ1
‑
42和Aβ1
‑
40快速且准确的联合检测。
[0009]可选的，所述PE
‑
SA
‑
生物素
‑
抗Aβ1
‑
42抗体由如下方法制备而成：取脱盐纯化后的抗Aβ1
‑
42抗体，加入至生物素溶液中，得到生物素
‑
抗Aβ1
‑
42抗体；其中，生物素与抗Aβ1
‑
42抗体的质量比为1:8～12；取R
‑
藻红蛋白标记的链霉亲和素，加入至脱盐纯化后的生物素
‑
抗Aβ1
‑
42抗体中，得到PE
‑
SA
‑
生物素
‑
抗Aβ1
‑
42抗体；其中，生物素与R
‑
藻红蛋白标记的链霉亲和素的质量比为1:5～7；所述PE
‑
SA
‑
生物素
‑
抗Aβ1
‑
40抗体由如下方法制备而成：取脱盐纯化后的抗Aβ1
‑
40抗体，加入至生物素溶液中，得到生物素
‑
抗Aβ1
‑
40抗体；其中，生物素与抗Aβ1
‑
40抗体的质量比为1:8～12；取R
‑
藻红蛋白标记的链霉亲和素，加入至脱盐纯化后的生物素
‑
抗Aβ1
‑
40抗体中，得到PE
‑
SA
‑
生物素
‑
抗Aβ1
‑
40抗体；其中，生物素与R
‑
藻红蛋白标记的链霉亲和素的质量比为1:5～7；所述PE
‑
SA
‑
生物素
‑
羊抗鸡IgY由如下方法制备而成：取脱盐纯化后的羊抗鸡IgY，加入至生物素溶液中，得到生物素
‑
羊抗鸡IgY；其中，生物素与羊抗鸡IgY的质量比为1:8～12；取R
‑
藻红蛋白标记的链霉亲和素，加入至脱盐纯化后的生物本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种Aβ1
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42和Aβ1
‑
40检测用联检试剂卡的制备方法，其特征在于，具体包括如下步骤：预处理荧光标记垫（3），具体是：分别向PE
‑
SA
‑
生物素
‑
抗Aβ1
‑
42抗体、PE
‑
SA
‑
生物素
‑
抗Aβ1
‑
40抗体以及PE
‑
SA
‑
生物素
‑
羊抗鸡IgY中加入生物素溶液，进行封闭处理，后脱盐纯化并混合；喷至玻璃纤维素膜上，干燥，得荧光标记垫（3）；其中，混合时，抗Aβ1
‑
42抗体、抗Aβ1
‑
40抗体以及羊抗鸡IgY之间的质量比为4~6:2~4:1；预处理硝酸纤维素膜（4），具体是：将Aβ1
‑
42抗体和Aβ1
‑
40抗体分别用第一缓冲液稀释至0.8~1.2mg/mL和0.5~1mg/mL，将鸡IgY抗体用第二缓冲液稀释至0.8~1.2mg/mL，分别喷涂在硝酸纤维素膜（4）上，干燥制得第一检测线（6）、第二检测线（7）以及质控线（8）；拼装联检试剂卡，具体是：将样品垫（2）、预处理后的荧光标记垫（3）、预处理后的硝酸纤维素膜（4）以及吸水垫（5）拼装在底板（1）上，得到联检试剂卡。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述PE
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SA
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生物素
‑
抗Aβ1
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42抗体由如下方法制备而成：取脱盐纯化后的抗Aβ1
‑
42抗体，加入至生物素溶液中，得到生物素
‑
抗Aβ1
‑
42抗体；其中，生物素与抗Aβ1
‑
42抗体的质量比为1:8~12；取R
‑
藻红蛋白标记的链霉亲和素，加入至脱盐纯化后的生物素
‑
抗Aβ1
‑
42抗体中，得到PE
‑
SA
‑
生物素
‑
抗Aβ1
‑
42抗体；其中，生物素与R
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藻红蛋白标记的链霉亲和素的质量比为1:5~7；所述PE
‑
SA
‑
生物素
‑
抗Aβ1
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40抗体由如下方法制备而成：取脱盐纯化后的抗Aβ1
‑
40抗体，加入至生物素溶液中，得到生物素
‑
抗Aβ1
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40抗体；其中，生物素与抗Aβ1
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40抗体的质量比为1:8~12；取R
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藻红蛋白标记的链霉亲和素，加入至脱盐纯化后的生物素
‑
抗Aβ1
‑
40抗体中，得到PE
‑
SA
‑
生物素
‑
抗Aβ1
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40抗体；其中，生物素与R
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藻红蛋白标记的链霉亲和素的质量比为1:5~7；所述PE
‑
SA
‑
生物素
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羊抗鸡IgY由如下方法制备而成：取脱盐纯化后的羊抗鸡IgY，加入至生物素溶液中，得到生物素
‑
羊抗鸡IgY；其中，生物素与羊抗鸡IgY的质量比为1:8~12；取R
‑
藻红蛋白标记的链霉亲和素，加入至脱盐纯化后的生物素
‑
羊抗鸡IgY中，得到PE
‑
SA
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生物素
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羊抗鸡IgY；其中，生物素与R
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藻红蛋白标记的链霉亲和素的质量比为1:5~7...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄丽青，赖楚明，
申请(专利权)人：深圳市天大生物医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：