一种可结合多种AAV血清型的纳米抗体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了能够靶向多种血清型腺相关病毒(AAV)的纳米抗体或其抗原结合片段，可用于AAV的检测或纯化。于AAV的检测或纯化。于AAV的检测或纯化。

【技术实现步骤摘要】
一种可结合多种AAV血清型的纳米抗体及其应用


[0001]本文涉及靶向腺相关病毒的抗体，尤其是可靶向多种血清型腺相关病毒的纳米抗体。

技术介绍

[0002]腺相关病毒(AAV)是基因治疗主流的载体。不同AAV的血清型可以感染不同的细胞，组织和器官。传统上针对于不同血清型的AAV需要不同的抗体来做相关的检测和纯化，这增加了检测和纯化成本。

技术实现思路

[0003]在一方面，本文提供了靶向多种腺相关病毒(AAV)的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包括重链可变区，所述重链可变区包括HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1的氨基酸序列为LYAMG(SEQ ID NO：11)、所述HCDR2的氨基酸序列为VQDLSASNTYYSSAVKG(SEQ ID NO：12)和所述HCDR3的氨基酸序列为GPTLMSGNYNSAREYDY(SEQ ID NO：13)。
[0004]在一些实施方案中，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
[0005]在一些实施方案中，所述抗体为纳米抗体。
[0006]在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段还包括Fc片段。
[0007]在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段能够靶向AAV5。
[0008]在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段能够靶向AAV1、AAV2、AAV3、AAV5、AAV6、AAV7和AAV8中的至少两种。
[0009]在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段能够靶向AAV1、AAV2、AAV3、AAV5、AAV6、AAV7和AAV8。
[0010]在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包括SEQ ID NO：4或8所示氨基酸序列。
[0011]另一方面，本文提供了融合蛋白，其包括一个或更多个抗原结合功能部分，其中所述抗原结合功能部分包括上述抗体或其抗原结合片段。
[0012]在一些实施方案中，所述融合蛋白还包括检测标签或纯化标签。
[0013]另一方面，本文提供了核酸分子，其编码上述抗体或其抗原结合片段或融合蛋白。
[0014]在一些实施方案中，所述核酸分子其包括SEQ ID NO：3或7所示核苷酸序列。
[0015]另一方面，本文提供了表达载体，其包括上述核酸分子。
[0016]另一方面，本文提供了宿主细胞，其包括上述核酸分子或表达载体，或表达上述抗体或其抗原结合片段或融合蛋白。
[0017]另一方面，本文提供了在样品中检测的AAV方法，其包括让上述抗体或其抗原结合片段或融合蛋白与所述样品接触，并检测所形成的免疫复合物的量。
[0018]另一方面，本文提供了检测试剂盒，其包括上述抗体或其抗原结合片段或融合蛋白。
[0019]在一些实施方案中，所述AAV选自AAV1、AAV2、AAV3、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8及其任意组合。
[0020]另一方面，本文提供了固相载体，其表面偶联有上述抗体或其抗原结合片段。
[0021]另一方面，本文提供了纯化AAV的方法，包括：
[0022]1)让包括AAV的样品与所述固相载体接触；
[0023]2)将所述固相载体与所述样品分离；以及
[0024]3)从所述固相载体洗脱所述AAV，
[0025]其中所述AAV选自AAV1、AAV2、AAV3、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8及其任意组合。
[0026]本文提供的纳米抗体或其抗原结合片段对多种血清型的AAV具有结合亲和力，尤其是AAV5，可用于AAV的检测或纯化。
附图说明
[0027]图1显示了AAVi1和AAVi2纳米抗体对多种血清型AAV结合能力测试结果。
[0028]图2显示了AAVi1和AAVi2纳米抗体对AAV5亲和纯化时不同pH洗脱结果。
[0029]图3显示了用AAVi1和AAVi2纯化AAV5后的纯度检测结果。
具体实施方式
[0030]除非另有说明，本文使用的所有技术和科学术语具有本领域普通技术人员所通常理解的含义。
[0031]除非上下文明确地另外指出，术语“或”是指列举的可选择要素中的单个要素，术语“和/或”是指所列举的可选择要素中的任意一个、任意两个、任意三个、任意更多个或其全部。
[0032]术语“包含”或“包括”指包括所述的要素、整数或步骤，但是不排除任意其他要素、整数或步骤。在文中，当使用术语“包含”或“包括”时，除非另有指明，否则也涵盖由所述及的要素、整数或步骤组成的情形。例如，当提及“包括”某个具体序列的抗体可变区时，也旨在涵盖由该具体序列组成的抗体可变区。
[0033]术语“腺相关病毒(AAV)”是细小病毒科的非包膜二十面体衣壳病毒，包括单链DNA病毒基因组。细小病毒科包括依赖病毒属，其包括AAV，依赖于辅助病毒如腺病毒的存在来进行其复制。野生型AAV病毒基因组是一个线性、单链DNA(ssDNA)分子，长度为约5,000个核苷酸(nt)。反向末端重复序列(ITR)通常在5'和3'末端对病毒基因组封端，为病毒基因组提供复制起点。AAV病毒基因组通常包括两个ITR序列。这些ITR具有特征性T形发夹结构。双链发夹结构包括多种功能，包括但不限于通过充当宿主病毒复制细胞的内源DNA聚合酶复合物的引物来充当DNA复制的起点。野生型AAV病毒基因组还包括两个开放阅读框的核苷酸序列，一个为四个非结构性Rep蛋白(Rep78、Rep68、Rep52、Rep40，由Rep基因编码)，并且另一个为三个衣壳蛋白VP的亚基编码(VP1、VP2、VP3，由衣壳基因或Cap基因编码)。交替的剪接和交替的起始密码子和启动子导致从单个开放阅读框产生四种不同的Rep蛋白，并从单个开放阅读框产生三种衣壳蛋白。Rep蛋白与复制和包装相关，而衣壳蛋白则组装形成AAV的蛋白外壳或AAV衣壳。VP蛋白由三种亚基VP1、VP2和VP3组成，通过相互作用形成二十面体对称的衣壳。提及AAV情况下所用的术语“血清型”用于指AAV的衣壳蛋白在血清学上不同于其
它AAV血清型的区别。血清学独特性的确定通常是基于一种抗体与一种AAV之间具有反应性，而与其他或另一种AAV缺乏交叉反应性。这种交叉反应性差异通常是由于衣壳蛋白序列/抗原表位的差异(例如，由于AAV血清型的VP1、VP2和/或VP3序列差异)所致。目前已经发现了多种AAV血清型，包括但不限于AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11和AAV12，以及它们的突变体。本文在提及AAV时，还包括重组AAV(rAAV)，其基因组与野生AAV基因组不同：通过使用分子生物学方法从AAV基因组中去除部分野生型基因(例如Rep基因和Cap基因)，并以异源核酸序列(例如用于治疗目的的蛋白或RNA的编码序列)替换。归因于结构相对简单，能够感染多种细胞(包括静止和分裂细胞)而不整合到宿主基因组中以及其相本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.靶向多种血清型腺相关病毒(AAV)的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包括重链可变区，所述重链可变区包括HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1的氨基酸序列为LYAMG(SEQ ID NO：11)、所述HCDR2的氨基酸序列为VQDLSASNTYYSSAVKG(SEQ ID NO：12)和所述HCDR3的氨基酸序列为GPTLMSGNYNSAREYDY(SEQ ID NO：13)。2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。3.如权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体为纳米抗体。4.如权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，还包括Fc片段。5.如权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其能够靶向AAV5。6.如权利要求5所述的抗体或其抗原结合片段，其能够靶向AAV1、AAV2、AAV3、AAV5、AAV6、AAV7和AAV8中的至少两种。7.如权利要求5所述的抗体或其抗原结合片段，其能够靶向AAV1、AAV2、AAV3、AAV5、AAV6、AAV7和AAV8。8.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其包括SEQ ID NO：4或8所示氨基酸序列。9.融合蛋白，包括一个或更多个抗原结合功能部分，其中所述抗原结合功能部分包括权利要求1
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8任一项所述的抗体或其抗原结合片段。10.如权利要求9所述的融合蛋白，还包括检测标签或纯化标签。11.核酸分子，其编码权利要求1
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【专利技术属性】
技术研发人员：王成，潘兴华，和会娟，周晓晨，
申请(专利权)人：北京因诺惟康医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：