用于同时基因活化的核酸构建体制造技术

本文报道了新DNA构建体及其使用方法。本发明专利技术在DNA分子的编码链和模板链上使用非生产性/无活性启动子和基因的特意排列，通过与位点特异性重组酶的相互作用，所述启动子和基因被转变成其活性形式。更详细地，根据本发明专利技术所述的DNA元件对于所含有的第一基因和第二基因的表达不具有功能。通过对于所述第一基因和第二基因的表达不具有功能，根据本发明专利技术所述的DNA元件可以整合到细胞的基因组中，而没有所包含的结构基因在整合之后已经直接表达的风险。仅当识别所述DNA元件的重组识别序列并对其具有功能的重组酶被活化或导入所述细胞中时，所述基因才表达。由此，在本发明专利技术的经基因整合的DNA元件中，介于第一突变重组酶识别序列与第二突变重组酶识别序列之间的重组酶介导的盒反转(RMCI)被启动。所述RMCI引起位于两个突变重组酶识别序列之间的根据本发明专利技术所述的DNA元件的部分的反转。由此第一启动子变成可操作地连接至所述第一基因，并且第二启动子变成可操作地连接至所述第二基因。仅在此之后，所述第一基因和所述第二基因才被转录，并且各自编码的蛋白质被表达。因此，根据本发明专利技术所述的DNA元件特别地用于同时活化细胞内的两个基因。因。因。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于同时基因活化的核酸构建体
[0001]本文报道了新DNA构建体及其使用方法。借助根据本专利技术的新DNA构建体，可使用位点特异性重组酶技术同时活化至少两种基因的转录。本专利技术在DNA分子的编码链和模板链上使用启动子和基因元件的特意无活性排列，通过与位点特异性重组酶的相互作用将该启动子和基因元件转变成其活性形式。本文还报道了具有交换的启动子和并入的LoxP位点的新VA RNA元件。

技术介绍

[0002]基因治疗广义上是指治疗性施用基因材料以修饰活细胞的基因表达，从而改变其生物学特性。经过数十年的研究，基因治疗已进入市场，并预期将变得越来越重要。一般来说，基因疗法可分为体内或离体方法。
[0003]目前，大多数体内疗法依赖于使用重组腺相关病毒(rAAV)载体进行DNA递送。AAV是一种小的、天然存在的、非致病性小病毒，其由无包膜的二十面体衣壳组成。其包含大约4.7kb的单链DNA基因组。野生型AAV载体的基因组携带两种基因rep和cap，其侧翼是反向末端重复序列(ITR)。ITR对于顺式病毒复制和包装是必需的。rep基因编码四种不同的蛋白质，其表达由本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种双链DNA元件，其包含编码链和模板链，其特征在于编码链以5'
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至3'
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方向按以下顺序包含：
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第一启动子；
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第一重组酶识别序列，所述第一重组酶识别序列在左反向重复序列中包含突变；
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第二启动子，所述第二启动子相对于所述编码链为反向；
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第一多聚腺苷酸化信号序列和/或转录终止元件，所述第一多聚腺苷酸化信号序列和/或转录终止元件相对于所述编码链为反向；
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第一开放阅读框，所述第一开放阅读框相对于所述编码链为反向并且所述第一开放阅读框可操作地连接至所述第一多聚腺苷酸化信号序列和/或转录终止元件；
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第二重组酶识别序列，所述第二重组酶识别序列在右反向重复序列中包含突变并且相对于所述第一重组酶识别序列处于反向方向；
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第二开放阅读框；以及
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第二多聚腺苷酸化信号序列和/或转录终止元件，所述第二多聚腺苷酸化信号序列和/或转录终止元件可操作地连接至所述第二开放阅读框。2.一种双链DNA元件，其包含编码链和模板链，其中所述编码链以5'
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至3'
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方向按以下顺序包含：
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第一启动子；
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第一重组酶识别序列，所述第一重组酶识别序列在左反向重复序列中包含突变；
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Rep/Cap开放阅读框，所述Rep/Cap开放阅读框包括用于表达Rep和Cap蛋白的其他启动子，所述Rep/Cap开放阅读框相对于所述编码链为反向；
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第二重组酶识别序列，所述第二重组酶识别序列在右反向重复序列中包含突变并且相对于所述第一重组酶识别序列处于反向方向；以及
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多聚腺苷酸化信号序列。3.一种双链DNA元件，其包含编码链和模板链，a)其中所述编码链以5'
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至3'
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方向按以下顺序包含：
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第一启动子；
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第一重组酶识别序列，所述第一重组酶识别序列在左反向重复序列中包含突变；
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第二启动子，所述第二启动子相对于所述编码链为反向；
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第一多聚腺苷酸化信号序列和/或转录终止元件，所述第一多聚腺苷酸化信号序列和/或转录终止元件相对于所述编码链为反向；
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编码序列，所述编码序列仅编码Rep78蛋白或仅编码Rep68蛋白，但不编码两者，其中(i)任选地使内部P40启动子失活，且/或(ii)将Rep52/40的起始密码子突变成非起始密码子，且/或(iii)移除剪接供体和受体位点，所述编码序列相对于所述编码链为反向，并且所述编码序列可操作地连接至所述第一多聚腺苷酸化信号序列和/或转录终止元件；
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第二重组酶识别序列，所述第二重组酶识别序列在右反向重复序列中包含突变并且
所述第二重组酶识别序列相对于所述第一重组酶识别序列处于反向方向；以及
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Rep52/Rep40和Cap开放阅读框，所述Rep52/Rep40和Cap阅读框包括可操作地连接至所述开放阅读框的多聚腺苷酸化信号序列，或者b)其中所述编码链以5'
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至3'
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方向按以下顺序包含：
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第一启动子；
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第一重组酶识别序列，所述第一重组酶识别序列在所述左反向重复序列中包含突变；
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第二启动子，所述第二启动子相对于所述编码链为反向；
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第一多聚腺苷酸化信号序列和/或转录终止元件，所述第一多聚腺苷酸化信号序列和/或转录终止元件相对于所述编码链为反向；
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编码序列，所述编码序列仅编码Rep...

【专利技术属性】
技术研发人员：S，
申请(专利权)人：豪夫迈，
类型：发明
国别省市：