一种分离芫花条化学成分的方法技术

本发明专利技术提供一种分离芫花条化学成分的方法，其用硅胶柱色谱法对瑞香科植物芫花枝条的乙醇提取物经石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇深度萃取，进行化学成分的分离。室温萃取，节约能源并可避免萃取过程中有效成分的破坏；分离得比较彻底，共获得１５种化合物；采用理化及波谱分析方法，分别鉴定为：（１）十八碳酸单甘油酯、（２）邻苯二甲酸二丁酯、（３）棕榈酸、（４）β－谷甾醇、（５）咖啡酸十八烷酯、（６）咖啡酸正二十烷酯、（７）山奈酚、（８）西瑞香素、（９）芹菜素、（１０）紫丁香树脂醇、（１１）木犀草素、（１２）β－胡萝卜苷、（１３）刺五加苷Ｂ、（１４）松脂醇二葡萄糖苷、（１５）二氢刺五加苷Ｂ。其中，化合物（１）、（２）、（３）、（６）、（１０）、（１３）、（１４）和（１５）为首次分离得到。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于药用植物化学成分的分离，具体涉及。技术背景芫花(Dap/z"ege"^M'flS/e6.wZMcc)为瑞香^+植物，广泛分布于我国长江流域各省和黄河 流域的部分地区。芫花干燥的花蕾具有"泻水逐^:,解毒杀虫"之功"。目前对艽花的研究 主要集中在干芫花花蕾和芫花根上，且分离所得主要是香豆素、芫花辟、黄酮类化合物。由 芫花枝条的提取物制备的"消络痛片(或胶囊)"用于治疗风湿性关节炎，临床使用多年且效 果较好，但其所含成分及活性成分并不清楚。
技术实现思路
本专利技术的目的是通过研究芫花枝条的主要成分，并希望从中能够得到药理活性较强的化 合物。本专利技术是通过如下技术方案实施的研究，其特征是用硅胶柱色谱法对瑞香科植物芫花 (A/7力/ e ge/^wa 67e& ef Zwcc.)的枝条乙醇提取物的石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁 醇深度萃取，进行化学成分的分离，该方法分作如下步骤(1) 制备芫花枝条乙醇提取物 重量比例芫花枝条乙醇=1 : 1 ~ 2 干燥芫花枝条，常规净制、切段；乙醇含量为95±5%;室温下渗漉法提取3 ~ 4次，合并渗漉液，5 0 ~ 5 5 。C浓缩至稠膏状得浸膏；(2) 制备乙醇提取物的溶剂萃取物将上述芫花枝条浸膏均匀混悬于水中，芫花枝条浸膏混悬液，先后分别用石油醚、乙酸 乙酯和水饱和的正丁醇萃取；①石油醚萃取配量固液比为芫花枝条浸膏重量石油醚体积=1 : 10~14每次萃取时，混悬液加配量的石油醚，室温下搅拌3h，分离萃取石油醚层；反复萃取3 次，合并石油醚萃取液；备用；石油醚萃取液进行珪胶柱层析珪胶柱高120cm,柱径10cm,柱温室温；环己烷一 乙酸 乙酯梯度洗脱，梯度范围，环己烷一乙酸乙酯在起始液和终止液中的浓度分别是100% : 0% —5 0% : 5 0%,得到1 XV共15个部分；a. 将第III部分过小珪胶柱，小硅胶柱200 300目，柱径2. 5cm,柱高45cm，柱温室温， 环己烷一 乙酸乙酯梯度洗脱，梯度范围，环己烷一 乙酸乙酯在起始液和终止液中的浓度分别 是100% : 0°/ —50% : 5(W，得到化合物1, 3和4;b. 将第V部分过小硅胶柱'小硅胶柱200 300目，硅胶柱高45cm，柱径2. 5 cm，柱温 室温，环己烷一乙酸乙酯梯度洗脱，梯度范围，环己烷一乙酸乙酯在起始液和终止液中的浓度分别是100% : 0% —50% : 50%;环己烷乙酸乙酯=80% : 20%时，得到无色油状液体为化合物2;环己烷乙酸乙酯=75°/。25°/。时，根据极性的不同，依次得白色粉末为化合物5和6;② 乙酸乙酯萃取—配量固液比为芫花枝条浸膏重量乙酸乙酯体积=l : 6~10每次萃取时，混悬液加配量的乙酸乙酯，室温下搅拌3 h,分离萃取乙酸乙酯层，反复 萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液；备用；乙酸乙酯萃取液进行硅胶柱层析硅胶柱高120cm,柱径10cm,柱温室温；氯仿一曱醇 梯度洗脱，梯度范围，氯仿一曱醇在起始液和终止液中的浓度分别是100% : 0%-85% : 15%;氯仿曱醇=100% : 85%时得到1-XX共20个部分；a. 将第II部分过小硅胶柱，小硅胶柱200 300目，柱径2. 5cra,柱高45cm,柱温室温， 以环己烷一丙酮梯度洗脱，梯度范,，环己烷一丙酮在起始液和终止液中的浓度分别是 画0%—60% : 40%;环己烷丙酮=60% : 40%时，所得洗脱液经进一步Sephadex LH-20凝胶柱色谙进行纯化， 经丙酮重结晶得化合物7;b. 将第IV部分过小硅胶柱，硅胶柱200 ~ 300目，柱径2. 5cm，柱高45cm,柱温室温， 以氯仿一甲醇梯度洗脱，梯度范围，氯仿一甲醇在起始液和终止液中的浓度分别是100% : 0% —85% : 15%;氯仿曱醇=9 0% : 10%时，洗脱部分析出晶体，经重结晶得化合物8; 氯仿曱醇=80% : 20%时，洗脱液进一步进行Sephadex LH-20凝胶柱色谱进行纯化，经 丙酮重结晶得化合物9;c. 将第V部分过小硅胶柱，小珪胶柱200- 300目，珪胶柱高45 cm，柱径2. 5 cm,柱 温室温，氯仿一曱醇梯度洗脱，梯度范围，氯仿一曱醇在起始液和终止液中的浓度分别是 100% : 0% —85% : 15%;氯仿曱醇=93% : 7%时，将洗脱液浓缩，丙酮溶解，静置24 h析出晶体得化合物10; 然后再用100°/。曱醇将第V部分全部洗脱下来，浓缩、丙酮溶解，静置24h, 析出晶体为化合物11;d. 将第X部分过小珪胶柱，小硅胶柱200 - 300目，硅胶柱柱高45cm，柱径2. 5 cm，柱 温室温，氯仿一甲醇梯度洗脱，梯度范围，氯仿一曱醇在起始液和终止液中的浓度分别是 100% : 0% —85% : 15%;氯仿曱醇=85% : 15°/ 时，洗脱液析出晶体，经曱醇重结晶得化合物12;③ 水饱和的正丁醇萃取配量固液比为芫花枝条浸膏重量水饱和的正丁醇体积=1 : 10~30;每次萃取时，混悬液加芫花枝条浸膏9 - 10倍量水饱和的正丁醇，室温下搅拌3 h;反复萃取3次，合并水饱和的正丁醇萃取液；备用；水饱和的正丁醇萃取液进4于石圭;^柱层析珪胶柱高120cm,柱径10cm，柱温室温；氯仿一甲醇梯度洗脱，梯度范围，氯仿一曱醇在起始液和终止液中的浓度分别是100°/ :0% 一 60% :歌得到I ~ X 10个部分；将第V部分过小硅胶柱，小硅胶柱200 - 300目，硅胶柱柱高45cra,柱径2. 5 cm,柱温 室温，氯仿一甲醇梯度洗脱；梯度范围，氯仿一曱醇在起始液和终止液中的浓度分别是 100%: 0°/。— 60%: 40%;氯仿:曱醇=93% : 7°/ 时，得化合物13;氯仿曱醇=90% : 10 /。时，得化合物14;氯仿曱醇=92% : 8%时，得化合物15。除第一次石油醚萃取，洗脱得到1 XV共15个部分；第二次乙酸乙酯萃取，洗脱得到 I ~ XX共20个部分；第三次水饱和的正丁醇萃取，洗脱得到I ~ X共1G个部分；按上述技术 方案方法获得了 1 15种化合物以外，暂没有分离得到其它单体化合物。上述的，其特征是所述的该方法分离得到15个化合物, 采用理化及波谙分析方法，分别鉴定为(1)十八碳酸单甘油酯、(2)邻苯二甲酸二丁酯、(3)棕榈酸、(4) --谷甾醇、(5) 咖啡酸十八烷酯、(6)咖啡酸正二十烷酯、(7)山奈酚、(8)西瑞香素、(9)芽菜素、(10) 紫丁香树脂醇、(ll)木犀草素、(12) ^-胡萝卜苷、(13)刺五加苷B、 (14)松脂醇二葡萄 糖苷、(15) 二氢剌五加苷B;上述的，其特征是所述的化合物((l)十八碳酸单甘油 酯，(2)邻笨二甲酸二丁酯，(3)棕榈酸，(6 )咖啡酸正二十烷酯，(10 )紫丁香树脂醇， (13 )刺五加苷B，( l4 )松脂醇二葡萄糖苷，(15 ) 二氢刺五加苷B;为首次从芫花枝条中 分离得到。本专利技术的优点是室温萃取，节约能源并可避免萃取过程中有效成分的破坏；芫花枝条 乙醇提取物经过石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇深度苯取，进行化学成分分离得比较彻 底，共获得15种化合物；其中，化合物(1 )十本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离芫花条化学成分的方法，其特征是用硅胶柱色谱法对瑞香科植物芫花Ｄａｐｈｎｅ　ｇｅｎｋｗａ　Ｓｉｅｂ．ｅｔ　Ｚｕｃｃ．枝条的乙醇提取物经石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇深度萃取，进行化学成分的分离，该方法分作如下步骤：　（１ ）制备芫花枝条乙醇提取物　重量比例：芫花枝条∶乙醇＝１∶１～２　干燥芫花枝条，常规净制、切段；乙醇含量为９５±５％；　室温下渗漉法提取３～４次，合并渗漉液，５０～５５℃浓缩至稠膏状得浸膏；　（２）制备乙醇提取物的溶剂 萃取物　将上述芫花枝条浸膏均匀混悬于水中，芫花枝条浸膏混悬液，先后分别用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取；　①石油醚萃取　配量：固液比为芫花枝条浸膏重量∶石油醚体积＝１∶１０～１４　每次萃取时，混悬液加配量的石油 醚，室温下搅拌３ｈ，分离萃取石油醚层；反复萃取３次，合并石油醚萃取液；备用；　石油醚萃取液进行硅胶柱层析：硅胶柱高１２０ｃｍ，柱径１０ｃｍ，柱温室温；环己烷－乙酸乙酯梯度洗脱，梯度范围，环己烷－乙酸乙酯１００％∶０％→５０％∶５０％， 得到Ⅰ～ⅩⅤ共１５个部分；　ａ．将第Ⅲ部分过小硅胶柱，小硅胶柱２００～３００目，柱径２．５ｃｍ，柱高４５ｃｍ，柱温室温，环己烷－乙酸乙酯梯度洗脱，梯度范围，环己烷－乙酸乙酯１００％∶０％→５０％∶５０％，得到化合物１，３和４；　 ｂ．将第Ⅴ部分过小硅胶柱，小硅胶柱２００～３００目，硅胶柱高４５ｃｍ，柱径２．５ｃｍ，柱温室温，环己烷－乙酸乙酯梯度洗脱，梯度范围，环己烷－乙酸乙酯１００％∶０％→５０％∶５０％；　环己烷∶乙酸乙酯＝８０％∶２０％时，得到无色油状液体 为化合物２；　环己烷∶乙酸乙酯＝７５％∶２５％时，根据极性的不同，依次得白色粉末为化合物５和６；　②乙酸乙酯萃取　配量：固液比为芫花枝条浸膏重量∶乙酸乙酯体积＝１∶６～１０　每次萃取时，混悬液加配量的乙酸乙酯，室温下 搅拌３ｈ，分离萃取乙酸乙酯层，反复萃取３次，合并乙酸乙酯萃取液；备用；　乙酸乙酯萃取液进行硅胶柱层析：硅胶柱高１２０ｃｍ，柱径１０ｃｍ，柱温室温；氯仿－甲醇梯度洗脱，梯度范围，氯仿－甲醇１００％∶０％→８５％∶１５％；　氯仿∶甲 醇＝１００％∶８５％时得到Ⅰ～ⅩⅩ共２０个部分；　ａ．将第Ⅱ部分过小硅胶柱，小硅胶柱２００～３００目，柱径２．５ｃｍ，柱高４５...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郭桂秋，姜永涛，徐贝贝，郗光建，翟勇，李钦刚，马斐，
申请(专利权)人：山东鲁泰环中制药有限公司，
类型：发明
国别省市：37[中国|山东]