一种检测人类SLCO1B1基因多态性的引物探针组、试剂盒及检测方法和应用技术

本申请公开了一种检测人类SLCO1B1基因多态性的引物探针组、试剂盒及检测方法和应用，所述一种检测人类SLCO1B1基因多态性的引物探针组包括用于检测人类SLCO1B1基因388位点多态性的引物探针组A、用于检测人类SLCO1B1基因521位点多态性的引物探针组B以及用于检测人类Actin基因的内标Actin引物探针组C；同时，本申请提供一种检测人类SLCO1B1基因多态性的检测试剂盒，所述检测试剂盒包括检测人类SLCO1B1基因多态性的引物探针组。本申请优点是，本申请试剂盒能够实现对人类SLCO1B1基因多态性的快速检测，且操作简单，灵敏准确。灵敏准确。

【技术实现步骤摘要】
一种检测人类SLCO1B1基因多态性的引物探针组、试剂盒及检测方法和应用


[0001]本申请属于一种生物医学领域临床检测技术中的核酸检测
，具体是涉及到一种检测人类SLCO1B1基因多态性的引物探针组、试剂盒及检测方法和应用

技术介绍

[0002]辛伐他汀(Simvastatin)是一种口服降血脂药物，可用于治疗高脂血症、冠心病等患者。辛伐他汀可降低正常的和升高的低密度脂蛋白胆固醇水平，还可降低极低密度脂蛋白和甘油三酯，并升高高密度脂蛋白胆固醇。辛伐他汀除了预防心血管疾病，还能够改善肝微血管功能障碍，延缓纤维化现状，预防低血容量性休克后的肝损伤等。
[0003]目前认为辛伐他汀是改善肝功能最有效的他汀类药物。辛伐他汀相关的肌肉不良反应包括肌病、横纹肌溶解等。导致这些不良反应的原因中，SLCO1B1基因多态性是导致辛伐他汀肌肉不良反应个体化差异的主要原因之一。与野生型个体相比，携带SLCO1B1功能异常基因的个体的肝细胞药物摄取受损，导致药物血浆暴露显著增加，可能增加肌病的发生风险。因此对SLCO1B1基因多态性的研究显得尤为重要。
[0004]目前对于SLCO1B1基因已有的检测方法，在推广上或多或少都存在如试剂检测成本高，操作复杂，易产生污染，产生一定的假阴性和假阳性等缺陷。其中直接测序法，虽然是SNP位点分析的金标准，但该检测方法受到测序仪器的限制，测序仪器昂贵，推广困难。另外直接测序对模板量要求高，通常需要通过PCR扩增富集目的片段后，进行测序，操作复杂，周期长，且为开管操作，容易造成污染。
[0005]基因芯片杂交法，操作步骤烦琐，易出错，实验耗时4个小时以上并且PCR结束后需开管操作，易造成污染的问题。此外，该检测方法用肉眼来对结果进行判读，导致准确性会受到影响，导致检测结果中出现假阳性、假阴性的判读结果。
[0006]PCR探针分型法虽然具有操作简单，分型准确，全程闭管操作，检测周期短等特点，是目前比较主流的SNP分型方法。但是目前市面上已有通过CFDA认证的成型检测试剂盒，其产品扩增曲线很容易产生翘尾现象，导致假阳性的产生。
[0007]PCR
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RFLP法将PCR与限制性酶切相结合的传统方法，由于酶切操作繁琐及污染风险已经很少在临床使用。
[0008]因此，急需一种操作简便、灵敏准确、成本低且能实现快速检测人类SLCO1B1基因多态性的检测方法。

技术实现思路

[0009]为了解决上述至少一种技术问题，本申请提供一种检测人类SLCO1B1基因多态性的引物探针组、试剂盒及检测方法和应用。
[0010]第一方面，本申请提供一种检测人类SLCO1B1基因多态性的引物探针组，包括用于检测人类SLCO1B1基因388位点多态性的引物探针组A、用于检测人类SLCO1B1基因521位点
多态性的引物探针组B以及内标Actin基因的引物探针组C；其中，所述用于检测人类SLCO1B1基因388位点多态性的引物探针组A包括：上游引物SLCO1B1
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F：其基因序列如SEQ ID No.1所示；下游引物SLCO1B1
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R：其基因序列如SEQ ID No.2所示；荧光探针SLCO1B1
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P：其基因序列如SEQ ID No.3所示；所述用于检测人类SLCO1B1基因521位点多态性的引物探针组B包括：上游引物SLCO1B1
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F：其基因序列如SEQ ID No.4所示；下游引物SLCO1B1
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R：其基因序列如SEQ ID No.5所示；荧光探针SLCO1B1
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521
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P：其基因序列如SEQ ID No.6所示；所述内标Actin基因的引物探针组C包括：上游引物Actin
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F：其基因序列如SEQ ID No.7所示；下游引物Actin
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R：其基因序列如SEQ ID No.8所示；荧光探针Actin
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P：其基因序列如SEQ ID No.9所示；所述荧光探针SLCO1B1
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P、荧光探针SLCO1B1
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P、荧光探针Actin
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P中，5'端方向一侧连接碱基携带荧光报告基团；3'端方向一侧连接碱基携带荧光淬灭基团。
[0011]通过采用上述技术方案，本申请提高了检测精确度。其机理在于：本申请首先针对人类SLCO1B1基因设计了特异性强的引物探针组，包括用于检测人类SLCO1B1基因388位点多态性的上游引物SLCO1B1
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F、下游引物SLCO1B1
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R、荧光探针SLCO1B1
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P；用于检测人类SLCO1B1基因521位点多态性的上游引物SLCO1B1
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F、下游引物SLCO1B1
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R以及荧光探针SLCO1B1
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P；同时设计了检测人类Actin基因的引物探针组，包括上游引物Actin
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F、下游引物Actin
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R、荧光探针Actin
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P。在本申请中，检测人类Actin基因的引物探针组为内标引物探针组，其作用为，检测整个反应体系是否正常。
[0012]可选的，所述荧光探针SLCO1B1
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P中，5'端方向一侧连接碱基，携带荧光报告基团VIC，3'端方向一侧连接碱基，携带荧光淬灭基团BQ145；所述荧光探针SLCO1B1
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P中，5'端方向一侧连接碱基携带荧光报告基团FAM，3'端方向一侧连接碱基携带荧光淬灭基团BQ1 55；所述荧光探针Actin
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P中，5'端方向一侧连接碱基携带荧光报告基团ROX，3'端方向一侧连接碱基携带荧光淬灭基团MGB。
[0013]第二方面，本申请提供了检测人类SLCO1B1基因多态性的引物探针组在生物检测领域以及制备检测人类SLCO1B1基因多态性的检测产品领域的应用。
[0014]第三方面，本申请提供了一种用于检测人类SLCO1B1基因多态性的检测试剂盒，所述试剂盒包括两种PCR反应液，分别为：用于检测人类SLCO1B1基因388位点多态性的PCR反应液和用于检测人类SLCO1B1基因521位点多态性的PCR反应液；其中，所述用于检测人类SLCO1B1基因388位点多态性的PCR反应液包括SEQ ID No.1、SEQ 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测人类SLCO1B1基因多态性的引物探针组，其特征在于，包括用于检测人类SLCO1B1基因388位点多态性的引物探针组A、用于检测人类SLCO1B1基因521位点多态性的引物探针组B以及内标Actin基因的引物探针组C；其中，所述用于检测人类SLCO1B1基因388位点多态性的引物探针组A包括：上游引物SLCO1B1
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F：其基因序列如SEQ ID No.1所示；下游引物SLCO1B1
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R：其基因序列如SEQ ID No.2所示；荧光探针SLCO1B1
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P：其基因序列如SEQ ID No.3所示；所述用于检测人类SLCO1B1基因521位点多态性的引物探针组B包括：上游引物SLCO1B1
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F：其基因序列如SEQ ID No.4所示；下游引物SLCO1B1
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521
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R：其基因序列如SEQ ID No.5所示；荧光探针SLCO1B1
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521
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P：其基因序列如SEQ ID No.6所示；所述内标Actin基因的引物探针组C包括：上游引物Actin
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F：其基因序列如SEQ ID No.7所示；下游引物Actin
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R：其基因序列如SEQ ID No.8所示；荧光探针Actin
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P：其基因序列如SEQ ID No.9所示；所述荧光探针SLCO1B1
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P、荧光探针SLCO1B1
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P、荧光探针Actin
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P中，5' 端方向一侧连接碱基携带荧光报告基团；3' 端方向一侧连接碱基携带荧光淬灭基团。2.根据权利要求1所述的检测人类SLCO1B1基因多态性的引物探针组，其特征在于，所述荧光探针SLCO1B1
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P中，5' 端方向一侧连接碱基，携带荧光报告基团VIC，3' 端方向一侧连接碱基，携带荧光淬灭基团BQ145；所述荧光探针SLCO1B1
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521
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P中，5' 端方向一侧连接碱基携带荧光报告基团FAM，3' 端方向一侧连接碱基携带荧光淬灭基团BQ1 55；所述荧光探针Actin
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P中，5' 端方向一侧连接碱基携带荧光报告基团ROX，3' 端方向一侧连接碱基携带荧光淬灭基团MGB。3.一种权利要求1所述的检测人类SLCO1B1基因多态性的引物探针组在生物检测领域以及制备检测人类SLCO1B1基因多态性的检测产品领域的应用。4.一种用于检测人类SLCO1B1基因多态性的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括两种PCR反应液，分别为：用于检测人类SLCO1B1基因388位点多态性的PCR反应液和用于检测人类SLCO1B1基因521位点多态性的PCR反应液；其中，所述用于检测人类SLCO1B1基因388位点多态性的PCR反应液包括权利要求1所述的SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.7、SEQ ID No.8以及SEQ ID No.9；所述用于检测人类SLCO1B1基因521位点多态性的PCR反应液包括权利要求1所述的SEQ ID No.4、SEQ ID No.5、SEQ ID No.6、SEQ ID No.7、SEQ ID No.8、SEQ ID No.9。5.根据权利要求4所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤兴良，赖楚明，
申请(专利权)人：深圳市天大生物医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：