针对猴痘病毒A35蛋白的单克隆抗体及其应用制造技术

本申请公开了针对猴痘病毒A35蛋白的单克隆抗体及应用。本申请单克隆抗体包括MPXV

【技术实现步骤摘要】
针对猴痘病毒A35蛋白的单克隆抗体及其应用


[0001]本申请涉及猴痘病毒检测
，具体涉及针对猴痘病毒A35蛋白的单克隆抗体及其应用。

技术介绍

[0002]人猴痘是由猴痘病毒(MonkeyPox virus，MPXV)感染引起的一种罕见的人畜共患疾病，对人类健康造成严重威胁。1970年，刚果发现首例人感染猴痘病例，过去很长时间也主要在西非和中非报道；然而，自2022年5月7日在英国发现首例确诊病例以来，截至当年8月11日，全球70多个国家和地区已有3万多例确诊病例。
[0003]MPXV属于正痘病毒(OrthoPoxvirus，OPXV)属的一个成员，是所有动物病毒中最大和最复杂的DNA病毒之一。与天花病毒接近，是具有潜在生物恐怖主义威胁的两种重要病原体；猴痘被认为是自天花根除以来人类最重要的正痘病毒感染。对大多数人来说，猴痘是一种自限性疾病，感染后症状较轻，通常2
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4周就能完全恢复。然而，症状的严重程度也与传播途径、病毒暴露程度和患者自身基础疾病密切相关。人类猴痘感染流行病学研究表明，儿童、孕妇和未接种天花疫苗人群感染后症状可能更严重，易出现继发性细菌感染、呼吸窘迫、肺炎、败血症、胃肠道感染、脑炎、角膜感染及视力丧失等并发症。猴痘死亡率在普通人群中为0％
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11％，在幼儿中更高。猴痘病毒暴发起源于西非分支，该分支的死亡率为3.6％，而中非进化分支的死亡率为10.6％，这进一步引起了人们的关注。猴痘病毒含有可溶性抗原、核蛋白抗原和红细胞凝集素，与其他三种感染人类的正痘病毒，天花病毒、牛痘病毒、痘苗病毒，具有交叉免疫原性。猴痘病毒与其他正痘病毒具有共同的结构抗原和可溶性抗原，在补体结合试验和琼脂扩散试验中，很难与天花病毒和痘病毒区分。
[0004]目前对于猴痘病毒感染尚无特效疗法，主要是对症支持和并发症的治疗，早期诊断对于感染病人的及早发现和猴痘疫情的防控都至关重要。OPXV含有成熟病毒粒子(MV)和包膜病毒粒子(EV)两种携带不同表面抗原的病毒粒子。以痘苗病毒(VACV)为例，目前已鉴定出几种中和性抗体靶点，如MV上的A13、A17、A27等，EV上的A33、B5等；但是，目前尚缺乏对猴痘病毒进行早期诊断的技术。
[0005]近期，猴痘成为全球关注的焦点。猴痘是由猴痘病毒引起的急性出疹性人畜共患病，以往主要发生在非洲地区。此次猴痘病例不同寻常地在多个非流行国家或地区暴发，而且有人际传播倾向，引起高度重视。为防止猴痘疫情的进一步扩散，亟需解决有效的猴痘病毒早期检测和诊断的问题。

技术实现思路

[0006]本申请的目的是提供新的针对猴痘病毒A35蛋白的单克隆抗体及其应用。
[0007]为了实现上述目的，本申请采用了以下技术方案：
[0008]本申请的第一方面公开了针对猴痘病毒A35蛋白的单克隆抗体，该单克隆抗体包括MPXV
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mAb 975和/或MPXV
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mAb 981；单克隆抗体MPXV
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mAb 975由重链和与之配对的轻链
组成；单克隆抗体MPXV
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mAb 975的重链的CDR1、CDR2和CDR3的序列依序为“RASISSSNW”、“IFHSGST”和“ARSQGGSGLFRAKWFDP”，轻链的CDR1、CDR2和CDR3的序列依序为“QSVSSSY”、“GAS”和“QQYGSSPRT”；单克隆抗体MPXV
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mAb 981由重链和与之配对的轻链组成；单克隆抗体MPXV
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mAb 981的重链的CDR1、CDR2和CDR3的序列依序为“GGSISSNNDY”、“IYYSGRT”和“ARLRLGSLLHRYRAVDP”，轻链的CDR1、CDR2和CDR3的序列依序为“QRVSSTY”、“GAS”和“QHFDSSLLT”。
[0009]需要说明的是，本申请的关键在于，以猴痘病毒A35蛋白作为诱饵，通过流式细胞术从外周血中分离特异性单个记忆B细胞，利用RT
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PCR和巢式PCR技术从中克隆、鉴定获得2株全人源单克隆抗体，即MPXV
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mAb 975和MPXV
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mAb 981。这2株猴痘病毒单克隆抗体，与MPXV
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A35蛋白具有高亲和力，其解离常数(KDs)均小于1pM，具有高效、广谱性、多用途的特点，可以作为血清学诊断MPXV的检测抗体，为检测猴痘病毒提供了强有力的工具。
[0010]还需要说明的是，本申请的猴痘病毒单克隆抗体MPXV
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mAb 975和/或MPXV
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mAb 981，两者可以单独使用，分别用于猴痘病毒检测；也可以根据需求组合在一起使用。
[0011]本申请的一种实现方式中，单克隆抗体MPXV
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mAb 975的重链可变区序列为Seq ID No.1所示序列，轻链可变区序列为Seq ID No.2所示序列；单克隆抗体MPXV
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mAb 981的重链可变区序列为Seq ID No.3所示序列，轻链可变区序列为Seq ID No.4所示序列。
[0012]需要说明的是，以上具体序列的重链可变区和轻链可变区只是本申请的一种实现方式中具体采用的单克隆抗体序列；可以理解，对于单克隆抗体而言，影响其与抗原决定簇形成精密互补的区域是互补性决定区(缩写CDR)，具体的，即重链的CDR1、CDR2和CDR3，以及轻链的CDR1、CDR2和CDR3；因此，只要保障本申请的重链和轻链的CDR1、CDR2和CDR3序列不变，都能够基本实现本申请猴痘病毒单克隆抗体的功能和作用。也就是说，本申请的猴痘病毒单克隆抗体，其具体序列不仅限于以上具体序列的重链可变区和轻链可变区。
[0013]本申请的第二方面公开了一种编码猴痘病毒单克隆抗体的核酸片段，该核酸片段编码本申请的单克隆抗体MPXV
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mAb 975的重链和轻链。
[0014]本申请的一种实现方式中，核酸片段包含编码Seq ID No.1所示的重链可变区的核酸片段，其序列为Seq ID No.5所示序列；编码Seq ID No.2所示的轻链可变区的核酸片段，其序列为Seq ID No.6所示序列。
[0015]本申请的第三方面公开了另一种编码猴痘病毒单克隆抗体的核酸片段，该核酸片段编码本申请的单克隆抗体MPXV
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mAb 981的重链和轻链。
[0016]本申请的一种实现方式中，核酸片段包含编码Seq ID No.3所示的重链可变区的核酸片段，其序列为Seq ID No.7所示序列；编码Seq ID No.4所示的轻链可变区的核酸片段，其序列为Seq ID No.8所示序列。
[0017]需要说明的是，以上具体的核酸序列只是本申请的一种实现方式中具体采用的核酸序列，可以理解，对于一个氨基酸而言可以有多个密码子；因此，根据密码子的简并性，在保本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.针对猴痘病毒A35蛋白的单克隆抗体，其特征在于：所述单克隆抗体包括MPXV
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mAb 975和/或MPXV
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mAb 981；单克隆抗体MPXV
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mAb 975由重链和与之配对的轻链组成；单克隆抗体MPXV
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mAb 975的重链的CDR1、CDR2和CDR3的序列依序为“RASISSSNW”、“IFHSGST”和“ARSQGGSGLFRAKWFDP”，轻链的CDR1、CDR2和CDR3的序列依序为“QSVSSSY”、“GAS”和“QQYGSSPRT”；单克隆抗体MPXV
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mAb 981由重链和与之配对的轻链组成；单克隆抗体MPXV
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mAb 981的重链的CDR1、CDR2和CDR3的序列依序为“GGSISSNNDY”、“IYYSGRT”和“ARLRLGSLLHRYRAVDP”，轻链的CDR1、CDR2和CDR3的序列依序为“QRVSSTY”、“GAS”和“QHFDSSLLT”。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于：所述单克隆抗体MPXV
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mAb 975的重链可变区序列为Seq ID No.1所示序列，轻链可变区序列为Seq ID No.2所示序列；所述单克隆抗体MPXV
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mAb 981的重链可变区序列为Seq ID No.3所示序列，轻链可变区序列为Seq ID No.4所示序列。3....

【专利技术属性】
技术研发人员：张政，鞠斌，周兵，刘磊，程林，葛向阳，
申请(专利权)人：深圳市第三人民医院，
类型：发明
国别省市：