一种针对p72蛋白的抗非洲猪瘟病毒的抗体制造技术

本发明专利技术属于抗体制备技术领域，具体涉及一种针对p72蛋白的抗非洲猪瘟病毒的抗体。该抗体属于一种仅包括重链可变区VH与轻链可变区VL的单链抗体。本申请中，基于现有成熟噬菌体抗体库筛选技术，筛选获得了一个对非洲猪瘟病毒衣壳蛋白p72蛋白具有高亲和力的特异性scFv

【技术实现步骤摘要】
一种针对p72蛋白的抗非洲猪瘟病毒的抗体


[0001]本专利技术属于抗体制备
，具体涉及一种针对p72蛋白的抗非洲猪瘟病毒的抗体。

技术介绍

[0002]非洲猪瘟(African Swine fever，ASF)是一种高传染性和急性出血性病毒性疾病，感染发病后家猪死亡率接近100％。自1921年ASF首次在肯尼亚发现以来，已经给各国生猪养殖行业造成了巨大破坏。
[0003]已有研究表明，造成非洲猪瘟的非洲猪瘟病毒(African Swine fever virus，ASFV)的基因组为双股线状DNA，大小170－190kb，但结构复杂。由于对病毒编码的多种蛋白功能研究较为有限，加上病毒变异等原因，使得目前尚缺乏商业化的较好用于预防非洲猪瘟的疫苗产品。

技术实现思路

[0004]结合相关噬菌体筛选技术，本申请目的在于提供一种针对非洲猪瘟病毒衣壳蛋白p72蛋白具有高亲和力的特异性scFv
‑
Fc(single
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chain variable fragment Fc(Fragment Crystallization))抗体，从而为相关疫苗制备奠定一定技术基础。
[0005]本申请所采取的技术方案简述如下。
[0006]一种针对p72蛋白的抗非洲猪瘟病毒的抗体，该抗体属于一种单链抗体(即，仅包括重链可变区与轻链可变区)，其包括：重链可变区VH和轻链可变区VL；
[0007]所述重链可变区VH，长度为391bp，其核苷酸序列(如SEQ ID No.1所示)，具体如下：
[0008]GAGGAGAAGCTGGTGGAGTCTGGAGGAGGCCTGGTGCAGCCTGGGGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGTCGGCTCTGGATTCACCTTCAGTAGTACCTACATTAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGCAGTGGCTTGCAGCTATTAGTACTAGTGGTGGTAGCACCTACTACACAGACTCTATGGAGGGCCGATTCACCATCTCCAAAGACAACTCCCAGAACACGGCCTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAACAGAAGACACGGCCCGCTATTACTGTGCAACCATCCGGGGTTGCTATAGCTATGGTGCTAGTTGCTATCGTTCCTGGGCGTCCTTTATGGATCTCTGGGGCCCAGGCGTTGAAGTCGTCGTGTCCTCAG；
[0009]所述重链高变区VH所编码氨基酸序列，由130个氨基酸组成，其氨基酸序列，具体为：
[0010]EEKLVESGGGLVQPGGSLRLSCVGSGFTFSSTYINWVRQAPGKGLQWLAAISTSGGSTYYTDSMEGRFTISKDNSQNTAYLQMNSLRTEDTARYYCATIRGCYSYGASCYRSWASFMDLWGPGVEVVVSS；
[0011]该重链可变区VH含有三个高变区，对应碱基序列分别为：
[0012]457～480位处的:GATTCACCTTCAGTATACCTAC(对应编码的氨基酸序列：GFTFSSTY)；
[0013]532～555位处的：ATTAGTACTAGTGGTGGTAGCACC(对应编码的氨基酸序列为：ISTSGGST)；
[0014]670～73位处的：GCAACCATCCGGGGTTGCTATAGCTATGGTGCTAGTTGCTATCGTTCCTGGGCGTCCTTT
[0015]ATGGATCTC(对应编码的氨基酸序列为：ATIRGCYSYGASCYRSWASFMDL)；
[0016]所述轻链可变区VL，长度为321bp，其核苷酸序列(如SEQ ID No.2所示)，具体如下：
[0017]TCCTATGAGCTGACTCAGCCGTCTTCAGAGTCAGTGGCCTTGGGAAGTACGGCCAAGATCACCTGCTCCGGGGATCTGCTGGATGAAAAATATACGCAATGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCCCTGCTGCTCATTTATAAGGACAATGAGCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGGTTCTCTGGGTCCAGCTCAGGGAAAACGGCCACCCTGACCATCACTGGGGCCCAGGCTGAGGACGAGGCCGACTACTCGTGTCAGTCAGGTGACAGGATTAATAATGCTATTTTCGGCGGTGGGACCCATCTGACCGTCCTC；
[0018]所述轻链可变区VL由107个氨基酸组成，其氨基酸序列具体为：
[0019]SYELTQPSSESVALGSTAKITCSGDLLDEKYTQWYQQKPGQAPLLLIYKDNERPSGIP ERFSGSSSGKTATLTITGAQAEDEADYSCQSGDRINNAIFGGGTHLTVL；
[0020]该轻链可变区VL含有三个高变区，对应碱基序列分别为：
[0021]82～99位处的：CTGCTGGATGAAAAATAT(对应编码的氨基酸序列为:LLDEKY)；
[0022]151～159位处的：AAGGACAAT(对应编码的氨基酸序列为:KDN)；
[0023]268～297位处的：CAGTCAGGTGACAGGATTAATAATGCTAT(对应编码的氨基酸序列为:为QSGDRINNAI)；
[0024]应用时，重链可变区VH和轻链可变区VL之间连接子序列可参考为：GGTGGCGGCGGCGGCGGCTCTGGTGGTGGTGGTTCAGGAGGAGGAGGAGGAAGC；
[0025](其对应编码的氨基酸序列为：GGGGGGSGGGGSGGGGGS)。
[0026]在上述轻链可变区VL、重链可变区VH基础上，结合Fc片段，本申请提供了一种抗非洲猪瘟p72蛋白的scFv
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Fc抗体，其碱基序列长度为1494bp，碱基序列如SEQ ID NO.3所示，具体为：
[0027]ATGGCCTCCTATGAGCTGACTCAGCCGTCTTCAGAGTCAGTGGCCTTGGGAAGTACGGCCAAGATCACCTGCTCCGGGGATCTGCTGGATGAAAAATATACGCAATGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCCCTGCTGCTCATTTATAAGGACAATGAGCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGGTTCTCTGGGTCCAGCTCAGGGAAAACGGCCACCCTGACCATCACTGGGGCCCAGGCTGAGGACGAGGCCGACTACTCGTGTCAGTCAGGTGACAGGATTAATAATGCTATTTTCGGCGGTGGGACCCATCTGACCGTCCTCGGTGGCGGCGGCGGCGGCTC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种针对p72蛋白的抗非洲猪瘟病毒的抗体，其特征在于，该抗体属于一种仅包括重链可变区VH与轻链可变区VL的单链抗体；所述重链可变区VH，长度为391bp，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述轻链可变区VL，长度为321bp，其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。2.如权利要求1所述针对p72蛋白的抗非洲猪瘟病毒的抗体，其特征在于，重链可变区VH和轻链可变区VL之间设有连接子，连接子序列为：GGTGGCGGCGGCGGCGGCTCTGGTGGTGGTGGTTCAGGAGGAGGAGGAGGAAGC。3.一种抗非洲猪瘟p72蛋白的scFv
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Fc抗体，其特征在于，其碱基序列长度为1494bp，碱基序列如SEQ ID NO.3所示。4.权利要求3所述抗非洲猪瘟p72蛋白的scFv
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Fc抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(一)制备重组表达载体首先，获得正确的抗体核苷酸序列；随后，以真核表达质粒为载体，重组上述抗体核苷酸序列，构建获得可翻译表达SEQ ID NO.3所示核苷酸序列的重组真核表达载体；(二)进行抗体蛋白表达将步骤(一)中构建正确的重组质粒载体转化293F细胞，培养5<...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴亚楠，宋金星，夏璐，张艺璇，王梦翔，姬鹏超，万博，张改平，
申请(专利权)人：河南农业大学，
类型：发明
国别省市：