【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，特别涉及一种病原组织毒的培养方法。
技术介绍
1、猪呼吸道疾病综合症(porcine respiratory disease complex,prdc)是一种由多种细菌、病毒、支原体、寄生虫等多方面因素共同作用所引起的猪呼吸道疾病总称。在我国的各种大小规模猪场均十分流行，保育猪和生长育成猪多发，发病率通常可达到30％以上，通常患病猪年龄越小，死亡率越高。临床症状多表现为：食欲降低、咳嗽、呼吸比较困难、部分严重的造成死亡，造成的经济损失很大。引起prdc的病因主要有病毒性传染病，如猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病、猪流行性感冒等，还有引起免疫抑制性疾病的病毒，如猪圆环病毒2型+3型；细菌性传染病，如猪气喘病、猪传染性胸膜肺炎、猪传染性萎缩性鼻炎、猪链球菌病、猪肺疫等；寄生虫性传染病，如附红细胞体、蛔虫病等。该病的防治诱因不同，防治措施有差异，其中，细菌性和寄生虫可通过抗生素和驱虫达到较好的治疗效果，但由病毒引起的prdc治疗成本高，效果差。疫苗免疫是预防prdc较经济的手段之一。
2、疫苗研发过程复杂、周期长，且整个研发过程都十分依赖目的病原体用于检验试制疫苗的保护效果，为疫苗优化指示方向。病毒的分离、鉴定、理化特性分析是疫苗研发的基础，因此，检验用强毒纯粹、毒力稳定、含毒量高将有助于疫苗产品的研发。
3、根据柯赫法则，传染病原体分离是疫病防治的基础，对分离病原的特性分析是影响疫情防治的关键；鉴于目前国内猪场多存在较为复杂的病原环境，疾病多以混合感染出现，极难获得感染单一病原的病理组
4、通过体内与体外培养是病原体的扩繁主要方式，体外培养是基于对病毒理化特性研究的基础上，通过对多个细胞系同步培养与验证，筛选适宜培养体系进行体外扩繁；但对于部分病原体，尤其是新发病病原体，体外培养需要经过较长时间的摸索与验证，无法满足疫情防控要求。因此靶动物体内扩繁病原体就十分必要了，另外，对于体外扩繁多代的病原体，也需要用靶动物进行毒力验证或复壮，确保病毒在体外扩繁时毒力稳定。
5、肌注是靶动物体内扩繁病原体最常用的感染方式，对于prdc病原体来说，肌注效果并不理想。近来，肌注接种和滴鼻接种配合使用来进行prdc病原体的扩繁取得了比较好的应用效果，接种时的接种组织毒的病毒滴度需达1×106拷贝数/ml以上，接种量不低于2ml，扩繁成功率较高。但肌注和滴鼻均需对组织毒用0.22μm过滤后接种，否则接种后，肌注极可能会引起强烈的副反应甚至死亡，滴鼻也会引起动物剧烈的咳嗽类反应而导致接种物损失殆尽。实际接种过程显示，即使采用0.22μm过滤后，滴鼻时多会引起种毒从口鼻喷出，且接种物刺激鼻黏膜、喉头等部位仍会引起机体的咳嗽类反应，导致实际接种物的极大损耗，实际接种量未知，即使接种数倍组织毒，也不敢保证滴鼻接种一定有效，难以避免扩繁失败。组织毒经0.22μm过滤前后，病毒滴度可能会下降2个滴度(100倍)左右，病毒滴度不足则需将组织毒进行浓缩，并重新检测以确保病毒滴度达要求，故组织毒需求量需提高数百倍。养殖一线的病料绝大部分为混合感染，从中分离出符合某一prdc病原体扩繁用组织毒种毒制备用的组织病料很少，制备的组织毒的病毒总量有限，远远达不到肌注+滴鼻接种扩繁的病毒总量要求，需要累积多次以满足一次扩繁需求。
技术实现思路
1、本专利技术的主要目的是提出一种病原组织毒的培养方法，旨在解决肌注+滴鼻接种培养病毒，需要接种的种毒剂量大的问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提出一种病原组织毒的培养方法，包括以下步骤：
3、s10、获取猪呼吸道疾病的种毒；
4、s20、将获取的所述种毒从猪的气管注入猪的体内，获得患有对应疾病症状的实验猪；
5、s30、饲养至所述实验猪患有的疾病症状开始减轻时，解剖所述实验猪，以获取所述病原组织毒。
6、可选地，步骤s10包括：
7、s11、将猪呼吸道疾病的病原组织毒从患病的猪身上分离出来，获得分离出的病原组织毒；
8、s12、将所述分离出的病原组织毒进行鉴定，获得所述的种毒。
9、可选地，步骤s20包括：
10、s21、筛选出健康的实验猪；
11、s22、将所述实验猪固定；
12、s23、将获取的所述种毒注射到固定好的猪的气管内，获得患有对应疾病症状的实验猪。
13、可选地，步骤s22中，使用固定装置固定所述实验猪，所述固定装置包括工作台和固定件，所述固定件，设于所述工作台上，所述固定件包括身体固定件以及四肢固定件。
14、可选地，所述身体固定件包括固定网，所述固定网一侧边与所述工作台的一侧边连接，用于罩住所述实验猪的身体。
15、可选地，所述固定网上开设有开口，用以露出所述实验猪的颈部。
16、可选地，所述四肢固定件包括四个固定杆，分别与所述实验猪的四肢相对应，每个固定杆上行均设有绑带。
17、可选地，每个固定杆均与所述工作台滑动连接，沿远离或靠近所述实验猪的方向移动；和/或，
18、所述四个固定杆包括两个前肢固定杆和两个后肢固定杆，所述两个前肢固定杆与所述工作台滑动连接，沿靠近或远离所述两个后肢固定杆的方向移动。
19、可选地，所述固定装置还包括用于放置所述实验猪的承重托板，所述承重托板设于所述工作台上，所述四个固定杆夹设在所述承重托板的外侧，所述承重托板靠近用于固定后肢的固定杆的一端，与所述工作台铰接，另一端的下方设有抬升件，用于抬高或降低所述承重托板的另一端。
20、可选地，所述承重托板上滑动设有颈托，所述颈托沿靠近或远离用于固定后肢的固定杆的方向移动。
21、本专利技术提供的技术方案中，在实验猪清醒的状态下进行气管接种，能够避免出现麻醉时种毒液集中进入肺脏而引起窒息的状况出现，同时采用气管接种，能够直达靶组织，损失小，种毒需求量低；通过种毒稀释，体积增大，可流入更多支气管，接触更多靶细胞，提高制备效率；采用本源动物制备组织毒，毒力有保障。
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1.一种病原组织毒的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的病原组织毒的培养方法，其特征在于，步骤S10包括：
3.如权利要求1所述的病原组织毒的培养方法，其特征在于，步骤S20包括：
4.如权利要求3所述的病原组织毒的培养方法，其特征在于，步骤S22中，使用固定装置固定所述实验猪，所述固定装置包括：
5.如权利要求4所述的病原组织毒的培养方法，其特征在于，所述身体固定件包括固定网，所述固定网一侧边与所述工作台的一侧边连接，用于罩住所述实验猪的身体。
6.如权利要求5所述的病原组织毒的培养方法，其特征在于，所述固定网上开设有开口，用以露出所述实验猪的颈部。
7.如权利要求4所述的病原组织毒的培养方法，其特征在于，所述四肢固定件包括四个固定杆，分别与所述实验猪的四肢相对应，每个固定杆上行均设有绑带。
8.如权利要求7所述的病原组织毒的培养方法，其特征在于，每个固定杆均与所述工作台滑动连接，沿远离或靠近所述实验猪的方向移动；和/或，
9.如权利要求7所述的病原组织毒的培
10.如权利要求9所述的病原组织毒的培养方法，其特征在于，所述承重托板上滑动设有颈托，所述颈托沿靠近或远离用于固定后肢的固定杆的方向移动。
...【技术特征摘要】
1.一种病原组织毒的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的病原组织毒的培养方法，其特征在于，步骤s10包括：
3.如权利要求1所述的病原组织毒的培养方法，其特征在于，步骤s20包括：
4.如权利要求3所述的病原组织毒的培养方法，其特征在于，步骤s22中，使用固定装置固定所述实验猪，所述固定装置包括：
5.如权利要求4所述的病原组织毒的培养方法，其特征在于，所述身体固定件包括固定网，所述固定网一侧边与所述工作台的一侧边连接，用于罩住所述实验猪的身体。
6.如权利要求5所述的病原组织毒的培养方法，其特征在于，所述固定网上开设有开口，用以露出所述实验猪的颈部。
7.如权利要求4所述的病原组织毒的培养方法，其特...
【专利技术属性】
技术研发人员：秦涛，张飞雁，秦红刚，周平，何珊，冯钊，侯林静，邓永欢，郑佳，刘项羽，张冶中，谢红玲，
申请(专利权)人：国药集团动物保健股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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