宽制造技术

本发明专利技术公开了宽

【技术实现步骤摘要】
宽pH下用于纯化不同AAV的纳米抗体


[0001]本专利技术涉及宽
pH
下用于纯化不同
AAV
的纳米抗体，属于生物

。

技术介绍

[0002]腺相关病毒
(Adeno
‑
associated virus,AAV)
由于其良好的安全性和对各种靶组织的有效转导，已成为治疗各种疾病的主要基因传递载体，
AAV
具有安全性好
、
特异性强
、
递送效率高
、
长期有效等特点，已被广泛应用于基因治疗领域，在已获批准的基因治疗产品中已经证实了这些优点
。
然而，与传统抗体药物相比，病毒载体的大规模生产和长期储存效率不高，产量低，纯度适中，保质期短
。
在
AAV
在生产过程中，纯化过程占病毒生产总成本的很大一部分，因此高效且稳定的产生高纯度病毒是非常重要的
。
[0003]目前，常用的纯化抗体填料是
Thermo
的
AAVX(Thermo Scientific
TM
POROS
TM
CaptureSelect AAVX)。
但是，根据
AAVX
要求，需要在
pH2.5
的条件下洗脱，并且洗脱时间不能超过3分钟
。
而根据文献记载，不同血清型的
AAV
长时间在
pH2.5
>的条件下，感染活性会大幅降低，
(
参见
Adeno
‑
Associated Virus(AAV)Capsid Stability and Liposome Remodeling During Endo/Lysosomal pH Trafficking
的图
8)。
同时，通常需要在室温的条件下，进行快速洗脱
。
这无疑也给设备使用及生产环境提出了巨大的难题，加快了设备的老化
。
[0004]因此，需要一种，在宽
pH
条件下，能够匀速洗脱的
AAV
纯化抗体填料
。

技术实现思路

[0005]专利技术要解决的问题
[0006]目前对于
AAV
的纯化方法，条件苛刻，必须在
pH2.5
的条件下洗脱，大大降低了
AAV
的感染活性，生产成本高
。
[0007]用于解决问题的方案
[0008][1].
靶向血清型腺相关病毒
(AAV)
的纳米抗体，其包含重链可变区，所述重链可变区包含三个互补决定区
(CDR)
：
HCDR1、HCDR2
和
HCDR3
；并且，
[0009]所述
HCDR1
包含如
SEQ ID NO:2
或
SEQ ID NO:6
所示的氨基酸序列，或与
SEQ ID NO:2
或
SEQ ID NO:6
中任一项具有至少
70
％
、75
％
、80
％
、85
％
、90
％
、95
％或
99
％或更高序列同一性的其变体；
[0010]所述
HCDR2
包含如
SEQ ID NO:3
所示的氨基酸序列，或与
SEQ ID NO:3
中任一项具有至少
70
％
、75
％
、80
％
、85
％
、90
％
、95
％或
99
％或更高序列同一性的其变体；
[0011]所述
HCDR3
包含如
SEQ ID NO:4
或
SEQ ID NO:7
所示的氨基酸序列，或与
SEQ ID NO:4
或
SEQ ID NO:7
中任一项具有至少
70
％
、75
％
、80
％
、85
％
、90
％
、95
％或
99
％或更高序列同一性的其变体
。
[0012][2].
根据
[1]所述的纳米抗体，其包含以下
(i)
和
/
或
(ii)
：
[0013](i)
如
SEQ ID NO:2
所示的
HCDR1、
如
SEQ ID NO:3
所示的
HCDR2
和如
SEQ ID NO:4
所示的
HCDR3
；
[0014](ii)
如
SEQ ID NO:6
所示的
HCDR1、
如
SEQ ID NO:3
所示的
HCDR2
和如
SEQ ID NO:7
所示的
HCDR3。
[0015][3].
根据
[1]或
[2]所述的纳米抗体，其中，所述纳米抗体包含以下序列中的一种或多种：
[0016](i)
如
SEQ ID NO:1
或
SEQ ID NO:5
所示的氨基酸序列；
[0017](ii)
与
SEQ ID NO:1
或
SEQ ID NO:5
所示的氨基酸序列具有至少
70
％
、75
％
、80
％
、85
％
、90
％
、95
％或
99
％同一性的氨基酸序列；或者，
[0018](iii)
在
SEQ ID NO:1
或
SEQ ID NO:5
所示的氨基酸序列中添加
、
取代
、
缺失或插入1个或多个氨基酸残基的氨基酸序列，并且其保留如
SEQ ID NO:1
或
SEQ ID NO:5
所示的氨基酸序列的功能
。
[0019][4].
根据
[1]～
[3]任一项所述的纳米抗体，其中，所述纳米抗体在其
N
端和
/
或
C
端包含
Fc
片段；以及，
[0020]任选地，所述纳米抗体在
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
靶向血清型腺相关病毒
(AAV)
的纳米抗体，其包含重链可变区，所述重链可变区包含三个互补决定区
(CDR)
：
HCDR1、HCDR2
和
HCDR3
；并且，所述
HCDR1
包含如
SEQ ID NO:2
或
SEQ ID NO:6
所示的氨基酸序列，或与
SEQ ID NO:2
或
SEQ ID NO:6
中任一项具有至少
70
％
、75
％
、80
％
、85
％
、90
％
、95
％或
99
％或更高序列同一性的其变体；所述
HCDR2
包含如
SEQ ID NO:3
所示的氨基酸序列，或与
SEQ ID NO:3
中任一项具有至少
70
％
、75
％
、80
％
、85
％
、90
％
、95
％或
99
％或更高序列同一性的其变体；所述
HCDR3
包含如
SEQ ID NO:4
或
SEQ ID NO:7
所示的氨基酸序列，或与
SEQ ID NO:4
或
SEQ ID NO:7
中任一项具有至少
70
％
、75
％
、80
％
、85
％
、90
％
、95
％或
99
％或更高序列同一性的其变体
。2.
根据权利要求1所述的纳米抗体，其包含以下
(i)
和
/
或
(ii)
：
(i)
如
SEQ ID NO:2
所示的
HCDR1、
如
SEQ ID NO:3
所示的
HCDR2
和如
SEQ ID NO:4
所示的
HCDR3
；
(ii)
如
SEQ ID NO:6
所示的
HCDR1、
如
SEQ ID NO:3
所示的
HCDR2
和如
SEQ ID NO:7
所示的
HCDR3。3.
根据权利要求1或2所述的纳米抗体，其中，所述纳米抗体包含以下序列中的一种或多种：
(i)
如
SEQ ID NO:1
或
SEQ ID NO:5
所示的氨基酸序列；
(ii)
与
SEQ ID NO:1
或
SEQ ID NO:5
所示的氨基酸序列具有至少
70
％
、75
％
、80
％
、85
％
、90
％
、95
％或
99
％同一性的氨基酸序列；或者，
(iii)
在
SEQ ID NO:1
或
SEQ ID NO:5
所示的氨基酸序列中添加
、
取代
、
缺失或插入1个或多个氨基酸残基的氨基酸序列，并且其保留如
SEQ ID NO:1
或
SEQ ID NO:5
所示的氨基酸序列的功能
。4.
根据权利要求1～3任一项所述的纳米抗体，其中，所述纳米抗体在其
N
端和
/
或
C
端包含
Fc
片段；以及，任选地，所述纳米抗体在
N
端和
/
或
C
端包含信号肽序列；可选地，所述纳米抗体包含如
SEQ ID NO:10
或
SEQ ID NO:11
所示的氨基酸序列，或与
SEQ ID NO:10
或
S...

【专利技术属性】
技术研发人员：王成，潘兴华，和会娟，
申请(专利权)人：北京因诺惟康医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：