猪圆环病毒III型重组Cap蛋白、其组装的病毒样颗粒及应用制造技术

本发明专利技术的主要目的在于提供一种猪圆环病毒III型重组Cap蛋白、其组装的病毒样颗粒及应用。本发明专利技术中，通过将野生的猪圆环病毒III型Cap蛋白N端进行去除核定位信号序列，得到重组猪圆环病毒III型Cap蛋白，在大肠杆菌中可进行可大量表达，且能自组装成病毒样颗粒。且能自组装成病毒样颗粒。且能自组装成病毒样颗粒。

【技术实现步骤摘要】
猪圆环病毒III型重组Cap蛋白、其组装的病毒样颗粒及应用


[0001]本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及一种猪圆环病毒III型重组Cap蛋白、其组装的病毒样颗粒及应用。

技术介绍

[0002]2016年，美国某母猪场暴发了猪皮炎与肾病综合征(PDNS)和繁殖障碍的临床症状，经检测猪圆环病毒II型PCV2呈阴性，随后采用宏基因组测序的技术发现了猪圆环病毒III型(PCV3)。
[0003]通过系统发育树分析发现猪圆环病毒I型(PCV1)和PCV2的Cap蛋白核苷酸相似性为67％，PCV1和PCV3的Cap蛋白核苷酸的相似度更低，仅仅为24％，同样PCV2和PCV3中Cap蛋白核苷酸相似度仅为26～37％，可见现有的圆环疫苗对新型的PCV3无交叉保护能力。
[0004]为研发可以预防PCV3的疫苗，研究人员曾尝试使用PCV3阳性组织病料匀浆接种感染猪肾细胞(PK
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15)和猪睾丸细胞(ST)(PALINSKI et al.,2017b,FACCINI et al.,2017)，这些病毒分离试验均未获得成功。传代细胞系接种病毒后，并未观察到细胞病变的现象产生，利用特异性PCR检测病毒基因组的增殖情况，发现病毒基因组含量在每次细胞传代后并没有增加(PALINSKI et al.,2017b,FACCINI et al.,2017)。因此，目前PCV3毒株分离的困难严重限制了病毒的进一步深入研究。
[0005]制备病毒衣壳结构蛋白，并进行组装是得到病毒样颗粒的重要方法，申请号为201810912587.1的中国专利公开了采用杆状病毒的制备PCV3 Cap蛋白的方法，且该蛋白也并未进一步报道能进行自组装产生病毒样颗粒。

技术实现思路

[0006]本专利技术的主要目的在于提供一种猪圆环病毒III型重组Cap蛋白、其组装的病毒样颗粒及应用，旨在提供一种可以大肠杆菌为感受态细胞，能够自组装生产病毒样颗粒的重组蛋白。
[0007]为达到上述目的，本专利技术提供一种猪圆环病毒III型重组Cap蛋白，所述猪圆环病毒III型重组Cap蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
[0008]此外，本专利技术还提供一种编码上述猪圆环病毒III型重组Cap蛋白的基因，所述编码猪圆环病毒III型重组Cap蛋白的基因的序列如SEQ ID NO：2所示。
[0009]此外，本专利技术还提供一种重组蛋白，所述重组蛋白包括活性部以及融合短肽，所述活性部的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述融合短肽连接于所述活性部的C端。
[0010]可选地，所述融合短肽选自如SEQ ID NO：3所示的多肽、如SEQ ID NO：4所示的多肽和如SEQ ID NO：5所示的多肽中的任意一种。
[0011]此外，本专利技术还提供一种编码上述重组蛋白的基因。
[0012]此外，本专利技术还提供一种重组载体，所述重组载体包含上述所述的编码基因。
[0013]此外，本专利技术还提供一种宿主，所述宿主包含上述重组载体。
[0014]此外，本专利技术还提供上述猪圆环病毒III型重组Cap蛋白、其编码基因、上述重组蛋白、其编码基因、上述的重组载体或如上述宿主在如下任一方面的应用：
[0015]制备病毒样颗粒；以及，
[0016]制备可引起生物体对于猪圆环病毒III型免疫性应答的制剂。
[0017]此外，本专利技术还提供一种病毒样颗粒，所述病毒样颗粒由上述蛋白自组装而成。
[0018]此外，本专利技术还提供一种上述病毒样颗粒在制备可引起生物体对于猪圆环病毒III型免疫性应答的制剂上的用途。
[0019]本专利技术中，通过将野生的猪圆环病毒III型Cap蛋白N端的进行去除核定位信号序列，得到重组猪圆环病毒III型Cap蛋白，在大肠杆菌中表达量增大，且能自组装成病毒样颗粒。
附图说明
[0020]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅为本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0021]图1为实施例1扩增片段检测图；
[0022]图2为实施例1重组质粒PCR检测结果图；
[0023]图3为实施例1重组蛋白表达检测图；
[0024]图4为实施例1纯化后的重组蛋白表达检测图；
[0025]图5为实施例1纯化后的重组蛋白电镜观察图片；
[0026]图6为对比例1扩增片段检测图；
[0027]图7为对比例1重组质粒PCR检测结果图；
[0028]图8为对比例1纯化后的重组蛋白表达检测图；
[0029]图9为对比例1在纯化过程中自组装生成的VLPs检测图；
[0030]图10为实施例2～4的扩增片段检测图；
[0031]图11为实施例2～4重组质粒PCR检测结果图；
[0032]图12为实施例2自组装生成的VLPs检测图；
[0033]图13为实施例3在纯化过程中自组装生成的VLPs检测图；
[0034]图14为实施例4在纯化过程中自组装生成的VLPs检测图；
[0035]图15为实施例5抗体检测图。
[0036]本专利技术目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。
具体实施方式
[0037]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。
[0038]需要说明的是，实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。另外，
全文中出现的“和/或”的含义，包括三个并列的方案，以“A和/或B”为例，包括A方案、或B方案、或A和B同时满足的方案。此外，各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本专利技术要求的保护范围之内。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0039]鉴于现有的猪圆环病毒III型Cap蛋白制备并不能以大肠杆菌为载体，且自组装成病毒样颗粒。本专利技术提供一种猪圆环病毒III型重组Cap蛋白，所述猪圆环病毒III型重组Cap蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
[0040]本专利技术中，通过将野生的猪圆环病毒III型Cap蛋白N端的进行去除核定位信号序列，C端融合短肽，得到重组猪圆环病毒III型Cap蛋白，在大肠杆菌中表达量增大，且能自组装成病毒样颗粒。
[0041]此外，本专利技术还提供一种编码上述猪圆环病毒III本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种猪圆环病毒III型重组Cap蛋白，其特征在于，所述猪圆环病毒III型重组Cap蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。2.一种编码如权利要求1所述的猪圆环病毒III型重组Cap蛋白的基因，其特征在于，所述编码猪圆环病毒III型重组Cap蛋白的基因的序列如SEQ ID NO：2所示。3.一种重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白包括活性部以及融合短肽，所述活性部的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述融合短肽连接于所述活性部的C端。4.如权利要求3所述的重组蛋白，其特征在于，所述融合短肽选自如SEQ ID NO：3所示的多肽、如SEQ ID NO：4所示的多肽和如SEQ ID NO：5所示的多肽中的任意一种。5.一种编码如权利要求3所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘项羽，刘国兴，李会，薛霜，徐松，郑成，徐丹丹，兖秦芳，石宝兰，谢红玲，漆世华，
申请(专利权)人：国药集团动物保健股份有限公司，
类型：发明
国别省市：