HPV31型衣壳蛋白L1单克隆抗体、制备方法及应用技术

本发明专利技术涉及单克隆抗体技术领域，尤其是涉及HPV31型衣壳蛋白L1单克隆抗体、制备方法及应用。本发明专利技术提供了特异性结合HPV31型衣壳蛋白L1的结合分子，其中包括通过杂交瘤技术筛选获得针对31型HPV的鼠源单克隆抗体，该抗体对HPV31L1VLPs和假病毒具有高度的特异性和中和活性。本发明专利技术基于该单抗、兔多抗及抗鼠IgG酶标抗体建立了双抗夹心间接ELISA法用于HPV31L1抗原的检测。该方法具有良好的特异性、灵敏度、线性和准确度，对疫苗有效抗原成分的含量及活性进行评价，对HPV疫苗的生产和宫颈癌的防控具有重要价值。具有重要价值。具有重要价值。

【技术实现步骤摘要】
HPV31型衣壳蛋白L1单克隆抗体、制备方法及应用


[0001]本专利技术涉及单克隆抗体
，尤其是涉及HPV31型衣壳蛋白L1单克隆抗体、制备方法及应用。

技术介绍

[0002]人乳头状瘤病毒(Human Papillomavirus，HPV)是一种无包膜的小DNA病毒，目前约有200多种，HPV主要感染皮肤和粘膜组织，其中有40多种HPV感染可以导致人类疾病，根据HPV感染与癌症发生的关系，HPV可以分为高危型和低危型，其中HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58及59等为高危型，其他的HPV亚型为低危型。高危型HPV持续性感染可引发宫颈癌、肛门癌和阴道癌等恶性肿瘤。
[0003]宫颈癌也是目前唯一病因学明确、唯一可以一级预防、唯一可能基本消灭的癌症。目前尚无针对HPV感染的特效药，接种HPV疫苗是目前预防HPV感染最有效的方法。目前，国内外已上市的5个宫颈癌疫苗均以HPV主要衣壳蛋白L1为有效抗原，通过基因重组技术在一定条件下组装为病毒样颗粒(Virus
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like particles，VLPs)，再辅以不同的佐剂配制成疫苗。基于重组HPV L1 VLPs疫苗的成功上市及广泛应用，充分表明了L1 VLPs高度还原了天然HPV的结构，保留了天然病毒的关键中和表位，具有与野生同型病毒相同或相似的抗原性和免疫原性，可诱导高滴度的中和抗体，进而很好地预防HPV持续感染、宫颈癌前病变及其他相关疾病。因此，在HPV疫苗生产的全程保持正确的中和表位和稳定的VLPs结构，是保证疫苗质量和有效性的前提。在疫苗生产工艺的各个环节建立准确、灵敏、特异的检测方法对抗原结构和定量进行全程监控既是技术的需要，也是法规的指导原则。利用经典的抗原抗体反应原理，采用中和抗体对抗原中和表位进行鉴定是疫苗质控的常用手段，通过Western
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blot、ELISA、和IVRP等技术手段对HPV疫苗原液、半成品及成品中的抗原成分进行鉴别实验、抗原含量检测、抗原体外效力测定，可为疫苗的检测放行提供依据。因此单克隆中和抗体作为疫苗抗原质控的重要反应试剂，并同时具有特异性和中和活性的单克隆抗体在疫苗质控过程中具有不可替代的作用。另外，疫苗效力检测是疫苗成品放行的重要指标，目前HPV疫苗效力是通过疫苗免疫动物后采集血清，采用假病毒中和实验来检测血清的中和效价来进行评价，虽然该方法能够较好地反映疫苗成品的中和抗体水平，但也同时存在着动物用量较多，检测值波动较大，检测周期长，成本较高的缺点，同时也违背动物实验的3R原则，国内外一些企业已在响应国际组织的倡导，在逐渐淘汰动物实验检测疫苗成品效力的方法。目前已经被认同和用于部分样品检测的实践，基于中和抗体针对疫苗抗原中和表位和体外活性的质控和表征，已经是一种高效、经济、和可行的替代方法，例如美国默克公司的HPV疫苗，中国的甲肝和乙肝疫苗，都已经部分或全部使用中和抗体而非动物实验放行疫苗产品。
[0004]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于，提供一种HPV31型衣壳蛋白L1结合分子，该结合分子能够特异性结合HPV31型衣壳蛋白L1，将其用于HPV31型衣壳蛋白L1抗原检测实现的对疫苗抗原中和表位和体外活性的质控和表征，从而替代动物实验。
[0006]本专利技术的另一个目的在于，提供一种特异性结合HPV31型衣壳蛋白L1的单克隆抗体、生产该单克隆抗体的杂交瘤细胞以及杂交瘤细胞的制备方法。
[0007]为了解决上述技术问题，实现上述目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0008]第一方面，本专利技术提供HPV31型衣壳蛋白L1结合分子，包括与HPV31型衣壳蛋白L1结合分子特异性结合的模块a；
[0009]所述模块a包括VH结构域，所述VH结构域包括具有SEQ ID No.1所示氨基酸序列的CDR
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H1，具有SEQ ID No.2所示氨基酸序列的CDR
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H2和具有SEQ ID No.3所示氨基酸序列的CDR
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H3。
[0010]在可选的实施方式中，所述VH结构域具有SEQ ID No.7所示氨基酸序列。
[0011]在可选的实施方式中，所述模块a还包括VL结构域，所述VL结构域包括具有SEQ ID No.4所示氨基酸序列的CDR
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L1，具有SEQ ID No.5所示氨基酸序列的CDR
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L2和具有SEQ ID No.6所示氨基酸序列的CDR
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L3。
[0012]在可选的实施方式中，所述VL结构域具有SEQ ID No.8所示氨基酸序列。
[0013]在可选的实施方式中，所述HPV31型衣壳蛋白L1结合分子选自与HPV31型衣壳蛋白L1特异性结合的scFv分子、Fv分子、Fab分子或完整抗体分子；
[0014]所述完整抗体分子包括单克隆抗体、克隆抗体或纳米抗体。
[0015]第二方面，本专利技术提供前述实施方式任一项所述的HPV31型衣壳蛋白L1结合分子在制备HPV31型衣壳蛋白L1抗原检测产品中的应用，或者在非以疾病诊断或治疗为目的的HPV31型衣壳蛋白L1抗原体外检测中的应用；
[0016]所述检测的方法包括双抗夹心间接ELISA法。
[0017]第三方面，本专利技术提供前述实施方式任一项所述的HPV31型衣壳蛋白L1结合分子在HPV31型疫苗生产或质控中的应用。
[0018]第四方面，本专利技术提供杂交瘤细胞，保藏编号为CGMCC No.45135，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2022年3月17日，所述杂交瘤细胞生产的单克隆抗体的重链氨基酸具有前述实施方式所述的VH结构域和前述实施方式所述的VL结构域。
[0019]第五方面，本专利技术提供前述实施方式所述杂交瘤细胞的制备方法，所述杂交瘤细胞生产的单克隆抗体特异性结合HPV31型衣壳蛋白L1，所述制备方法包括：
[0020]将HPV 31型病毒原液与佐剂混合后免疫小鼠，处死尾血抗体滴度超过1/50000的小鼠，获取脾细胞与SP2/0细胞融合后，依次筛选阳性杂交瘤细胞和特异性识别HPV 31型病毒的杂交瘤细胞。
[0021]第六方面，本专利技术提供单克隆抗体，所述单克隆抗体具有前述实施方式所述的VH结构域和前述实施方式所述的VL结构域，或者，所述单克隆抗体由前述实施方式所述杂交瘤细胞生产获得。
[0022]本专利技术提供了特异性结合HPV31型衣壳蛋白L1的结合分子，其中包括通过杂交瘤
技术筛选获得针对31型HPV的鼠源单克隆抗体，该抗体对HPV31 L1 VLPs和假病毒具有高度的特异性和中和活性，表明该抗体是一个针对HPV31 L1蛋白中和表位的抗体。本专利技术基于该单抗、兔多抗及抗鼠IgG酶标抗体建立了双抗夹心间接ELISA法用于HPV31 L1抗原的检本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.HPV31型衣壳蛋白L1结合分子，其特征在于，包括与HPV31型衣壳蛋白L1结合分子特异性结合的模块a；所述模块a包括VH结构域，所述VH结构域包括具有SEQ ID No.1所示氨基酸序列的CDR
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H1，具有SEQ ID No.2所示氨基酸序列的CDR
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H2和具有SEQ ID No.3所示氨基酸序列的CDR
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H3。2.根据权利要求1所述的HPV31型衣壳蛋白L1结合分子，其特征在于，所述VH结构域具有SEQ ID No.7所示氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的HPV31型衣壳蛋白L1结合分子，其特征在于，所述模块a还包括VL结构域，所述VL结构域包括具有SEQ ID No.4所示氨基酸序列的CDR
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L1，具有SEQ ID No.5所示氨基酸序列的CDR
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L2和具有SEQ ID No.6所示氨基酸序列的CDR
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L3。4.根据权利要求3所述的HPV31型衣壳蛋白L1结合分子，其特征在于，所述VL结构域具有SEQ ID No.8所示氨基酸序列。5.根据权利要求1～4任一项所述的HPV31型衣壳蛋白L1结合分子，其特征在于，所述HPV31型衣壳蛋白L1结合分子选自与HPV31型衣壳蛋白L1特异性结合的scFv分子、...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹玉锋，
申请(专利权)人：怡道生物科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：