肝素结合蛋白定量检测的样品垫、铺制方法及试剂盒技术

本发明专利技术提供了一种肝素结合蛋白定量检测的样品垫、铺制方法，所述样品垫上铺制有荧光微球偶联的鼠抗人HBP单克隆抗体和荧光微球偶联的兔IgG。本发明专利技术提供了一种肝素结合蛋白定量检测的试剂盒，包括试剂条，所述试剂条包括上述的肝素结合蛋白定量检测的样品垫，还包括吸水纸和硝酸纤维素膜；所述样品垫和所述吸水纸分别位于所述硝酸纤维素膜的两端，所述硝酸纤维素膜上自所述样品垫向所述吸水纸方向依次包被有检测T线和质控C线。本发明专利技术通过将荧光微球固相于样本垫上的方式，便于荧光微球均匀有效的释放，从而实现对肝素结合蛋白的精准检测；本申请既能简化工艺、节约成本，又能缩短反应时间，提高试剂盒检测精密度。提高试剂盒检测精密度。提高试剂盒检测精密度。

【技术实现步骤摘要】
肝素结合蛋白定量检测的样品垫、铺制方法及试剂盒


[0001]本专利技术涉及免疫学检测领域，具体地，涉及一种肝素结合蛋白定量检测的样品垫、铺制方法及试剂盒。

技术介绍

[0002]目前，市面上检测HBP的检测方法学主要有免疫比浊法、荧光免疫层析半定量法等方法。
[0003]现有公开号为CN113189341A的中国专利，其公开了一种用于检测样品中肝素结合蛋白的试剂盒。所述试剂盒包括：用于预处理样品的预处理试剂和用于识别肝素结合蛋白的识别试剂，所述预处理试剂包括溶血剂和电解质，其中，所述溶血剂是浓度为1
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3mg/mL的TritonX
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100，所述电解质是浓度为30
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60mg/mL的氯化钠，并且所述预处理试剂的pH值为5.5
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6.5。该专利的免疫比浊方法存在操作复杂、耗时长等缺点，并且不能进行床旁检测。
[0004]现有公开号为CN113484525A的中国专利，其公开了一种肝素结合蛋白(HBP)时间分辨荧光免疫层析半定量检测试纸条，包括试纸条本体，所述试纸条本体根据时间分辨荧光微球偶联的HBP标记抗体进行检测；所述试纸条本体两端分别设有检测线和质控线，所述检测线的点样成分为与所述时间分辨荧光微球偶联的HBP标记抗体配对的HBP抗体，所述质控线的点样成分为羊抗小鼠IgG。该专利的荧光免疫层析半定量法具有准确性和稳定性不高的局限性。
[0005]专利技术人认为需要提供一种既能简化工艺、节约成本，又能缩短反应时间、提高试剂盒检测精密度的肝素结合蛋白定量检测的试剂盒。

技术实现思路

[0006]针对现有技术中的缺陷，本专利技术的目的是提供一种肝素结合蛋白定量检测的样品垫、铺制方法及试剂盒。
[0007]根据本专利技术提供的一种肝素结合蛋白定量检测的样品垫,包括样品垫，所述样品垫上铺制有荧光微球偶联的鼠抗人HBP单克隆抗体和荧光微球偶联的兔IgG。
[0008]优选地，所述荧光微球偶联的鼠抗人HBP单克隆抗体的浓度为0.1mg/mL～1mg/mL，所述荧光微球偶联的兔IgG的浓度为0.1mg/mL～0.5mg/mL。
[0009]优选地，所述荧光微球包括时间分辨荧光微球、胶乳微球、荧光素、量子点。
[0010]根据本专利技术提供的一种铺制所述的肝素结合蛋白定量检测的样品垫的方法，包括以下步骤：
[0011]步骤S1，使用荧光微球标记鼠抗人HBP单克隆抗体形成所述荧光微球偶联的鼠抗人HBP单克隆抗体，使用荧光微球标记兔IgG形成所述荧光微球偶联的兔IgG；
[0012]步骤S2，使用工作液将所述荧光微球偶联的鼠抗人HBP单克隆抗体和所述荧光微球偶联的兔IgG分别进行稀释；
[0013]步骤S3，将稀释后的所述荧光微球偶联的鼠抗人HBP单克隆抗体和所述荧光微球
偶联的兔IgG铺制于所述样品垫上，铺制完成后真空干燥箱抽真空。
[0014]优选地，所述步骤S1中的所述荧光微球偶联的鼠抗人HBP单克隆抗体的标记方法包括以下步骤：
[0015]步骤A1，吸取荧光微球，加入尖底离心管中；
[0016]步骤A2，加入MES缓冲液和超纯水,混匀；
[0017]步骤A3，加入EDC和NHS，混匀后室温避光旋摇；
[0018]步骤A4，离心，去上清，加入MES缓冲液重悬荧光微球，并用移液器吹打混匀，超声分散；
[0019]步骤A5，加入鼠抗人HBP单克隆抗体，吹打混匀后室温避光旋摇；
[0020]步骤A6，加入乙醇胺，吹打混匀后室温避光旋摇；
[0021]步骤A7，离心，去上清，加入保存液重悬荧光微球偶联的鼠抗人HBP单克隆抗体，并用移液器吹打混匀，超声分散，避光保存。
[0022]优选地，所述步骤S1中的所述荧光微球偶联的兔IgG的标记方法包括以下步骤：
[0023]步骤B1，吸取荧光微球，加入尖底离心管中；
[0024]步骤B2，加入MES缓冲液和超纯水,混匀；
[0025]步骤B3，加入EDC和NHS，混匀后室温避光旋摇；
[0026]步骤B4，离心，去上清，加入MES缓冲液重悬荧光微球，并用移液器吹打混匀，超声分散；
[0027]步骤B5，加入兔IgG，吹打混匀后室温避光旋摇；
[0028]步骤B6，加入乙醇胺，吹打混匀后室温避光旋摇；
[0029]步骤B7，离心，去上清，加入保存液重悬荧光微球偶联的兔IgG，并用移液器吹打混匀，超声分散，避光保存。
[0030]优选地，所述工作液中包括蛋白、糖类以及表面活性剂，所述蛋白包括酪蛋白和BSA，所述糖类包括海藻糖，所述表面活性剂包括曲拉通、吐温。
[0031]根据本专利技术提供的一种肝素结合蛋白定量检测的试剂盒，包括试剂条，所述试剂条包括上述的肝素结合蛋白定量检测的样品垫，还包括吸水纸和硝酸纤维素膜；所述样品垫和所述吸水纸分别位于所述硝酸纤维素膜的两端，所述硝酸纤维素膜上自所述样品垫向所述吸水纸方向依次包被有检测T线和质控C线。
[0032]优选地，所述检测T线包被有鼠抗人HBP单克隆抗体，浓度为1～3mg/mL,所述质控C线包被有羊抗兔IgG抗体，浓度为0.5～1mg/mL。
[0033]优选地，所述试剂条底部包括支撑底板。
[0034]与现有技术相比，本专利技术具有如下的有益效果：
[0035]1、本专利技术通过将荧光微球固相于样本垫上，便于荧光微球均匀有效的释放，从而实现对肝素结合蛋白的精准检测；本申请既能简化工艺、节约成本，又能缩短反应时间，提高试剂盒检测精密度。
[0036]2、本专利技术通过通过采用荧光微球进行标记，并且将荧光微球偶联的鼠抗人HBP单克隆抗体和荧光微球偶联的兔IgG铺制于样品垫上而不是固相于独立的结合垫上，降低了生产成本的同时保持了良好的灵敏度和较宽的线性。
[0037]3、本专利技术通过定量客观反映HBP的存在，为临床诊断及疗效观察和预后判断提供
了更有力的实验诊断依据。
附图说明
[0038]通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本专利技术的其它特征、目的和优点将会变得更明显：
[0039]图1为本专利技术主要体现肝素结合蛋白定量检测的试剂盒的结构示意图。
[0040]图中所示：
[0041]样品垫1
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硝酸纤维素膜2
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检测T线3
[0042]质控C线4
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吸水纸5
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支撑底板6
具体实施方式
[0043]下面结合具体实施例对本专利技术进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本专利技术，但不以任何形式限制本专利技术。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术构思的前提下，还可以做出若干变化和改进。这些都属本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肝素结合蛋白定量检测的样品垫，其特征在于，包括样品垫(1)，所述样品垫(1)上铺制有荧光微球偶联的鼠抗人HBP单克隆抗体和荧光微球偶联的兔IgG。2.如权利要求1所述的肝素结合蛋白定量检测的样品垫，其特征在于，所述荧光微球偶联的鼠抗人HBP单克隆抗体的浓度为0.1mg/mL～1mg/mL，所述荧光微球偶联的兔IgG的浓度为0.1mg/mL～0.5mg/mL。3.如权利要求1所述的肝素结合蛋白定量检测的样品垫，其特征在于，所述荧光微球包括时间分辨荧光微球、胶乳微球、荧光素、量子点。4.一种铺制权利要求1所述的肝素结合蛋白定量检测的样品垫的方法，包括以下步骤：步骤S1，使用荧光微球标记鼠抗人HBP单克隆抗体形成所述荧光微球偶联的鼠抗人HBP单克隆抗体，使用荧光微球标记兔IgG形成所述荧光微球偶联的兔IgG；步骤S2，使用工作液将所述荧光微球偶联的鼠抗人HBP单克隆抗体和所述荧光微球偶联的兔IgG分别进行稀释；步骤S3，将稀释后的所述荧光微球偶联的鼠抗人HBP单克隆抗体和所述荧光微球偶联的兔IgG铺制于所述样品垫(1)上，铺制完成后真空干燥箱抽真空。5.如权利要求4所述的肝素结合蛋白定量检测的样品垫，其特征在于，所述步骤S1中的所述荧光微球偶联的鼠抗人HBP单克隆抗体的标记方法包括以下步骤：步骤A1，吸取荧光微球，加入尖底离心管中；步骤A2，加入MES缓冲液和超纯水,混匀；步骤A3，加入EDC和NHS，混匀后室温避光旋摇；步骤A4，离心，去上清，加入MES缓冲液重悬荧光微球，并用移液器吹打混匀，超声分散；步骤A5，加入鼠抗人HBP单克隆抗体，吹打混匀后室温避光旋摇；步骤A6，加入乙醇胺，吹打混匀后室温避光旋摇；步骤A7，离心，去上清，加入保存液重悬荧光...

【专利技术属性】
技术研发人员：任婷，张瑜，朱筱梅，林珍，戚雨，江兆伟，金巍，刘中华，王国强，
申请(专利权)人：江苏硕世生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：