HBV的抗RNA病毒颗粒抗体制造技术

本发明专利技术提供一种HBV的抗RNA病毒颗粒抗体，其特异性地识别乙肝病毒(HBV)的RNA病毒颗粒。其特异性地识别乙肝病毒(HBV)的RNA病毒颗粒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】HBV的抗RNA病毒颗粒抗体


[0001]本专利技术涉及乙肝病毒(HBV)的RNA病毒颗粒(RNA virion)抗体、使用了该抗体的HBV的RNA病毒颗粒的检测方法、以及用于检测HBV的RNA病毒颗粒的试剂盒。

技术介绍

[0002]全世界有约20亿人的已感染者、约3亿人的慢性感染患者的乙肝病毒(HBV)是引起慢性肝炎、肝硬化、肝癌，在肝癌的原因中占20
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30％、每年88万人死亡的感染症(非专利文献1
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5)。1970年发现了作为感染主体的丹氏粒(Dane paticle，Dane颗粒)，以此为契机，1972年能够利用其包膜(envelope)即HBs抗原(Hepatitis B virus surface antigen，乙肝病毒表面抗原)的定性检查进行诊断，然后1979年通过HBV
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DNA的克隆判明了Dane颗粒的主体为含DNA的颗粒(完全病毒颗粒，complete virio n)或DNA颗粒(DNA virion)，1980年通过PCR法进行的HBV
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DNA检查的诊断开始广泛进行(非专利文献6)。在此之后，通过HBe抗原
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抗体等各种检查法，能够更详细地掌握感染状态，为了知道有无感染，HBV
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DNA为监测的主流，这在至今也没有发生变化。
[0003]对于治疗而言，具有抗病毒活性的干扰素α(IFN
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α)在1990年登场，第一个核酸模拟治疗药Lamivudine在1998年登场，2000年以后PEG化干扰素(Peg
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IFN)及各种核酸模拟制剂(NUC)成为治疗的明星(非专利文献6)。由于可以抑制属于HBV标记物的乙肝病毒表面抗原(HBsAg)或HBV
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DNA，因此HBV感染一直被认为是可控制的感染症。但是，另一方面，一直存在因来自现有检查阴性的献血供体的输血、针刺事故等而感染HBV的现象。HBV情况下的更严重的问题是无症状的感染者不知道被感染而使健康人感染，并且引起暴发。现有的检查是否充分成为新的疑问。因此，到了2010年代，为了增强检测灵敏度，开始着眼于HBsAg的定量化(qHBsAg)或通过下一代PCR法检测HBV
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DNA的方法的开发。
[0004]在这种情况下，2012年首次明确了参与HBV感染肝细胞的受体(非专利文献7)。由于开始能够进行HBV在肝细胞中的生命周期研究，因此终于确立了试验管内的实验系统，从而一下子推进了其阐明。判明了HBV不仅转移到核内并组装到人基因中(integrated DNA，整合的DNA)，而且在核内形成完全封闭双链DNA(convalently closed circular deoxyribonucl eis acid，共价闭环脱氧核糖核酸，cccDNA)，从而长期残留在肝脏内。该cccDNA被认为是引起HBV再活化的本质。但是，通过现有的IFN以及NUC治疗无法将其完全排除(非专利文献8
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11)。
[0005]虽然也存在针对HBV的疫苗，但是至今一年仍有约3000万人新感染，450万人在继续针对慢性肝炎的治疗(非专利文献1、2)。HBV治疗的目标虽然毫无疑义是生命预后和QOL的改善，但临床上的具体的治疗目标是：1)作为短期目标，是血中HBV
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DNA的阴性化或抑制，2)作为长期目标，是血中qHBsAg的消失(非专利文献9
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11)。由此，达到临床治愈的状态，患癌的风险减少。由于只要不实施侵袭性的肝活检就无法进行cc cDNA的测定，因此作为实际临床并不现实，可以认为通过血中qHBsAg的消失而几乎完全排除了肝脏内的cccDNA。目前的新的治疗目标发生了从血中HBV
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DNA的阴性化或抑制向qHBsAg消失(HBsAg loss)的范式
转变(paradigm shift)(非专利文献9
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11)。
[0006]通过近年来显著进步的NUC治疗，能够比较迅速地获得持续的病毒学反应(Sustained virological resoponse，SVR)的实现，进而获得血中的HBV
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DNA的阴性化。但是，“阴性化”准确地说是“抑制到测定检测限以下”，实际上在NUC治疗中，血中HBV
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DNA阴性化的患者血清具有感染能力这样的非常轰动的事实在2019年被实验性地首次证实(非专利文献12)。血中HBV
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DNA阴性化以后，直至血中qHBsAg消失为止，通常需要极长的时间，或者是终身都几乎不消失的病例(非专利文献13)。由于没有这样的测定长期的血中HBV
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DNA的抑制、或在血中HBV
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DNA的阴性化期间感染能力是否消失的方法，因此难以判定何时可以停药NUC，患者不得不基本终身长期服用。因此，伴随长期服用的副作用、医疗经济的压迫也成为新的严重的课题而出现。尽管如此，在其长期的期间内，也必须以3个月1次左右的频度实施血中HBV
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DNA测定来监测再活化的征兆等。由于PCR检查价格昂贵，因此同样的医疗经济的压迫成为问题。另外，还存在在PCR设备、资源有限的多数地区、机构中，对血中HBV
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DNA测定本身的实现极其困难的问题。此外，无论如何使检测灵敏度提高，也基本达到极限的水平，并且由PCR错误引起的假阳性、假阴性的问题也完全没有完全消除。
[0007]基于新型治疗的必要性，由于cccDNA和HBV生命周期的阐明，以c ccDNA本体或其转录活性(图1)为靶的本质性的新型治疗药的开发极其活跃(非专利文献9
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11)。但是，在验证这样的新型作用药的效果方面，在到以往的以血中DNA阴性化或抑制后qHBsAg消失为目标为止的极长的期间，能够验证感染能力的指标在当前时间点是不足的，这也一直是大的阻碍因素。qHBsAg是作为HBV感染的存在确认的广泛的指标，但其99％以上是没有感染能力的SVP(subviral particle，亚病毒颗粒)，(实际上是有感染力的DNA颗粒的100,000倍以上)，从中还无法高效地检测感染能力高的DNA颗粒(非专利文献14)。此外，还判明了在作为SVR长期病例的主体的HBe抗原阴性肝炎中，与cccDNA相比，来自整合的DN A的包膜为主体(非专利文献15)。即，用于确认HBV是否存在的决定性的指标是必不可少的，但难以终身掌握感染能力，因此迫切期望其他指标。
[0008]在血中HBV
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DNA阴性化或抑制以后，直至血中qHBsAg消失为止的长期时间中，确立可检测出HBV感染能力的指标、尤其是不需要活检的非侵入性的血中标记物，不仅从对健康人的水平、垂直感染(传染)的防止，而且从医疗成本的观点出发也是极其紧迫的课题。在这样的背景中，作为能够反映cccDNA的转录活性的指标(图1)，2018年以后，HBV<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种HBV的抗RNA病毒颗粒抗体，其特异性地识别乙肝病毒(HBV)的RNA病毒颗粒。2.根据权利要求1所述的HBV的抗RNA病毒颗粒抗体，其包含：序列号1所示的重链的氨基酸序列中的CDR序列和序列号2所示的轻链的氨基酸序列中的CDR序列，序列号3所示的重链的氨基酸序列中的CDR序列和序列号4所示的轻链的氨基酸序列中的CDR序列，序列号5所示的重链的氨基酸序列中的CDR序列和序列号6所示的轻链的氨基酸序列中的CDR序列，序列号7所示的重链的氨基酸序列中的CDR序列和序列号8所示的轻链的氨基酸序列中的CDR序列，或分别与上述CDR序列具有70％同源性的重链CDR序列和轻链CDR序列。3.根据权利要求2所述的HBV的抗RNA病毒颗粒抗体，其包含：序列号1所示的重链的氨基酸序列中的CDR序列和序列号2所示的轻链的氨基酸序列中的CDR序列。4.根据权利要求1～3中任一项所述的HBV的抗RNA病毒颗粒抗体，其包含：序列号1所示的重链和序列号2所示的轻链，序列号3所示的重链和序列号4所示的轻链，序列号5所示的重链和序列号6所示的...

【专利技术属性】
技术研发人员：成松久，安形清彦，米山博之，
申请(专利权)人：株式会社RCMG，
类型：发明
国别省市：