猪伪狂犬病病毒阳性血清及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及兽用生物制品技术领域，尤其涉及一种猪伪狂犬病病毒阳性血清及其制备方法和应用

【技术实现步骤摘要】
猪伪狂犬病病毒阳性血清及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及兽用生物制品
，尤其涉及一种猪伪狂犬病病毒阳性血清及其制备方法和应用
。

技术介绍

[0002]猪伪狂犬病是由猪伪狂犬病病毒（
Pseudorabies virus
，
PRV
）引起的猪急性传染病，具有暴发性流行特点，可引起妊娠母猪流产
、
死胎，公猪不育，新生仔猪大量死亡，育肥猪呼吸困难
、
生长停滞等，是危害全球养猪业的重大传染病之一
。
研制针对该传染病的疫苗对养猪业的健康发展具有重大意义
。
[0003]中和抗体效价是评价猪伪狂犬疫苗质量好坏的主要技术指标
。
猪伪狂犬病病毒阳性血清是中和抗体检测中重要的标准物质
。
目前常见的制备猪伪狂犬病病毒阳性血清的方法主要利用猪伪狂犬病毒进行动物免疫
。
例如，中国公开专利
CN110105447A
提供了一种猪伪狂犬病病毒高免血清的制备方法，使用灭活疫苗进行一次基础免疫和两次加强免疫，再用猪伪狂犬病病毒进行一次攻毒后，采集血清
。
此类方法制备得到的阳性血清虽然具有较高的中和抗体效价，但其在利用猪伪狂犬病毒制备疫苗的过程中，需要对病毒的安全性进行环境控制；且通常需要经过多次反复免疫，进而给制备过程带来很大的控制要求与时间成本
。
[0004]有鉴于此，特提出本专利技术
。
专利技术内容
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种猪伪狂犬病病毒阳性血清及其制备方法和应用
。
本专利技术以猪伪狂犬病毒
gB
蛋白和猪伪狂犬病毒
gD
蛋白作为联合抗原蛋白免疫健康阴性猪，制得的猪伪狂犬病病毒阳性血清具有中和效价滴度高
、
特异性好的优点
。
同时，本专利技术提供的猪伪狂犬病病毒阳性血清制备方法具有生产周期短
、
安全风险控制要求低
、
生产成本低等优点
。
[0006]具体的，本专利技术提供的技术方案如下：第一方面，本专利技术提供了一种猪伪狂犬病病毒阳性血清，所述猪伪狂犬病病毒阳性血清以蛋白疫苗免疫健康阴性猪制得，所述蛋白疫苗中的抗原蛋白为猪伪狂犬病毒
gB
蛋白和猪伪狂犬病毒
gD
蛋白；所述猪伪狂犬病毒
gB
蛋白和猪伪狂犬病毒
gD
蛋白的质量比为1‑
2:1
‑2；所述猪伪狂犬病病毒阳性血清的中和抗体效价
≥1:861。
[0007]现有常规方法以猪伪狂犬病毒多次免疫阴性动物制得的阳性血清虽然具有较高的中和抗体效价，但存在安全性风险较大等问题
。
本专利技术以猪伪狂犬病毒
gB
蛋白和猪伪狂犬病毒
gD
蛋白作为联合抗原蛋白，按质量比1‑
2:1
‑2配合免疫健康阴性猪，获得的猪伪狂犬病病毒阳性血清中和效价滴度高
、
特异性好，能满足疫苗研发过程中涉及的各检验项目使用要求
。
且未使用猪伪狂犬病毒作为免疫原，安全性良好
。
[0008]在本专利技术中，所述猪伪狂犬病毒
gB
蛋白和猪伪狂犬病毒
gD
蛋白的质量比为1‑
2:1
‑
2
，优选为1‑
1.5:1
‑
1.5
，更优选为1‑
1.2:1
‑
1.2
，更优选为1‑
1.1:1
‑
1.1
，更优选为
1:1。
上述优选比例的猪伪狂犬病毒
gB
蛋白和猪伪狂犬病毒
gD
蛋白，联用效果相较更好
。
[0009]在本专利技术中，所述猪伪狂犬病毒
gB
蛋白和猪伪狂犬病毒
gD
蛋白可以是本领域公知来源的抗原蛋白
。
[0010]在本专利技术较为优选的实施方式中，所述猪伪狂犬病毒
gB
蛋白的氨基酸序列如
SEQ ID NO.1
所示；所述猪伪狂犬病毒
gD
蛋白的氨基酸序列如
SEQ ID NO.2
所示
。
[0011]第二方面，本专利技术提供了一种猪伪狂犬病病毒阳性血清的制备方法，使用蛋白疫苗免疫健康阴性猪，制得中和抗体效价
≥1:861
的阳性血清；所述蛋白疫苗中的抗原蛋白为猪伪狂犬病毒
gB
蛋白和猪伪狂犬病毒
gD
蛋白；所述猪伪狂犬病毒
gB
蛋白和猪伪狂犬病毒
gD
蛋白的质量比为1‑
2:1
‑
2。
[0012]常规猪伪狂犬病毒免疫阴性动物后的免疫应答较为迟缓，需多次免疫处理才能获得较为理想的阳性血清，如一种猪伪狂犬病病毒阳性血清的制备方法（申请公布号
CN105732807A
）需要3～5次才能获得较为理想的阳性血清
。
本专利技术以猪伪狂犬病毒
gB
蛋白和猪伪狂犬病毒
gD
蛋白作为联合抗原蛋白免疫健康阴性猪，免疫系统的应答反应明显优于猪伪狂犬病毒或其他抗原蛋白作为免疫原的情形
。
进而，本专利技术提供的猪伪狂犬病病毒阳性血清制备方法无需反复多次的免疫，短时间内即可获得较高效价的猪伪狂犬病毒阳性血清（
≥1:861
），能满足疫苗研发过程中涉及的各检验项目使用要求
。
[0013]同时，本专利技术提供的猪伪狂犬病病毒阳性血清制备方法具有生产周期短
、
安全风险控制要求低
、
生产成本低等优点
。
[0014]在本专利技术中，所述猪伪狂犬病毒
gB
蛋白和猪伪狂犬病毒
gD
蛋白的质量比为1‑
2:1
‑2，优选为1‑
1.5:1
‑
1.5
，更优选为1‑
1.2:1
‑
1.2
，更优选为1‑
1.1:1
‑
1.1
，更优选为
1:1。
上述优选比例的猪伪狂犬病毒
gB
蛋白和猪伪狂犬病毒
gD
蛋白，联用效果相较更好
。
[0015]在本专利技术中，所述猪伪狂犬病毒
gB
蛋白和猪伪狂犬病毒
gD
蛋白可以是本领域公知来源的抗原蛋白
。
[0016]在本专利技术较为优选的实施方式中，所述猪伪狂犬病毒
gB
蛋白选用申请公布号
CN110327461A
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
猪伪狂犬病病毒阳性血清，其特征在于，所述猪伪狂犬病病毒阳性血清以蛋白疫苗免疫健康阴性猪制得，所述蛋白疫苗中的抗原蛋白为猪伪狂犬病毒
gB
蛋白和猪伪狂犬病毒
gD
蛋白；所述猪伪狂犬病毒
gB
蛋白和猪伪狂犬病毒
gD
蛋白的质量比为1‑
2:1
‑2；所述猪伪狂犬病病毒阳性血清的中和抗体效价
≥1:861。2.
猪伪狂犬病病毒阳性血清的制备方法，其特征在于，使用蛋白疫苗免疫健康阴性猪，制得中和抗体效价
≥1:861
的阳性血清；所述蛋白疫苗中的抗原蛋白为猪伪狂犬病毒
gB
蛋白和猪伪狂犬病毒
gD
蛋白；所述猪伪狂犬病毒
gB
蛋白和猪伪狂犬病毒
gD
蛋白的质量比为1‑
2:1
‑
2。3.
根据权利要求2所述猪伪狂犬病病毒阳性血清的制备方法，其特征在于，所述猪伪狂犬病毒
gB
蛋白的氨基酸序列如
SEQ ID NO.1
所示；所述猪伪狂犬病毒
gD
蛋白的氨基酸序列如
SEQ ID NO.2
所示
。4.
根据权利要求2所述猪伪狂犬病病毒阳性血清的制备方法，其特征在于，所述免疫的接种剂量按每次接种的抗原蛋白总质量计，为
180
‑
220
μ
g/
头份
。5.
根据权利要求2所述猪伪狂犬病病毒阳性血清的制备方法，其特征在于，所述免疫的接种次数
≤3
次
。6.
根据权利要求2所述猪伪狂犬病病毒阳性...

【专利技术属性】
技术研发人员：武春芳，狄栋栋，特日棍，王秀斌，曾庆晶，王毛毛，高俊，谭海波，
申请(专利权)人：金宇保灵生物药品有限公司，
类型：发明
国别省市：