特异性结合非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的抗体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了特异性结合非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的抗体及其应用，所述抗体能够特异性的识别并结合CD2v蛋白，本发明专利技术还提供了包含所述抗体的核酸分子、重组表达载体、宿主细胞、检测试剂、试剂盒、药物组合物等衍生产品，对非洲猪瘟病毒的检测、诊断和治疗具有重要意义。诊断和治疗具有重要意义。诊断和治疗具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
特异性结合非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的抗体及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体地，本专利技术涉及特异性结合非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的抗体及其应用。

技术介绍

[0002]非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)是一种巨大而复杂的DNA病毒，是非洲猪瘟的病原体，是Asfarviridae属的唯一已知的成员。非洲猪瘟是家猪中高度传染性的出血性疾病，其发病率和死亡率高达100％。ASFV具有多个天然宿主和贮存库，这进一步加大了非洲猪瘟的潜在威胁性。鉴于这种跨界动物疾病的巨大风险和威胁，非洲猪瘟已被列入世界动物卫生组织(OIE)陆生动物卫生法典。ASFV拥有170
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194kb的大型线性双链DNA(dsDNA)基因组，编码150多种蛋白质。尽管已经从病毒体中鉴定出多达68种结构蛋白，但大多数蛋白的功能尚不清楚。ASFV病毒体具有独特的多层结构，细胞内病毒体由核苷(第一层)，内核壳(第二层)，内膜(第三层)和衣壳(第四层)构成。细胞外病毒体具有额外的外部包膜(第五层)。细胞内和细胞外ASFV病毒体都具有传染性。构成病毒颗粒的结构蛋白分布在这些多层结构中，并在病毒感染中发挥各种作用。
[0003]目前，ASFV具有25个基因型，抗原性结构蛋白的多样性也可能会对ASFV感染的可靠诊断产生巨大影响。为了深入研究抗原性结构蛋白在病毒感染中发挥的作用，并实现对ASFV病毒感染的准确诊断，本领域仍需要更多能够识别ASFV不同结构蛋白、不同抗原表位的单克隆抗体，为防治非洲猪瘟提供新方向和新思路。CD2v蛋白由ASFV的EP402R基因编码，为ASFV晚期表达跨膜蛋白，具有N端信号肽和单个跨膜结构域，是一种重要的病毒糖基化蛋白。CD2v有三种表达形式，分别是89kDa的全长糖基化蛋白，及通过蛋白水解作用产生的大小为63kDa的N
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末端糖基化片段和大小约为26kDa的C
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末端非糖基化片段，在受感染的动物细胞中能引起红细胞吸附现象，在病毒的传播和复制过程发挥着重要作用。因此，ASFV CD2v蛋白是一个良好的靶点，用于ASFV的检测和治疗药物的研发均具有良好的应用前景。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种特异性结合非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的抗体，以解决上述现有技术中存在的技术问题，该抗体能够特异性的识别并结合CD2v蛋白，这为进一步研究CD2v蛋白的生物学功能提供了有价值的工具。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：
[0006]抗体或其抗原结合片段
[0007]在一个方面，本专利技术提供了一种特异性结合非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的抗体或其抗原结合片段。
[0008]进一步，所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区；
[0009]所述重链可变区的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4所示；
[0010]所述轻链可变区的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12所示。
[0011]进一步，所述抗体或其抗原结合片段的重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:17所示。
[0012]在某些实施方案中，本专利技术所述的抗体或其抗原结合片段还包括与上述氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列所对应的抗体或其抗原结合片段，也即在对应的氨基酸序列或核苷酸序列的基础上将任意一个或多个位置的氨基酸或核苷酸替换为其他任意氨基酸或核苷酸之后得到的氨基酸序列或核苷酸序列所对应的抗体或其抗原结合片段，只要与本专利技术上述的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列所对应的抗体或其抗原结合片段均在本专利技术的保护范围内。
[0013]在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段还包括上述氨基酸序列所对应的抗体或其抗原结合片段的功能性变异体，具体地，所述功能性变异体包括但不限于：在一级结构序列中基本类似、但包括本专利技术的亲本单克隆抗体中没有的，例如体外或体内的化学和/或生物化学改性的衍生物。这些改性包括例如乙酰化、酰化、核苷酸或核苷酸衍生物的共价连接、脂质或脂质衍生物的共价连接、交联、二硫键的形成、糖基化、羟基化、甲基化、氧化、聚乙二醇化、蛋白水解处理、磷酸化，这样的功能性变异体同样包含在本专利技术的保护范围内。
[0014]核酸分子
[0015]在另一方面，本专利技术提供了一种编码本专利技术第一方面所述的抗体或其抗原结合片段的核酸分子。
[0016]在一些实施方案中，所述核酸分子是分离的或纯化的，一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。此外，还可用人工合成的方法来合成有关序列。
[0017]在一些实施方案中，本专利技术所述的核酸分子可以是通过以下方法产生或合成的：(i)在体外扩增的，例如通过聚合酶链式反应(PCR)扩增产生的，(ii)通过克隆重组产生的，(iii)纯化的，例如通过酶切和凝胶电泳分级分离，或者(iv)合成的，例如通过化学合成。在某些实施方案中，所述分离的核酸是通过重组DNA技术制备的核酸分子。在本申请中，可以通过本领域已知的多种方法来制备编码本专利技术第一方面所述抗体或其抗原结合片段的核酸，这些方法包括但不限于：采用限制性片段操作或采用合成性寡核苷酸的重叠延伸PCR。
[0018]重组表达载体
[0019]在另一方面，本专利技术提供了一种包含本专利技术第二方面所述的核酸分子的重组表达载体。
[0020]在一些实施方案中，所述重组表达载体中的核酸分子与启动子可操作性地连接，所述启动子包括但不限于：CMV启动子、amp启动子、recA启动子、SP6启动子、trp启动子、tac启动子、lac启动子、lacUV5启动子、lpp启动子、pLλ启动子、pRλ启动子、rac5启动子、T7启动子、SV40启动子、MMTV启动子；所述载体包括但不限于质粒载体、粘粒载体、病毒载体，其中，所述病毒载体包括腺病毒载体、腺相关病毒载体、逆转录病毒载体、慢病毒载体、痘病毒载体、疱疹病毒载体、噬菌体载体。
[0021]在一些实施方案中，所述病毒载体还包括疱疹病毒(例如，单纯性疱疹病毒(HSV))、基于SV40的运载体、乳头状瘤病毒、HBP Epstein Barr病毒、牛痘病毒、Sinbis病毒、流感病毒、呼肠孤病毒、新城疫病毒(NDV)、麻疹病毒、水疱性口炎病毒(VSV)、细小病毒、脊髓灰质炎病毒、痘病毒、塞内卡谷病毒(Seneca Valley virus)、柯萨奇病毒、肠病毒、粘液瘤病毒、马拉巴病毒(marabavirus)、或塞姆利基森林病毒(SFV)。
[0022]在一些实施方案中，当使用原核细胞作为宿主细胞时，所述表达载体通常包括能够传播转本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性结合非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区；所述重链可变区的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4所示；所述轻链可变区的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12所示。2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段的重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:17所示。3.一种编码权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段的核酸分子。4.一种包含权利要求3所述的核酸分子的重组表达载体。5.一种包含权利要求3所述的核酸分子或权利要求4所述的重组表达载体的宿主细胞。6.一种用于检测非洲猪瘟病毒的试剂，其特征在于，所述试剂包含权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段；优选地，所述抗体或其抗原结合片段是被可用于检测的标记物标记的抗体或其抗原结合片段；更优选地，所述可用于检测的标记物包括荧光色素、亲和素、顺磁性离子、放射性同位素；最优选地，所述荧光色素包括荧光素、罗丹明、Texas红、藻红蛋白、藻蓝蛋白、别藻蓝蛋白、多甲藻黄素
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叶绿素蛋白；最优选地，所述亲和素包括生物素、卵白亲和素、链亲和素、卵黄亲和素、类亲和素；最优选地，所述顺磁性离子包括铬(III)、锰(II)、铁(III)、铁(II)、钴(II)、镍(II)、铜(II)、钕(III)、钐(III)、镱(III)、钆(III)、钒(II)、铽(III)、镝(III)；最优选地，所述放射性同位素包括放射性碘、放射性铯、放射性铱、放射性钴。7.一种用于检测非洲猪瘟病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段。8.一种药物组合物，...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄亚杰，魏化伟，
申请(专利权)人：江苏东抗生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：