一种抗SpikeS2蛋白的抗体及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种抗Spike S2蛋白的抗体及其应用。具体地，所述重链可变区包括序列如SEQ ID NO.:2

【技术实现步骤摘要】
一种抗Spike S2蛋白的抗体及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种抗Spike S2蛋白的抗体及其应用。

技术介绍

[0002]冠状病毒是一个大型病毒家族，已知可引起感冒以及中东呼吸综合征 (MERS)和严重急性呼吸综合征(SARS)等较严重疾病。新型冠状病毒是一种新发现的呼吸道病毒，其曾被临时命名为2019年的新型冠状病毒(2019
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nCoV)、 COVID
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19(Corona Virus Disease2019)，同时国际病毒分类委员会声明，将新型冠状病毒命名为SARS
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CoV
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2(Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus2)；并认定这种病毒是SARS冠状病毒的姊妹病毒。
[0003]可以确定的新冠感染传播途径主要为直接传播、气溶胶传播和接触传播。人感染了冠状病毒后常见体征有呼吸道症状、发热、咳嗽、气促和呼吸困难等。在较严重病例中，感染可导致肺炎、严重急性呼吸综合征、肾衰竭，甚至死亡。
[0004]SARS
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CoV
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2利用其刺突(spike)蛋白识别宿主细胞受体(如ACE2)，引起 spike中的S1与S2结构域分离，触发S2结构域的构象改变，最终导致病毒与宿主细胞膜融合从而完成病毒入侵。冠状病毒刺突是病毒体外壳上的I类病毒融合蛋白，通过识别宿主细胞受体并介导病毒和细胞膜融合来在病毒感染中发挥关键作用(Li，2016)。S糖蛋白被合成为前体蛋白，由约1,300个氨基酸组成，然后被切割成一个氨基(N)端S1亚基(约700个氨基酸)和一个羧基(C)端S2 亚基(约600个氨基酸))。三个S1/S2异二聚体组装形成一个三聚体尖峰，从病毒包膜突出。S1亚基包含受体结合结构域(RBD)，而S2亚基包含疏水融合肽和两个七肽重复区。由受体结合，蛋白水解过程和/或细胞室中的酸性pH触发，I类病毒融合蛋白在感染过程中经历了从亚稳态的预融合状态到稳定的融合后状态的转变，其中受体结合亚基被裂解，Belouzard等人，2012年)。由三个S1
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S2 异二聚体组成的三聚体SARS冠状病毒(SARS
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CoV)S糖蛋白与细胞受体血管紧张素转化酶2(ACE2)结合，并通过融合前到融合后的构象转换介导病毒膜和细胞膜的融合(Song等等，2018)。

技术实现思路

[0005]为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种抗Spike S2蛋白的抗体，所述抗体具有结合Spike S2蛋白的活性。
[0006]一方面，本专利技术提供了一种抗Spike S2蛋白的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区，
[0007]所述重链可变区包括序列如SEQ ID NO.:2
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4所示的CDR1、CDR2、CDR3，
[0008]所述轻链可变区包括序列如SEQ ID NO.:5、6所示的CDR1、CDR3和序列为GAS的CDR2。
[0009]优选地，所述抗体或抗原结合片段的重链可变区序列与SEQ ID NO.:7所示的氨基酸序列具有至少90％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性的氨基酸
序列。
[0010]优选地，所述抗体或抗原结合片段的轻链可变区序列与SEQ ID NO.:8所示的氨基酸序列具有至少90％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性的氨基酸序列。
[0011]优选地，所述抗体或抗原结合片段的重链可变区序列如SEQ ID NO.:7所示。
[0012]优选地，所述抗体或抗原结合片段的轻链可变区序列如SEQ ID NO.:8所示。
[0013]优选地，所述重链可变区和轻链可变区通过连接子(linker)连接。
[0014]如本文所使用，所述连接子是本领域所常规使用的。
[0015]优选地，所述连接子包括(GGGGS)n、(GGGS)n、(SSSSG)n、(GSGSA)n、 (GGSGG)n或其他。
[0016]在可变区中某些区域氨基酸组成和排列顺序具有更高的变化程度，称为高变区(Hypervariable region，HVR)，高变区为抗原和抗体结合的位置，因此也称为决定簇互补区(complementarity
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determining region，CDR)。重链可变区和轻链可变区上均有三个CDR区。
[0017]另一方面，本专利技术提供了一种分离的核苷酸，所述核苷酸编码前述的抗SpikeS2蛋白的抗体或抗原结合片段。
[0018]优选地，所述核苷酸包括DNA、RNA或其杂合体。
[0019]另一方面，本专利技术提供了一种载体，所述载体上带有上述分离的核苷酸或表达上述分离的核苷酸。
[0020]优选地，所述载体包括表达载体；
[0021]如本专利技术所述，所述表达载体可用于转化、转导或转染宿主细胞，以使其在宿主细胞内表达携带的遗传元件。本文所使用的“表达载体”和“表达构建体”可互换使用，在将上述分离的核酸分子连接到载体上时，可以将核酸序列与载体上的调控元件直接或者间接相连，只要这些调控元件能够调控该核酸分子的翻译和表达等即可。当然这些调控元件可以直接来自于载体本身，也可以是外源性的，即并非来自于载体本身。也就是说，核酸分子与调控元件可操作地连接。本文中“可操作地连接”是指将外源基因连接到载体上，使得载体内的调控元件，例如转录调控序列和翻译调控序列等等，能够发挥其预期的调节外源基因的转录和翻译的功能。当然用来编码抗体重链和轻链的多核苷酸，可以分别独立的插入到不同的载体上，常见的是插入到同一载体上。
[0022]优选地，所述表达载体包括质粒、噬菌粒、粘粒和人工染色体。
[0023]优选地，所述人工染色体包括酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)、P1派生人工染色体(PAC)、哺乳动物人工染色体(MAC)和人类游离人工染色体(HAEC)。
[0024]优选地，所述噬菌体包括λ噬菌体或M13噬菌体；
[0025]优选地，所述动物病毒载体包括逆转录病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(例如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头状瘤病毒和乳多空病毒科病毒(例如SV40)。
[0026]另一方面，本专利技术还提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞中含有前述抗SpikeS2蛋白的抗体或抗原结合片段、前述分离的核苷酸或前述表达载体。
[0027]优选地，所述宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母
细胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。代表性例子有：大肠杆菌，链霉菌属；鼠伤寒沙门氏菌的细菌细胞：真菌细胞如酵母；植物细胞；果蝇S2 或Sf9的昆虫细胞；CHO，COS，HEK29本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗Spike S2蛋白的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括序列如SEQ ID NO.:2
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4所示的CDR1、CDR2、CDR3，所述轻链可变区包括序列如SEQ ID NO.:5、6所示的CDR1、CDR3和序列为GAS的CDR2；优选地，所述抗体或抗原结合片段的重链可变区序列与SEQ ID NO.:7所示的氨基酸序列具有至少90％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性的氨基酸序列；优选地，所述抗体或抗原结合片段的轻链可变区序列与SEQ ID NO.:8所示的氨基酸序列具有至少90％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性的氨基酸序列。2.如权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段的重链可变区序列如SEQ ID NO.:7所示；优选地，所述抗体或抗原结合片段的轻链可变区序列如SEQ ID NO.:8所示；优选地，所述重链可变区和轻链可变区通过连接子连接；优选地，所述连接子包括(GGGGS)n、(GGGS)n、(SSSSG)n、(GSGSA)n和(GGSGG)n。3.一种核苷酸，所述核苷酸编码前述的抗Spike S2蛋白的抗体或抗原结合片段；优选地，所述核苷酸包括DNA、RNA或其杂合体。4.一种载体，所述载体上带有上述分离的核苷酸或表达上述分离的核苷酸；优选地，所述载体包括表达载体；优选地，所述表达载体包括质粒、噬菌粒、动物病毒载体、人工染色体；优选地，所述人工染色体包括酵母人工染色体、细菌人工染色体、P1派生人工染色体、哺乳动物人工染色体和人类游离人工染色体；优选地，所述噬菌体包括λ噬菌体或M13噬菌体；优选地，所述动物病毒载体包括逆转录病毒载体、慢病毒载体、腺病毒载体、疱疹病毒载体、痘病毒载体、杆状病毒载体、乳头状瘤病毒载体和乳多空病毒科病毒载体。5.一种宿主细胞，所述宿主细胞中含有或表达权利要求1所述抗Spike S2蛋白的抗体或抗原结合片段、权利要求3所述核苷酸或权利要求4所述表达载体；优选地，所述宿主细胞包括是原核细胞、真核细胞；优选地，所述真核细胞包括低等真核细胞和高等真核细胞；优选地，所述低等真核细胞包括酵母细胞；优选地，所述高等真核细胞包括哺乳动物细胞；优选地，所述宿主细胞是人的细胞；优选地，所述细胞包括自行制备的细胞系，或者是商品化的细胞系。6.一种检测Spike S2蛋白的试剂组合或包含所述试剂组合的试剂盒，所述试剂组合包括权利要求1所述抗Spike S2蛋白的抗体或抗原结合片段、权利要求3所述核苷酸、权利要求4所述表达载体或权利要求5所述宿主细胞中任意一种；所述试剂组合中还含有可检测标记物；优选地，所述可检测标记物包括荧光团、染料、放射性标记物、酶标签和胶体金；优选地，所述染料包括罗丹明、对甲氨基酚、荧光素、硫代荧光素、氨基荧光素、羧基荧光素、氯代荧光素、甲基荧光素、磺基荧光素、氨基对甲氨基...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄亚杰，魏化伟，
申请(专利权)人：江苏东抗生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：