与制造技术

本发明专利技术提供了一种与

【技术实现步骤摘要】
与HPV33型衣壳蛋白L1特异性结合的抗体或其抗原结合片段及其应用


[0001]本专利技术涉及抗体
，尤其是涉及一种与
HPV33
型衣壳蛋白
L1
特异性结合的抗体或其抗原结合片段及其应用
。

技术介绍

[0002]人乳头状瘤病毒
(Human Papillomavirus
，
HPV)
是一种无包膜的小
DNA
病毒，目前约有
200
多种，
HPV
主要感染皮肤和粘膜组织，其中有
40
多种
HPV
感染可以导致人类疾病，根据
HPV
感染与癌症发生的关系，
HPV
可以分为高危型和低危型，其中
HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58
及
59
等为高危型，高危型
HPV
持续性感染可引发宫颈癌
、
肛门癌和阴道癌等恶性肿瘤
。
世界范围内，宫颈癌在女性高发恶性肿瘤中排名第三，全球每年约有
60
万女性新发宫颈癌，超过
30
万的女性死于宫颈癌
。
其他的
HPV
亚型为低危型，主要引起皮肤黏膜的疣状增生，表现为尖锐湿疣
、
扁平疣等病变，目前在临床上还没有很好的治疗方法
。
[0003]预防
HPV
感染最有效的方法是接种
HPV
疫苗，目前国内外已上市的5个宫颈癌疫苗均以
HPV
主要衣壳蛋白
L1
为有效抗原，通过基因重组技术在一定条件下组装为病毒样颗粒
(Virus
‑
like particles
，
VLPs)
，再辅以不同的佐剂配制成疫苗
。
基于重组
HPV L1 VLPs
疫苗的成功上市及广泛应用，充分表明了
L1 VLPs
高度还原了天然
HPV
的结构，保留了天然病毒的关键中和表位，具有与野生同型病毒相同或相似的抗原性和免疫原性，可诱导高滴度的中和抗体，进而很好地预防
HPV
持续感染
、
宫颈癌
、
及其他相关疾病
。
目前已上市的
HPV
疫苗，
Merck
公司的四价疫苗“Gardasil”和九价疫苗“Gardasil 9”以及国内外研制的超过两价次的
HPV
疫苗多数包含
HPV 33
型的疫苗成分
。
[0004]在
HPV
疫苗生产的全程，保持正确的中和表位和稳定的
VLPs
结构，是保证疫苗质量和有效性的前提
。
在疫苗生产工艺的各个环节建立准确
、
灵敏
、
特异的检测方法对抗原结构和定量进行全程监控既是技术的需要，也是法规的指导原则
。
利用经典的抗原抗体反应原理，采用中和抗体对抗原中和表位进行鉴定是疫苗质控的有效手段，通过
Western
‑
blot、ELISA、
和
IVRP
等技术手段对
HPV
疫苗原液
、
半成品及成品中的抗原成分进行鉴别实验
、
抗原含量检测
、
抗原体外效力测定，可为疫苗的检测放行提供依据
。
因此单克隆中和抗体作为是疫苗抗原质控的重要反应试剂，并且同时具有特异性和中和活性的单克隆抗体在疫苗质控过程中具有不可替代的作用
。
另外，疫苗效力检测是疫苗成品放行的重要指标，目前
HPV
疫苗效力是通过疫苗免疫动物后采集血清，采用假病毒中和实验来检测血清的中和效价来进行评价，虽然该方法能够较好地反映疫苗成品的中和抗体水平，但也同时存在着动物用量较多，检测值波动较大，检测周期长，成本较高的缺点，同时也违背动物实验的
3R
原则，国内外一些企业已在响应国际组织的倡导，在逐渐淘汰动物实验检测疫苗成品效力的方法
。
目前已被认同和用于部分实践的，基于中和抗体针对疫苗抗原的中和表位和体外活性的质控和表征，已经是一种高效
、
经济
、
和可行的替代方法，例如美国默克公司的
HPV
疫苗，中国的甲肝和乙肝疫苗，都已经部分或全部使用中和抗体而非动物实验放行疫苗产品
。
因此，提供
更多的能够结合
HPV
的中和性单克隆抗体是目前市场需要的
。
[0005]有鉴于此，特提出本专利技术
。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种与
HPV33
型衣壳蛋白
L1
特异性结合的抗体或其抗原结合片段，通过以
HPV33
为抗原筛选获得一株单克隆抗体，通过克隆
、
鉴定与基因结构的分析，确定了其
CDR
区序列，本专利技术的另一目的是提供关于该抗体或其抗原结合片段的生物材料和它们的应用
。
[0007]为解决上述技术问题，本专利技术特采用如下技术方案：
[0008]根据本专利技术的一个方面，提供了一种与
HPV33
型衣壳蛋白
L1
特异性结合的抗体或其抗原结合片段，包括重链可变区和轻链可变区；所述重链可变区包含氨基酸序列如
SEQ ID NO.1
～3所示的
VHCDR1、VHCDR2
和
VHCDR3
；所述轻链可变区包含氨基酸序列如
SEQ ID NO.4
～6所示的
VLCDR1、VLCDR2
和
VLCDR3。
[0009]根据本专利技术的另一个方面，还提供了一种生物材料，该生物材料选自
(
ⅰ
)
～
(
ⅲ
)
中任一项：
[0010](
ⅰ
)
多核苷酸，包括编码上述与
HPV33
型衣壳蛋白
L1
特异性结合的抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列；
[0011](
ⅱ
)
载体，所述载体携带前述
(
ⅰ
)
多核苷酸；
[0012](
ⅲ
)
细胞，所述细胞携带
(
ⅰ
)
中多核苷酸，或含有
(
ⅱ
)
中载体，或表达权上述与
HPV33
型衣壳蛋白
L1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
与
HPV33
型衣壳蛋白
L1
特异性结合的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包括重链可变区和轻链可变区；所述重链可变区包含氨基酸序列如
SEQ ID NO.1
～3所示的
VHCDR1、VHCDR2
和
VHCDR3
；所述轻链可变区包含氨基酸序列如
SEQ ID NO.4
～6所示的
VLCDR1、VLCDR2
和
VLCDR3。2.
根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述重链可变区还含有骨架区
VHFR1
～
VHFR4
，重链任意一骨架区选自氨基酸序列如
SEQ ID NO.7
所示重链可变区的骨架区；和
/
或，所述轻链可变区还含有骨架区
VLFR1
～
VLFR4
，轻链任意一骨架区选自氨基酸序列如
SEQ ID NO.8
所示轻链可变区的骨架区
。3.
根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述重链可变区的氨基酸序列如
SEQ ID NO.7
所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如
SEQ ID NO.8
所示
。4.
根据权利要求1～3任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段还包含
IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE
或
IgD
任何其中之一的部分或全部恒定区的序列；优选地，所述抗原结合片段包括
F(ab
’
)2、Fab
’
、Fab、Fv、scFv、dsFv、
双特异抗体和抗体最小识别单位中的一种或多种；优选地，所述抗体或其抗原结合片段除去
CDR
区域，其余部分序列来源物种包括小鼠
、
大鼠
、
豚鼠
、
仓鼠
、
兔
、
雪貂
、
猫
、
狗
、
山羊
、
绵羊
、
奶牛
、
猪
、
马
、
猴和人中的一种或多种；优选地，所述抗体还包括重链恒定区和轻链恒定区；所述抗体为
IgG1
抗体，轻链为
κ
链；优选地，所述抗体由保藏号为
CGMCC NO
：
45705
的杂交瘤细胞株
12E1
分泌
。5.
生物材料，其特征在于，所述生物材料选自
(
ⅰ
)
～
(

【专利技术属性】
技术研发人员：阮宝阳，严嘉成，张雯苑，曹玉锋，孙晓东，朱俊郦，任柳铭，史力，
申请(专利权)人：怡道生物科技，
类型：发明
国别省市：