一种用于捕获HBV核心颗粒的IgG抗体及应用制造技术

本发明专利技术涉及医药技术领域，具体涉及一种用于捕获HBV核心颗粒的IgG抗体及应用，以提高HBV检测的精确性。本发明专利技术提供的IgG抗体，包括重链可变区与轻链可变区，重链可变区包含如SEQ ID NO.1所示的碱基序列，轻链可变区包含如SEQ ID NO.2所示的碱基序列。本发明专利技术的IgG抗体可用于细胞培养物和临床血清中HBcAg的分子检测，特异性强，灵敏度高，能够提高HBV诊断和监测的精确性，同时还可以用于乙肝疾病的其他治疗方法。治疗方法。治疗方法。

【技术实现步骤摘要】
一种用于捕获HBV核心颗粒的IgG抗体及应用


[0001]本专利技术涉及医药
，具体涉及一种用于捕获HBV核心颗粒的IgG抗体及应用。

技术介绍

[0002]乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)是一种双链DNA病毒,属于嗜肝DNA病毒科。乙型肝炎病毒是引起病毒性肝炎的最常见病原，可以通过血液、母婴、密切接触和性接触传染，人体感染乙肝病毒后，易引起慢性乙型肝炎，进而导致肝硬化或肝癌。据统计，世界上有2.92亿人是乙肝病毒携带者，中国大约有8600万人乙肝病毒携带者，因此，HBV感染仍然是世界范围内严重的公共卫生问题，如何预防和治疗慢性乙型肝炎仍是目前面临的严峻挑战。
[0003]现目前，利用免疫学反应原理来检测样本中是否存在某种物质的这一技术，被广泛应用于各个领域。由于免疫分子之间具有特异性结合的性能，例如抗体与抗原、半抗原/抗体等，因此可以利用该原理来检测各种生物样本中的被分析物质，以检测疾病和人类健康状况等目的。乙型肝炎病毒c抗原(hepatitis B core antigen,HBcAg)是乙型肝炎病毒的核心抗原，其存在几乎只与HBV感染相关，因此可以作为HBV感染的特异性标志物。同时，HBcAg可以在HBV感染的早期阶段就出现，甚至可以在病毒复制前出现，因此可以帮助早期诊断HBV感染。
[0004]然而，HBcAg存在许多突变型，其中一些突变型可能无法被传统的HBcAg检测方法所识别。这些突变型可能导致HBcAg的结构或表位发生改变，进而影响抗原
‑
>抗体的结合，使得传统的HBcAg检测方法无法准确检测到这些突变型HBcAg，从而影响检测结果的准确性。此外，HBcAg在血液中的浓度较低，因此对于低病毒载量的患者，检测的灵敏度较低，对HBV感染的诊断和监测的准确度也较低。
[0005]同时，绝大部分情况下，HBV核心颗粒外面包裹着一层表面抗原与磷脂双分子层形成的外膜，并不直接暴露，一部分现有技术认为在细胞培养的HBV感染模型和血清中存在着裸露的HBV核心颗粒。然而，临床患者的血清中是否存在裸露的HBV核心颗粒，还有待临床检测方法的进一步验证。同时，临床血清中的HBV核心颗粒是否能有效地被特异性的免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,IgG)抗体识别并捕获，也仍需更进一步的研究。
[0006]综上所述，目前仍有很多突变型的HBcAg未能被识别，对于HBV感染的诊断和监测的准确度也较低，当前市面上缺少有效、准确地用于检测HBV感染的抗体，因此急需进一步开发有效捕获HBV核心颗粒的抗体。

技术实现思路

[0007]本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种用于捕获HBV核心颗粒的IgG抗体，以提高HBV检测的精确性。
[0008]本专利技术提供的基础方案为：一种用于捕获HBV核心颗粒的IgG抗体，包括重链可变
区与轻链可变区，所述重链可变区包含如SEQ ID NO.1所示的碱基序列，所述轻链可变区包含如SEQ ID NO.2所示的碱基序列。
[0009]进一步，所述重链可变区与轻链可变区通过如SEQ ID NO.3所示的碱基链进行连接。
[0010]进一步，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。
[0011]进一步，所述重链可变区与轻链可变区通过如SEQ ID NO.7所示的氨基酸链进行连接。
[0012]进一步，所述重链可变区包含与SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列≥80％同源的氨基酸序列，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列≥80％同源的氨基酸序列。
[0013]本专利技术提供的第二个技术方案为：一种包含编码本专利技术任一所述的IgG抗体的核苷酸序列的核酸分子。
[0014]本专利技术提供的第三个技术方案为：一种含有上述核酸分子的表达盒、重组载体、重组细胞系。
[0015]本专利技术提供的第四个技术方案为：一种含有本专利技术任一所述的IgG抗体用于检测与诊断乙肝病毒的产品。
[0016]本专利技术提供的第五个技术方案为：一种含有上述核酸分子的生物材料。
[0017]本专利技术提供的第六个技术方案为：本专利技术所述的任一一种含用于捕获HBV核心颗粒的IgG抗体，涉及在制备用于检测与诊断乙肝病毒的产品中的应用；涉及在制备用于治疗与预防乙肝病毒所引起的疾病的药物中的应用。
[0018]本专利技术的有益效果：
[0019]当前市面上缺少有效、准确地用于检测HBV感染的抗体，本专利技术筛选出一种能满足科研及临床检测需求的IgG抗体，能够进一步填补市场上检测HBV表面抗原的抗体的空缺。本专利技术的IgG抗体可用于细胞培养物和临床血清中HBcAg的分子检测，特异性强，灵敏度高，能够提高HBV诊断和监测的精确性，同时还可以用于乙肝疾病的其他治疗方法。
附图说明
[0020]图1为本专利技术ELISA阳性杂交瘤细胞株的鉴定结果图。
[0021]图2为本专利技术蛋白电泳检测抗体纯度图。
[0022]图3为本专利技术HBcAg核心颗粒的电镜图。
[0023]图4为本专利技术抗体
‑
核心颗粒结合的亲和力检测结果图，其中(a)为分子相互作用动态拟合分析曲线，(b)为分子相互作用为稳态拟合分析曲线。
[0024]图5为本专利技术单链抗体
‑
核心颗粒结合的亲和力检测结果图，其中(a)为分子相互作用动态拟合分析曲线，(b)为分子相互作用为稳态拟合分析曲线。
具体实施方式
[0025]下面通过具体实施方式进一步详细的说明：
[0026]实施例一：用于捕获HBV核心颗粒的IgG抗体
[0027]用于捕获HBV核心颗粒的IgG抗体制备步骤如下：
[0028]1.重组HBcAg蛋白的制备
[0029]将分泌HBcAg蛋白的重组枯草芽孢杆菌于37℃摇床振荡培养48h，收集菌液，10000
×
g离心20min，弃沉淀，保留上清。上清用10倍体积的结合缓冲液(binding buffer：5mmol/L Imidazole，0.5mol/Lurea,1
×
CB solution,pH9.6)稀释后，充分混匀后置冰上备用。以下操作在4℃条件下进行，填装Ni
‑
NTA Agarose的亲和层析柱空柱管用10倍填料体积的binding buffer(冲洗并平衡，将上清稀释液加入填料柱管，速度为0.5mL/min；用10倍填料体积的洗涤缓冲液(washing buffer：20mmol/L Imidazole，0.5mol/Lurea,1
×
CBsolution,pH9.6)以1mL/min的速度洗涤3次；最后用洗脱液(elution buffer：300mmol/L Imidazole，0.5mol/L urea,1
×
CB solution,pH9.6本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于捕获HBV核心颗粒的IgG抗体，包括重链可变区与轻链可变区，其特征在于：所述重链可变区包含如SEQ ID NO.1所示的碱基序列，所述轻链可变区包含如SEQ ID NO.2所示的碱基序列。2.如权利要求1所述的用于捕获HBV核心颗粒的IgG抗体，其特征在于：所述重链可变区与轻链可变区通过如SEQ ID NO.3所示的碱基链进行连接。3.如权利要求1所述的用于捕获HBV核心颗粒的IgG抗体，其特征在于：所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。4.如权利要求3所述的用于捕获HBV核心颗粒的IgG抗体，其特征在于：所述重链可变区与轻链可变区通过如SEQ ID NO.7所示的氨基酸链进行连接。5.如权利要求3所述的用于捕获HBV核心颗粒的IgG...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡雪飞，平芳，金佳佩，马家秀，
申请(专利权)人：重庆明道捷测生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：