一种用于检测肝癌血清肿瘤标志物的试剂组分及其检测方法技术

本发明专利技术公开了一种用于检测肝癌血清肿瘤标志物的试剂组分及其检测方法，属于医疗检测技术领域，包括示踪物标记第一抗体微球、示踪物标记第二抗体微球、第一抗原系列浓度的标准品溶液、第二抗原系列浓度的标准品溶液、反应缓冲液、洗板液、第一抗体固相载体和第二抗体固相载体，所述第一抗体针对以下各组肿瘤标志物中的一种：B2M、GDF

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测肝癌血清肿瘤标志物的试剂组分及其检测方法


[0001]本专利技术涉及医疗检测
，尤其涉及一种用于检测肝癌血清肿瘤标志物的试剂组分及其检测方法。

技术介绍

[0002]在癌症的研究和临床实践中，肿瘤标志物在肿瘤普查、诊断、判断预后、评价治疗疗效和高危人群随访观察方面都具有较大的实用价值，肿瘤标志物是指在恶性肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞异常分泌或脱落，或由机体因肿瘤反应而产生和/或升高的，反映肿瘤存在和生长的一类物质，包括蛋白质、激素、酶(同工酶)、多胺及癌基因产物，肿瘤标志物存在于病人的血液、体液、细胞或组织中，如果这些肿瘤标志物在人体中的含量明显高于正常值，则可能预示着患有某种癌症，因此对这些肿瘤标志物的高灵敏高选择性测定在临床研究和诊断上意义非常重大。
[0003]经检索，中国专利号CN108445213B公开了一种高灵敏度荧光定量检测血清肿瘤标志物的纳米复合探针、组合物及荧光定量试剂盒，虽然引入了纳米材料的信号转导功能，实现了识别与信号转导功能的一体化。结合肿瘤标志物高效的特异性识别功能、脱氧核酶的高识别和催化特性结合以及金纳米粒子的信号转导和荧光放大功能显著提高了荧光定量检测的灵敏度和特异性，检测灵敏度可达到0.01ng/mL，但是其检测成本较高，对肝癌血清肿瘤标志物的检测无法快捷高效，同时对肝癌血清肿瘤标志物的检测范围较小，带来了方法缺陷的问题。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是为了解决现有技术中存在的缺陷，而提出的一种用于检测肝癌血清肿瘤标志物的试剂组分及其检测方法。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：
[0006]一种用于检测肝癌血清肿瘤标志物的试剂组分，包括示踪物标记第一抗体微球、示踪物标记第二抗体微球、第一抗原系列浓度的标准品溶液、第二抗原系列浓度的标准品溶液、反应缓冲液、洗板液、第一抗体固相载体和第二抗体固相载体。
[0007]进一步地，所述第一抗体针对以下各组肿瘤标志物中的一种：B2M、GDF
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15、OGDH和OPN，所述第二抗体针对以下各组肿瘤标志物中的一种：GP73、CEA、AFP和CIRP。
[0008]进一步地，所述示踪物标记第一抗体微球为第一抗体与微球之间共价偶联形成第一抗体微球，并使微球染上钐元素，即得示踪物标记第一抗体微球；所述示踪物标记第二抗体微球为第二抗体与微球之间共价偶联形成第二抗体微球，并使微球染上Cy3荧光染料，即得示踪物标记第二抗体微球；所述微球为聚苯烯微球，且微球的平均粒径为5～15μm。
[0009]进一步地，所述第一抗原系列浓度的标准品溶液为第一抗体所对应的抗原，且浓度范围为0～600ng/mL；所述第二抗原系列浓度的标准品溶液为第二抗体所对应的抗原，且浓度范围为0～1500pmol/L。
[0010]进一步地，所述反应缓冲液含有质量浓度为0.3～1.1％的牛血清白蛋白；所述洗板液含有体积浓度为2～9％的表面活性剂；所述固相载体平板为固定有第一抗体和第二抗体的活性氨基包被的标准组织玻片，其中B2M和GP73包被在同一个孔、GDF
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15和CEA包被在同一个孔、OGDH和AFP包被在同一个孔、OPN和CIRP包被在同一个孔。
[0011]一种用于检测肝癌血清肿瘤标志物的试剂组分的检测方法，该检测肝癌血清肿瘤标志物的试剂组分的检测方法具体步骤如下：
[0012]步骤一：校准：取第一抗原系列浓度的标准品溶液、第二抗原系列浓度的标准品溶液和肝癌血清肿瘤标志物溶液各60μL加入固相载体平板相应位置，再加入反应缓冲液60μL，至于30℃下恒温反应1.5h，反应完成后用洗板液洗涤3～6次，形成待测样品；
[0013]步骤二：标记第一类肝癌血清肿瘤标志物：将步骤一中所述待测样品与示踪物标记第一抗体微球溶液120μL混合，搅拌均匀，并静置10～15min，即得第一混合液；
[0014]步骤三：标记第二类肝癌血清肿瘤标志物：将步骤二中所述第一混合液与示踪物标记第二抗体微球溶液混合，搅拌均匀，放置于30℃下恒温反应1.5h，再用洗板液洗涤3～6次，即得第二混合液；
[0015]步骤四：检测可检测信号：用时间分辨荧光免疫分析仪检测第二混合液的荧光信号值，用放射线检测装置检测放射性信号值；
[0016]步骤五：对比判断：将步骤四中所述荧光信号值和放射性信号值与标准曲线进行比较，从而确定待测样品中各肝癌血清肿瘤标志物是否存在。
[0017]进一步地，步骤三中所述第二混合液中的第一抗体与第二抗体的摩尔比为1:0.1～1:2。
[0018]相比于现有技术，本专利技术的有益效果在于：
[0019]1、本专利技术无需采用金纳米粒子，使得原料成本更低，同时试剂组分的检测范围更广，可同时检测多种肝癌血清肿瘤标志物，且在保证检测准确度的前提下，检测时间更短，因而检测效率更高。
附图说明
[0020]附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制。
[0021]图1为本专利技术提出的一种用于检测肝癌血清肿瘤标志物的试剂组分的检测方法的检测流程示意图。
具体实施方式
[0022]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。
[0023]在本专利技术的描述中，需要理解的是，术语“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“顶”、“底”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本专利技术和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本专利技术的限制。
[0024]实施例1：
[0025]请参阅图1，本专利技术提供一种技术方案：一种用于检测肝癌血清肿瘤标志物的试剂组分的检测方法，包括示踪物标记第一抗体微球、示踪物标记第二抗体微球、第一抗原系列浓度的标准品溶液、第二抗原系列浓度的标准品溶液、反应缓冲液、洗板液、第一抗体固相载体和第二抗体固相载体，第一抗体针对以下各组肿瘤标志物中的一种：B2M、GDF
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15、OGDH和OPN，第二抗体针对以下各组肿瘤标志物中的一种：GP73、CEA、AFP和CIRP，示踪物标记第一抗体微球为第一抗体与微球之间共价偶联形成第一抗体微球，并使微球染上钐元素，即得示踪物标记第一抗体微球；示踪物标记第二抗体微球为第二抗体与微球之间共价偶联形成第二抗体微球，并使微球染上Cy3荧光染料，即得示踪物标记第二抗体微球；微球为聚苯烯微球，且微球的平均粒径为5μm，该检测肝癌血清肿瘤标志物的试剂组分的检测方法具体步骤如下：
[0026]步骤一：校准：取第一抗原系列浓度的标准品溶液、第二抗原系列浓度的标准品溶液和肝癌血清肿瘤标志物溶液各60μL，再取反应缓冲液60μL，并上述溶液本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测肝癌血清肿瘤标志物的试剂组分，其特征在于，包括示踪物标记第一抗体微球、示踪物标记第二抗体微球、第一抗原系列浓度的标准品溶液、第二抗原系列浓度的标准品溶液、反应缓冲液、洗板液、包被第一抗体和第二抗体的固相载体平板。2.根据权利要求1所述的一种用于检测肝癌血清肿瘤标志物的试剂组分，其特征在于，所述第一抗体针对以下各组肿瘤标志物中的一种：B2M、GDF
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15、OGDH和OPN，所述第二抗体针对以下各组肿瘤标志物中的一种：GP73、CEA、AFP和CIRP。3.根据权利要求1所述的一种用于检测肝癌血清肿瘤标志物的试剂组分，其特征在于，所述示踪物标记第一抗体微球为第一抗体与微球之间共价偶联形成第一抗体微球，并使微球染上钐元素，即得示踪物标记第一抗体微球；所述示踪物标记第二抗体微球为第二抗体与微球之间共价偶联形成第二抗体微球，并使微球染上Cy3荧光染料，即得示踪物标记第二抗体微球；所述微球为聚苯烯微球，且微球的平均粒径为5～15μm。4.根据权利要求1所述的一种用于检测肝癌血清肿瘤标志物的试剂组分，其特征在于，所述第一抗原系列浓度的标准品溶液为第一抗体所对应的抗原，且浓度范围为0～600ngmL；所述第二抗原系列浓度的标准品溶液为第二抗体所对应的抗原，且浓度范围为0～1500pmolL。5.根据权利要求1所述的一种用于检测肝癌血清肿瘤标志物的试剂组分，其特征在于，所述反应缓冲液含有质量浓度为0.3～1.1％的牛血清白蛋白；所述洗板液含有体积浓度为2～9％的表面活性剂；所述固相载...

【专利技术属性】
技术研发人员：司文喆，李海霞，刘旭骏，
申请(专利权)人：北京大学第一医院，
类型：发明
国别省市：