一种去除杂交瘤细胞中细菌污染的方法技术

本发明专利技术公开一种去除杂交瘤细胞中细菌污染的方法，其中，所述去除杂交瘤细胞中细菌污染的方法包括以下步骤：将细菌污染的杂交瘤细胞离心弃上清，加入培养基重悬，得到重悬的杂交瘤细胞；向小鼠的腹腔内注射所述重悬的杂交瘤细胞，得到实验小鼠，培养后，取出小鼠的腹腔内的液体，得第一杂交瘤细胞；将所述第一杂交瘤细胞转入无菌离心管内，离心弃上清，用培养基重悬细胞沉淀，细胞悬液铺于板孔中培养，得第二杂交瘤细胞；将第二杂交瘤细胞进行亚克隆，得亚克隆细胞；将所述亚克隆细胞扩大培养，得到净化的杂交瘤细胞。本发明专利技术提供的技术方案能够有效的净化细胞，得到特异性及纯净性良好的杂交瘤细胞。的杂交瘤细胞。的杂交瘤细胞。

【技术实现步骤摘要】
一种去除杂交瘤细胞中细菌污染的方法


[0001]本专利技术涉及兽用生物制品
，特别涉及一种去除杂交瘤细胞中细菌污染的方法。

技术介绍

[0002]杂交瘤细胞(hybirdoma)是一种在制备单克隆抗体过程中，用在体外能迅速增殖的骨髓瘤细胞和在体外不能长期生存B淋巴细胞，在聚乙二醇(PEG)作用下融合而成的细胞。所得的杂交瘤细胞承袭了两组亲代细胞的遗传特性，既保持了骨髓瘤细胞在体外迅速增殖传代能力，又继承了免疫细胞合成与分泌能力。杂交瘤技术在医学、农业、食品、生物技术工业和基础理论研究上的广泛应用。
[0003]细菌污染是细胞培养尤其是杂交瘤细胞培养中最为需要注意的事情，有效地控制分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞的污染，已成为进行这项研究工作中常遇到的问题。大部分细胞被细菌污染以后会严重影响细胞的状态，导致细胞死亡。由于细菌耐药性的产生，传统应用双抗处理多难于凑效。

技术实现思路

[0004]本专利技术的主要目的是提供一种去除杂交瘤细胞中细菌污染的方法，旨在有效的净化细胞，得到特异性及纯净性良好的杂交瘤细胞。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提出的一种去除杂交瘤细胞中细菌污染的方法，包括以下步骤：
[0006]将细菌污染的杂交瘤细胞离心弃上清，加入培养基重悬，得到重悬的杂交瘤细胞；
[0007]向小鼠的腹腔内注射所述重悬的杂交瘤细胞，得到实验小鼠，培养后，取出小鼠的腹腔内的液体，得第一杂交瘤细胞；
[0008]将所述第一杂交瘤细胞转入无菌离心管内，离心弃上清，用培养基重悬细胞沉淀，细胞悬液铺于板孔中培养，得第二杂交瘤细胞；
[0009]将所述第二杂交瘤细胞进行亚克隆，得亚克隆细胞；
[0010]将所述亚克隆细胞扩大培养，得到净化的杂交瘤细胞。
[0011]可选地，在将细菌污染的杂交瘤细胞离心弃上清，加入培养基重悬，得到重悬的杂交瘤细胞的步骤中，所述培养基包括基础DMEM高糖培养基。
[0012]可选地，在向小鼠的腹腔内注射所述重悬的杂交瘤细胞，得到实验小鼠，培养后，取出小鼠的腹腔内的液体，得第一杂交瘤细胞的步骤中，所述小鼠为10～15周龄。
[0013]可选地，在向小鼠的腹腔内注射所述重悬的杂交瘤细胞，得到实验小鼠，培养后，取出小鼠的腹腔内的液体，得第一杂交瘤细胞的步骤中，所述小鼠的体重为20g以上雌性小鼠。
[0014]可选地，在向小鼠的腹腔内注射所述重悬的杂交瘤细胞，得到实验小鼠，培养后，取出小鼠的腹腔内的液体，得第一杂交瘤细胞的步骤中，所述重悬的杂交瘤细胞的注射量
为4
×
106～10
×
106个细胞/只。
[0015]可选地，在向小鼠的腹腔内注射所述重悬的杂交瘤细胞，得到实验小鼠，培养后，取出小鼠的腹腔内的液体，得第一杂交瘤细胞的步骤中，所述重悬的杂交瘤细胞的注射的量为0.4～0.6ml/只。
[0016]可选地，在将所述第一杂交瘤细胞转入无菌离心管内，离心弃上清，用培养基重悬细胞沉淀，细胞悬液铺于板孔中培养，得第二杂交瘤细胞的步骤中，所述培养基为含15～25％血清的DMEM高糖培养基。
[0017]可选地，在将第二杂交瘤细胞进行亚克隆，得亚克隆细胞的步骤中，采用亚克隆板进行亚克隆，所述亚克隆板包括多个孔，每个孔的杂交瘤细胞含量为1～3个。
[0018]可选地，步骤在向小鼠的腹腔内注射所述重悬的杂交瘤细胞，得到实验小鼠，培养后，取出小鼠的腹腔内的液体，得第一杂交瘤细胞包括：在向小鼠的腹腔内注射所述重悬的杂交瘤细胞，得到实验小鼠，培养后，观察7～9天，取出小鼠的腹腔内的液体，得第一杂交瘤细胞。
[0019]可选地，在将所述第一杂交瘤细胞转入无菌离心管内，离心弃上清，用培养基重悬细胞沉淀，细胞悬液铺于板孔中培养，得第二杂交瘤细胞的步骤中，所述培养的时间为2～3天。
[0020]本专利技术技术方案通过将细菌污染的杂交瘤细胞，注射至小鼠腹腔，取出小鼠腹腔液体，经离心取细胞沉淀，培养基重悬后培养，然后进行亚克隆，及扩大培养，得到净化的杂交瘤细胞，通过本方案处理细菌污染的杂交瘤细胞，有效的净化细胞，得到特异性及纯净性良好的杂交瘤细胞。
附图说明
[0021]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图示出的结构获得其他的附图。
[0022]图1为本专利技术实施例被细菌污染的杂交瘤细胞；
[0023]图2为本专利技术实施例接种污染杂交瘤细胞后，腹部膨大的Balb/c雌性小鼠；
[0024]图3为本专利技术实施例挑选扩大培养净化后的杂交瘤细胞；
[0025]图4为本专利技术实施例杂交瘤细胞特异性间接免疫荧光检验荧光图；
[0026]图5为本专利技术实施例杂交瘤细胞特异性免疫印迹检验图。
[0027]本专利技术目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。
具体实施方式
[0028]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。另外，全文中出现的“和/或”的含义，包括三个并列的方案，以“A和/或B”为例，包括A方案、或B方案、或A和B同时满足的方案。此外，各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但
是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本专利技术要求的保护范围之内。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0029]细菌污染是细胞培养尤其是杂交瘤细胞培养中最为需要注意的事情，有效地控制分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞的污染，已成为进行这项研究工作中常遇到的问题。大部分细胞被细菌污染以后会严重影响细胞的状态，导致细胞死亡。由于细菌耐药性的产生，传统应用双抗处理多难于凑效。
[0030]鉴于此，本专利技术提出一种去除杂交瘤细胞中细菌污染的方法，旨在有效的净化细胞，得到特异性及纯净性良好的杂交瘤细胞。参照图1至5，图1为被细菌污染的杂交瘤细胞；图2为接种污染杂交瘤细胞后，腹部膨大的Balb/c雌性小鼠；图3为挑选扩大培养净化后的杂交瘤细胞；图4为杂交瘤细胞特异性间接免疫荧光检验荧光图；图5为杂交瘤细胞特异性免疫印迹检验图。
[0031]本专利技术提出一种去除杂交瘤细胞中细菌污染的方法，包括以下步骤：
[0032]S1、将细菌污染的杂交瘤细胞离心弃上清，加入培养基重悬，得到重悬的杂交瘤细胞；
[0033]本步骤中，取被污染的杂交瘤细胞培养瓶，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种去除杂交瘤细胞中细菌污染的方法，其特征在于，包括以下步骤：将细菌污染的杂交瘤细胞离心弃上清，加入培养基重悬，得到重悬的杂交瘤细胞；向小鼠的腹腔内注射所述重悬的杂交瘤细胞，得到实验小鼠，培养后，取出小鼠的腹腔内的液体，得第一杂交瘤细胞；将所述第一杂交瘤细胞转入无菌离心管内，离心弃上清，用培养基重悬细胞沉淀，细胞悬液铺于板孔中培养，得第二杂交瘤细胞；将所述第二杂交瘤细胞进行亚克隆，得亚克隆细胞；将所述亚克隆细胞扩大培养，得到净化的杂交瘤细胞。2.如权利要求1所述的去除杂交瘤细胞中细菌污染的方法，其特征在于，在将细菌污染的杂交瘤细胞离心弃上清，加入培养基重悬，得到重悬的杂交瘤细胞的步骤中，所述培养基包括基础DMEM高糖培养基。3.如权利要求1所述的去除杂交瘤细胞中细菌污染的方法，其特征在于，在向小鼠的腹腔内注射所述重悬的杂交瘤细胞，得到实验小鼠，培养后，取出小鼠的腹腔内的液体，得第一杂交瘤细胞的步骤中，所述小鼠为10～15周龄。4.如权利要求1所述的去除杂交瘤细胞中细菌污染的方法，其特征在于，在向小鼠的腹腔内注射所述重悬的杂交瘤细胞，得到实验小鼠，培养后，取出小鼠的腹腔内的液体，得第一杂交瘤细胞的步骤中，所述小鼠的体重为20g以上雌性小鼠。5.如权利要求1所述的去除杂交瘤细胞中细菌污染的方法，其特征在于，在向小鼠的腹腔内注射所述重悬的杂交瘤细胞，得到实验小鼠，培养后，取出小鼠的腹腔内的液体，得第一杂交瘤细胞的步骤中，所述重悬的杂交瘤细胞的注射量为4
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【专利技术属性】
技术研发人员：张敏，李建，石宝兰，漆世华，薛霜，朱薇，谢红玲，郑良益，牟林琳，秦红刚，李婷婷，
申请(专利权)人：国药集团动物保健股份有限公司，
类型：发明
国别省市：