一种DNA结合蛋白高灵敏高通量的检测方法技术

本发明专利技术属于基于微阵列芯片的ＤＮＡ结合蛋白检测技术，特别涉及一种超灵敏高通量微阵列芯片的ＤＮＡ结合蛋白检测技术。将双链或单链寡核苷酸固定到芯片，将待筛选的细胞粗提取物同芯片直接温育，再将外切酶放入上述体系中进行温育。最后将环形探针加入体系中，进行滚环扩增。芯片上能与目标蛋白结合的特定点阵序列能作为延伸引物进行滚环扩增；而没有被蛋白结合的序列，由于被外切酶所消化则不能进行滚环扩增，最后将扩增产物同通用荧光检测探针杂交。根据芯片上特定阵列点信号的有无则可以检测出ＤＮＡ结合蛋白的有无；通过点阵荧光的强度则可以定量检测出目标蛋白的含量。该芯片能实现对ＤＮＡ结合蛋白的超灵敏、低成本、高特异和高通量的检测，可以广泛应用于科研和临床检测诊断之中。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基于微阵列芯片的DNA结合蛋白检测技术，特别涉及一种DNA结 合蛋白高灵敏高通量的检测方法。
技术介绍
对于各种生命活动来说，蛋白与DNA的特异性结合是许多细胞表现各种生物 活性的一个关键步骤，包括基因转录调节、翻译以及DNA复制、重组和修复等。 因此，DNA结合蛋白的检测和特异性结合位点的鉴定对于探索基因表达机制和分析 细胞功能是十分重要的。进而，探明这些信息有助于査明生物有机体发育畸变的 原因。近来，DNA结合蛋白以及结合位点信息已经成为许多疾病诊断和药物发现的潜在标签和靶标。实现对相关转录因子的早期诊断也是预防与治疗众多疾病如癌 症、疼痛等的一个重要方法。因此，建立一种监测转录因子的转录水平或活性的 快速灵敏方法是十分关键的。目前常规检测DNA结合蛋白的方法有蛋白电泳迁移 法、DNA印记法、ELISA法和Southwestern印迹法。然而，这些方法都比较费时 耗力，并且这些方法不是需要放射性标记，就是需要昂贵的抗体，目前现存的检 测方法都存在不同的技术缺陷。近来，高通量芯片技术已经被发展用来检测DNA 结合蛋白。然而，已经报道的芯片检测方法仍存在较多缺点，如检本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种ＤＮＡ结合蛋白的检测方法，其特征在于其具体步骤为：首先设计寡核苷酸ＤＮＡ芯片；将待筛选的粗细胞提取液同寡核苷酸ＤＮＡ芯片直接温育；再将核酸外切酶Ⅲ放入上述寡核苷酸ＤＮＡ芯片体系中温育；再将环形探针加入寡核苷酸ＤＮＡ芯片体系中，进行滚环扩增，有结合蛋白的序列能进行扩增获得荧光信号，而没有被蛋白的结合的序列，被核酸外切酶Ⅲ所切割则不能进行滚环扩增，不能获得荧光信号；最后通过微阵列荧光信号的有无来判断芯片体系中ＤＮＡ结合蛋白的有无，通过荧光强度则能够定量检测出ＤＮＡ结合蛋白含量。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：潘志强，张励才，邵翠杰，张成标，
申请(专利权)人：徐州医学院，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]